【摘要】：近年來,多種血液疾病的發(fā)病率和死亡率呈現(xiàn)上升趨勢(shì)。目前,臨床上會(huì)使用造血細(xì)胞移植的方法來治療多種血液疾病,但單份骨髓和臍帶血中的造血細(xì)胞數(shù)量有限,難以滿足臨床需求,而且,所使用的治療血液疾病的藥物,大都具有一定的副作用。因此,本課題選用安全性高、無毒副作用的微藻源活性肽HP-6對(duì)造血細(xì)胞進(jìn)行功效與機(jī)理研究,同時(shí)對(duì)HP-6進(jìn)行體內(nèi)非臨床藥代動(dòng)力學(xué)研究。首先,選取健康Wistar大鼠,利用骨髓淋巴細(xì)胞分離液從大鼠骨髓中分離出造血細(xì)胞,并對(duì)造血細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)。接著將HP-6制備成0.0001mg/mL,0.001mg/mL,0.01mg/mL,0.1mg/mL,1mg/mL五個(gè)濃度梯度,在體外對(duì)造血細(xì)胞培養(yǎng)24h和48h,然后以磷酸鹽緩沖液(PBS)為對(duì)照,用噻唑藍(lán)(MTT)檢測(cè)造血細(xì)胞在給藥24h和48h后的增殖率。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,五個(gè)濃度梯度都可促進(jìn)造血細(xì)胞的增殖,并且隨濃度的增加增殖率呈現(xiàn)先增后減的趨勢(shì),其中24 h的增殖效果好于48h,濃度為0.01mg/mL時(shí)的促增殖效果最好,達(dá)到了48.79%。第二,在基因水平上,通過半定量PCR和實(shí)時(shí)熒光定量PCR的方法,分析HP-6處理的造血細(xì)胞增殖調(diào)控因子Foxm1的表達(dá)量。半定量PCR結(jié)果發(fā)現(xiàn),用不同濃度的HP-6處理造血細(xì)胞后,Foxm1基因的表達(dá)量有所提高。為了更準(zhǔn)確的了解HP-6對(duì)Foxm1基因表達(dá)量的影響,進(jìn)行了實(shí)時(shí)熒光定量PCR,其結(jié)果顯示不同濃度的HP-6可提高Foxm1基因的表達(dá)量,當(dāng)活性肽濃度為0.01 mg/mL時(shí),Foxm1基因的表達(dá)量是對(duì)照組(PBS)的1.76倍。因此,HP-6可以通過調(diào)節(jié)Foxm1基因的水平來促進(jìn)造血細(xì)胞的增殖。第三,對(duì)HP-6進(jìn)行非臨床藥代動(dòng)力學(xué)研究。大鼠經(jīng)腹腔注射10.0mg/kg活性肽HP-6,在1h、4h和24h后,利用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(LC-MS)檢測(cè)HP-6在大鼠體內(nèi)的組織分布情況;收集0-4h、4-8h、8-12h、12-24h、24-36 h、36-48h、48-72h時(shí)間段大鼠的排泄物,利用LC-MS檢測(cè)大鼠排泄物中HP-6的排泄情況。結(jié)果表明,大鼠經(jīng)腹腔注射10.0 mg/kg活性肽HP-6,在1 h、4h和24h后,大鼠的心、肝、脾、肺、腎、大腸、小腸、胃、腦、骨髓組織中檢測(cè)到HP-6,其中在骨髓中的含量最多;另外,在大鼠糞便中檢測(cè)到HP-6,其中在給藥24-36h時(shí)間段,糞便中HP-6的排出量最多,排泄速率也最大。綜上所述,本課題為以后實(shí)現(xiàn)HP-6的藥用價(jià)值提供了一定的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)與理論依據(jù)。
【圖文】：

重要作用；第三個(gè)階段是原始細(xì)胞和幼稚細(xì)胞階段，該階段細(xì)胞己失去自我更新逡逑和分化能力，可在造血組織中繼續(xù)發(fā)育，，然后進(jìn)入血液循環(huán)。造血干／祖細(xì)胞的具逡逑體發(fā)育過程如圖１－１所示。逡逑0紅細(xì)钷逡逑技紅細(xì)丨《￡逡逑邐＝１％？血小板逡逑Ｚ邐核細(xì)

本文編號(hào)：2703585