【摘要】：側(cè)柏葉(Platycladi Cacumen)是一味具有多種藥用價值的傳統(tǒng)中藥,資源豐富,多部古代醫(yī)學(xué)著作記載其傳統(tǒng)功效。為進(jìn)一步明確側(cè)柏葉脂溶性成分的生發(fā)活性物質(zhì)基礎(chǔ),本文在查閱大量文獻(xiàn)基礎(chǔ)上,對側(cè)柏葉石油醚提取物中脂溶性成分進(jìn)行詳細(xì)的提取分離,對其揮發(fā)性成分進(jìn)行分析,并對其生發(fā)藥理活性進(jìn)行了研究;還對側(cè)柏葉粗多糖超聲提取工藝進(jìn)行了優(yōu)化,研究了側(cè)柏葉粗多糖體內(nèi)抗腫瘤活性,為側(cè)柏葉的深入開發(fā)和臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。具體研究內(nèi)容如下:文獻(xiàn)表明,側(cè)柏葉中主要含有黃酮類、揮發(fā)油、鞣質(zhì)等化學(xué)成分,關(guān)于黃酮類及揮發(fā)油成分提取、分離和含量測定的研究報道較多,但中藥側(cè)柏葉的化學(xué)成分研究仍然不充分。文獻(xiàn)報道側(cè)柏葉具有促進(jìn)毛發(fā)生長、止血、抗菌、抗氧化、抗腫瘤等藥理作用,但其潛在藥理作用也未得到深入研究開發(fā)。故側(cè)柏葉其他化學(xué)成分和藥理活性的探究具有極其廣闊的開發(fā)前景。化學(xué)成分方面,本論文采用正相硅膠柱色譜方法與凝膠Sephadex LH-20柱色譜方法相結(jié)合對側(cè)柏葉石油醚提取物中脂溶性小分子成分進(jìn)行提取、分離和純化,鑒定出兩個化合物異海松烯醇(化合物1)和紅松內(nèi)酯(化合物2)。其中異海松烯醇為首次從側(cè)柏葉中分離得到。并對側(cè)柏葉石油醚提取物進(jìn)行GC-MS分析,共鑒定出烯烴、醇、酮、醛、酯五類42種化合物,含量最多的是蒎烯。經(jīng)分析比對,分離鑒定出的兩種單體化合物,均未在GC-MS檢測的結(jié)果中,兩種化合物均具有極性小,脂溶性高且不易揮發(fā)的特點。同時將側(cè)柏葉去除脂溶性成分后的藥渣進(jìn)行充分提取,得到側(cè)柏葉大分子化合物粗多糖。根據(jù)單因素試驗的結(jié)果,選取超聲提取的溫度、超聲提取的時間和液料比三種顯著影響提取率的因素,采用響應(yīng)面法對側(cè)柏葉粗多糖提取工藝進(jìn)行優(yōu)化。試驗獲得的最佳提取條件是:提取溫度72℃,提取時間為67 min,液料比為19:1,側(cè)柏葉粗多糖的含量為6.87±0.18%。藥理活性方面,(1)側(cè)柏葉粗多糖的抗腫瘤活性研究:通過建立H_(22)小鼠皮下移植瘤模型,計算抑瘤率、脾臟指數(shù)及胸腺指數(shù),檢測血清中細(xì)胞因子水平和反應(yīng)機(jī)體的抗氧化能力,再進(jìn)一步根據(jù)組織切片HE染色法及Hoechst33258染色法,對側(cè)柏葉粗多糖的抗腫瘤活性及機(jī)理進(jìn)行初步探討。結(jié)果表明,側(cè)柏葉粗多糖低劑量組具有34.83%的抑瘤率,中劑量組42.70%的抑瘤率,高劑量組49.44%的抑瘤率。并且,側(cè)柏葉粗多糖具有保護(hù)機(jī)體免疫器官的功能,能夠調(diào)節(jié)H_(22)荷瘤小鼠血清中IL-2、TNF-α、IFN-γ的表達(dá)水平,側(cè)柏葉粗多糖還能夠降低血清中抗氧化活性指標(biāo)MDA含量并顯著提高CAT和SOD的活力,具有抗氧化作用,最終發(fā)揮抗腫瘤的活性。(2)側(cè)柏葉生發(fā)活性成分的研究:本論文對側(cè)柏葉石油醚提取物促進(jìn)毛發(fā)生長的藥理作用進(jìn)行研究,初步探討了所分離得到的異海松烯醇和紅松內(nèi)酯促進(jìn)毛發(fā)生長活性及其機(jī)理。采用松香-石蠟脫毛法建立脫發(fā)模型,檢測小鼠新生毛發(fā)的長度和重量及細(xì)胞因子VEGF以及TNF-α的水平,并顯微觀察新生毛發(fā)的毛囊形態(tài)改變。結(jié)果表明,紅松內(nèi)酯組對新生毛發(fā)長度增長的效果明顯(P0.01);異海松烯醇和紅松內(nèi)酯給藥組均顯著增加新生毛發(fā)的重量(P0.01)。側(cè)柏葉兩種脂溶性單體化合物和米諾地爾均顯著提高血清中VEGF水平(P0.01)且紅松內(nèi)酯給藥組血清中TNF-α的水平顯著升高(P0.05或0.01)。組織切片觀察結(jié)果說明,異海松烯醇和紅松內(nèi)酯可以提高毛囊的活力,保持毛囊正常的生長狀態(tài),具有促進(jìn)毛發(fā)生長的作用,其機(jī)制可能與血清中的VEGF含量等有關(guān)。結(jié)論,本文研究表明側(cè)柏葉粗多糖具有抗腫瘤活性,主要通過提高機(jī)體免疫功能和抗氧化能力來實現(xiàn)對腫瘤的抑制作用;側(cè)柏葉脂溶性化合物異海松烯醇和紅松內(nèi)酯具有顯著地促進(jìn)毛發(fā)生長的作用,明確了中藥側(cè)柏葉的生發(fā)活性物質(zhì)基礎(chǔ)。
【圖文】：

9圖1.1 側(cè)柏葉脂溶性化合物提取流程圖Fig.1.1 Extraction process of the liposolubility compounds from the Platycladi Cacumen1.3.2 側(cè)柏葉石油醚提取物的 GC-MS 分析色譜條件1.3.2.1 氣相色譜（GC）條件DB 25 彈性石英毛細(xì)管柱(30 m×250 μm×0.25 μm)；進(jìn)樣口溫度 260℃，升溫程序：初始柱溫 50℃，保持 3 min，再以 10℃/min 升溫至 280℃，280℃保持 10 min，載氣為高純He，，柱流量 1.0 mL/min，分流比 20:1；進(jìn)樣量 2 μL。1.3.2.2 質(zhì)譜（MS）條件EI 離子源

134.6 (C-13), 143.8 (C-14), 147.3 (C-8), 174.2 (C-16), 177.5 (C-19)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[556]報道一致，故鑒定化合物 2 為紅松內(nèi)酯（pinusolide）。1.4.3 側(cè)柏葉石油醚提取物 GC-MS 分析結(jié)果對側(cè)柏葉石油醚提取物進(jìn)行 GC-MS 分析，得到總離子流程圖（圖 1.2），采用數(shù)據(jù)自動檢索功能與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的質(zhì)譜比對，根據(jù)質(zhì)譜的裂解偶合數(shù)據(jù)確定化學(xué)結(jié)構(gòu)，應(yīng)用峰積歸一化法，計算不同組分百分含量。
【學(xué)位授予單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R284;R285

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2703340