【摘要】：目的:建立兔腹主動(dòng)脈粥樣硬化DES置入模型,研究化痰活血解毒方對(duì)兔腹主動(dòng)脈DES置入后新生動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的影響。方法:1、建立兔腹主動(dòng)脈粥樣硬化DES置入模型及實(shí)驗(yàn)分組:選取雄性日本大耳白兔(清潔級(jí))40只預(yù)適應(yīng)飼養(yǎng)1W后進(jìn)行腹主動(dòng)脈球囊損傷,高脂飼料(基礎(chǔ)飼料中加入膽固醇5%,豬油5%,蛋黃粉3%)喂養(yǎng)8W,于腹主動(dòng)脈最狹窄處置入DES支架,隨機(jī)分為4組:模型組(MG組),瑞舒伐他汀組(RG組),化痰活血解毒方低劑量組(LG組),化痰活血解毒方高劑量組(HG組)。其中化痰活血解毒方藥物組成為:瓜蔞皮15g,薤白18g,皂角刺15g,血竭2g,紅曲25g,三七5g,忍冬藤25g,以上七味中藥,其中紅曲、血竭、三七碎成細(xì)粉狀;瓜蔞、皂角刺、忍冬藤、薤白加水反復(fù)煎三次,后濃縮為浸膏,然后加入上述細(xì)粉,真空干燥,粉碎,即得中藥,經(jīng)灌胃途徑給藥。各組給予相應(yīng)藥物干預(yù)24周。2、利用ELISA法檢測(cè)不同藥物干預(yù)24周后各組血清CRP、IL-6、MMP-9的表達(dá)水平。3、運(yùn)用OCT掃描成像技術(shù)觀察支架置入后支架段血管內(nèi)膜的情況:藥物干預(yù)24周后評(píng)價(jià)各組支架處血管管腔面積、新生內(nèi)膜厚度、新生內(nèi)膜面積等指標(biāo)。4、通過(guò)免疫組織化學(xué)法檢測(cè)各組血管的平滑肌肌動(dòng)蛋白(a-Actin)、平滑肌骨橋蛋白(OPN)、巨噬細(xì)胞CD68的表達(dá)。結(jié)果:1、動(dòng)物模型:高脂飼料喂養(yǎng)后實(shí)驗(yàn)兔體重均有所增加,后期體重基本不變。腹主動(dòng)脈球囊損傷后兔子共死亡4只,死亡原因考慮為應(yīng)激性損傷等。DES支架置入前行腹主動(dòng)脈造影顯示血管狹窄程度約為30~80%。手術(shù)后3天內(nèi)小部分實(shí)驗(yàn)兔出現(xiàn)精神淡漠,食欲不振的情況,3天后基本好轉(zhuǎn);余實(shí)驗(yàn)兔術(shù)后恢復(fù)良好,正常飲食。模型組兔子在DES置入術(shù)后立即死亡1只,猜測(cè)其死亡原因可能為血管應(yīng)激性痙攣等;化痰活血解毒方低劑量組兔子死亡2只,一只DES置入后即刻死亡,另一只于術(shù)后3天內(nèi)死亡,化痰活血解毒方組死亡一只,其死亡原因?yàn)樾g(shù)后手術(shù)傷口持續(xù)出血,考慮因縫合包扎手術(shù)創(chuàng)口時(shí)縫合線未結(jié)扎緊密有關(guān)。余各組實(shí)驗(yàn)兔狀態(tài)良好,直至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。兔腹主動(dòng)脈血管造影提示血管暢通,血流正常,支架貼壁良好。藥物干預(yù)過(guò)程中各實(shí)驗(yàn)兔精神狀態(tài)良好,毛發(fā)正常有光澤,進(jìn)食、二便等未見(jiàn)明顯異常,未見(jiàn)明顯藥物不良反應(yīng)。2、血清炎癥因子:與MG組相比,RG組、LG組與HG組CRP、IL-6的表達(dá)水平均低于MG組(P0.05);與RG組相比,LG組血清中CRP、IL-6的表達(dá)明顯低于RG組(P0.05),HG組的表達(dá)無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與LG組相比,HG組表達(dá)水平明顯較高(P0.05)。血清中MMP9的表達(dá)水平結(jié)果顯示:與MG組相比,RG組、LG組與HG組表達(dá)水平明顯低于MG組(P0.05);與RG組相比,LG組的表達(dá)明顯低于RG組(P0.05),HG組的表達(dá)稍高于RG組,但無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與LG組相比,HG組的表達(dá)高于LG組(P0.05)。3、OCT掃描:經(jīng)定量分析后結(jié)果顯示:與MG組相比,RG組、LG組、HG組的管腔面積均比MG組均大,LG組的管腔面積明顯較大(P0.05),RG組、HG組與MG組之間差異無(wú)明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);與RG組相比,LG組、HG組管腔面積無(wú)明顯差異(P0.05);與LG組相比,HG組無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。與MG組相比,RG組、LG組、HG組的新生內(nèi)膜面積及新生內(nèi)膜厚度均低于MG組,其中LG組的新生內(nèi)膜面積顯著降低(P0.05);與LG組相比,RG組、HG組的新生內(nèi)膜面積無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4、免疫組化染色:各組兔腹主動(dòng)脈支架段血管a-Actin免疫組化定量分析后結(jié)果顯示:與MG組相比,RG組a-Actin的陽(yáng)性表達(dá)稍高于RG組,但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);LG組a-Actin的陽(yáng)性表達(dá)明顯高于RG組(P0.05),HG組a-Actin的陽(yáng)性表達(dá)與RG組無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);LG組a-Actin的陽(yáng)性表達(dá)稍高于RG組,HG組a-Actin的陽(yáng)性表達(dá)稍低于RG組,但兩者與與RG組相比均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;HG組與LG組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。各組兔腹主動(dòng)脈支架段血管OPN、CD68免疫組化定量分析后結(jié)果顯示:RG組、LG組、HG組OPN、CD68的陽(yáng)性表達(dá)均顯著低于MG組,有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);LG組、HG組OPN、CD68的陽(yáng)性表達(dá)與RG組相比無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);RG組與HG組相比OPN、CD68的陽(yáng)性表達(dá)無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1、化痰活血解毒方可降低DES置入后血清炎癥因子CRP、IL-6、MMP9的表達(dá)水平,具有抑制炎癥反應(yīng)的作用,可抑制支架內(nèi)新生動(dòng)脈粥樣硬化的形成。2、化痰活血解毒方可抑制VSMC的表型轉(zhuǎn)化,抑制內(nèi)膜增殖及遷移;抑制巨噬細(xì)胞CD68的過(guò)表達(dá),具有抗支架內(nèi)新生動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的作用。
【圖文】：

圖 1 實(shí)驗(yàn)技術(shù)路線圖2.2 兔腹主動(dòng)脈藥物涂層支架置入模型的制備2.2.1兔腹主動(dòng)脈粥樣硬化模型首先選取健康雄性日本大耳白兔（清潔級(jí)）40 只，在本院動(dòng)物房飼養(yǎng)并進(jìn)行模型制備，每只兔子術(shù)前做好標(biāo)記。飼養(yǎng)環(huán)境:溫度 23 ℃ ～ 25 ℃，光照周期為12 h:12h，相對(duì)濕度為 50% ～ 60%，檢疫觀察預(yù)適應(yīng)喂養(yǎng) 1 周。腹主動(dòng)脈球囊損傷術(shù)：術(shù)前 3 天各組給予實(shí)驗(yàn)兔阿司匹林 25mg/d 灌胃，術(shù)前 24h 禁食。配制 10%水合氯醛 3-5ml/kg/只進(jìn)行腹腔注射麻醉。麻醉成功標(biāo)志：四肢癱軟、呼吸快慢均勻、角膜反射遲鈍。將實(shí)驗(yàn)兔綁置于兔臺(tái)上，用電推剪剪去右股動(dòng)脈周圍體毛，剃毛直徑約 5cm，碘伏紗布自手術(shù)中心向四周消毒 3 次并鋪巾，1%利多卡因針皮下局部麻醉。手術(shù)切開(kāi)右股動(dòng)脈搏動(dòng)處下發(fā)的皮膚，用直鉗及彎鉗縱行逐層鈍性分離右股動(dòng)脈，完全暴露手術(shù)處股動(dòng)脈約 2cm 長(zhǎng)度，手術(shù)用 4#線切 2 段約 3cm,一段于股動(dòng)脈遠(yuǎn)心端打結(jié)，另一段由助手輔助提拉股動(dòng)脈近心端線并將手術(shù)刀柄置于股動(dòng)脈下固定。直視下以 21G 橈動(dòng)脈穿刺針行股動(dòng)脈穿

結(jié)果1 模型的建立DES 置入術(shù)后 5 天內(nèi)小部分實(shí)驗(yàn)兔出現(xiàn)精神淡漠，食欲不振，后基本好轉(zhuǎn)；余實(shí)驗(yàn)兔術(shù)后恢復(fù)良好，飲食正常。高脂飼料喂養(yǎng)后實(shí)驗(yàn)兔體重均增加，后期體重增長(zhǎng)緩慢。球囊損傷術(shù)后兔腹主動(dòng)脈血管造影提示血管明顯狹窄（30%-80%）（見(jiàn)圖 2），8W 后于明顯狹窄處 DES 置入，在造影的透視下定位并釋放支架，造影顯示支架貼壁良好。至實(shí)驗(yàn)結(jié)束，，MG 組、RG 組及 LG 組兔成功造模各 8 只，HG 組兔成功造模 7 只。藥物干預(yù)后各實(shí)驗(yàn)兔精神狀態(tài)良好，毛發(fā)正常有光澤，進(jìn)食、二便等未見(jiàn)明顯異常，未見(jiàn)明顯藥物不良反應(yīng)。
【學(xué)位授予單位】：河南中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2702591