【摘要】：目的:建立基于超高效液相色譜-四極桿飛行時間質(zhì)譜聯(lián)用(UHPLC-Q/TOF-MS)技術的擬靶標細胞代謝組學方法,并將建立的方法用于雷公藤甲素誘導HepG2和L02的細胞毒性作用研究。方法:以雷公藤甲素誘導HepG2細胞為研究載體,建立擬靶標代謝組學方法:采用Luna Omega 1.6μPolar C_(18)(100×2.1mm)色譜柱,ESI源正、負離子模式檢測,首先對樣本進行非靶標全掃描分析,再針對發(fā)現(xiàn)的差異代謝物進行目標性擬靶標代謝組學。采用建立的方法,分別對雷公藤甲素誘導不同時間的HepG2細胞和L02細胞進行代謝組學分析,通過PCA、OPLS-DA等方法篩選差異代謝物,結合HMDB、METLIN等在線數(shù)據(jù)庫鑒定差異代謝物,采用MetaboAnalyst 4.0和KEGG對差異代謝物進行通路分析,根據(jù)K-Means聚類分析結合支持向量機分類方法和Pearson相關分析篩選雷公藤甲素對兩種細胞的毒性作用生物標志物。結果:與常規(guī)分析方法相比,對于雷公藤甲素誘導HepG2細胞前后鑒定的差異代謝物種類,擬靶標代謝組學方法增加7個,新發(fā)現(xiàn)16個,校正2個;對于作用通路研究,擬靶標代謝組學方法新發(fā)現(xiàn)丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代謝通路,且三羧酸循環(huán)和鞘脂代謝的通路貢獻率提高。雷公藤甲素誘導HepG2細胞不同時間代謝組學研究共鑒定出140個差異代謝物,篩選出5個潛在生物標志物,主要涉及氨基糖和核苷酸糖代謝、淀粉和蔗糖代謝,甘油磷脂代謝,嘌呤代謝和精氨酸、鳥氨酸代謝等。雷公藤甲素誘導L02細胞不同時間代謝組學研究共鑒定出82個差異代謝物,篩選出10個潛在生物標志物,主要涉及嘌呤代謝,谷胱甘肽代謝,甘油磷脂代謝,丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代謝等。兩種細胞代謝組學研究結果具有顯著差異,相同差異代謝物17個,不同差異代謝物205個,脂質(zhì)為顯著差異成分,谷胱甘肽為共有潛在生物標志物,涉及不同代謝通路7條,相同代謝通路2條。結論:本研究成功建立了UHPLC-Q/TOF-MS擬靶標代謝組學方法,該方法可豐富差異代謝物鑒定的種類,提高鑒定準確度,有利于作用通路研究。雷公藤甲素誘導HepG2細胞和L02細胞均與嘌呤代謝和甘油磷脂代謝有關,但涉及的代謝通路差異顯著,說明雷公藤甲素對HepG2細胞和L02細胞毒性作用存在差別,提示藥物肝毒性研究細胞選擇的重要性。
【圖文】：

擬靶標代謝組學方法的數(shù)據(jù)采集和處理流程圖

CCK-8測定不同濃度的雷公藤甲素對HepG2細胞的抑制率影響
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R285

【參考文獻】

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本文編號：2705625