【摘要】：研究目的:建立二乙基亞硝胺誘導(dǎo)的斑馬魚(yú)肝纖維化模型,根據(jù)病理表現(xiàn)評(píng)價(jià)模型是否建立成功,并對(duì)肝指數(shù)、體重及谷草轉(zhuǎn)氨酶活性進(jìn)行檢測(cè),觀察二乙基亞硝胺對(duì)斑馬魚(yú)產(chǎn)生的影響。模型穩(wěn)定后,分別用新型抗肝纖維化藥物F3SM,GFT505,OCA,胡椒堿,膽寧片等進(jìn)行治療,治療結(jié)束后,通過(guò)肝臟組織病理切片,肝指數(shù)及體重變化對(duì)藥物治療進(jìn)行評(píng)價(jià)分析,以明確各組藥物對(duì)肝纖維化是否有治療作用,并通過(guò)檢測(cè)tgfbr2b,smad2等肝纖維化相關(guān)基因表達(dá)變化情況來(lái)初步探索藥物發(fā)揮治療作用的分子機(jī)制。研究方法:6月齡成年斑馬魚(yú),用溶解濃度為150mg/L的二乙基亞硝胺養(yǎng)殖水浸泡6周,構(gòu)建肝纖維化模型。模型建立成功及穩(wěn)定后,隨機(jī)分為F3SM組,GFT505組,OCA組,胡椒堿組,膽寧片組,陰性對(duì)照組,正常對(duì)照組,每組20條。對(duì)各組斑馬魚(yú)進(jìn)行治療,藥物劑量:F3SM組:25ug/d;GFT505組:25ug/d;OCA組:25ug/d;胡椒堿組:40ug/d;膽寧片組:90ug/d;陰性對(duì)照組及正常對(duì)照組普通飲食。治療3周后取肝組織測(cè)肝指數(shù),做病理切片,RT-qPCR法檢測(cè)tgfbr2b,smad2等肝纖維化相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄水平的變化。研究結(jié)果:二乙基亞硝胺染毒6周后,肝組織病理HE染色可見(jiàn)肝臟組織結(jié)構(gòu)紊亂,肝細(xì)胞變性壞死,有纖維結(jié)節(jié)形成,苦味酸天狼星紅染色可見(jiàn)明顯的膠原纖維沉積;肝指數(shù)及體重顯著下降;谷草轉(zhuǎn)氨酶無(wú)明顯變化。各藥物治療組HE染色可見(jiàn)纖維化病變程度減輕,范圍減小,苦味酸天狼星紅染色可見(jiàn)膠原纖維沉積較陰性對(duì)照組變化明顯。肝指數(shù)和體重方面:模型組與正常對(duì)照組相比,差異顯著;GFT505組和膽寧片組肝指數(shù)較陰性對(duì)照組均略有升高(P0.05),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;其余各治療組肝指數(shù)及體重與陰性對(duì)照組相比均升高,但不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。RT-qPCR結(jié)果:F3SM組:F3SM治療后,tgfbr2b基因表達(dá)下調(diào)(P0.01),具有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Smad2基因表達(dá)下調(diào)(P0.05),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;GFT505組:GFT505治療后,tgfbr2b基因表達(dá)水平下調(diào)(P0.05),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。smad2基因表達(dá)水平顯著下調(diào)(P0.01),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;OCA組:OCA治療后,tgfbr2b基因表達(dá)水平顯著下調(diào)(P0.01),具有顯著性差異。smad2基因表達(dá)水平下調(diào)(P0.001),具有極顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;胡椒堿組:胡椒堿治療后,tgfbr2b基因表達(dá)水平顯著下調(diào)(P0.01),具有顯著性差異,但smad2基因表達(dá)水平變化不顯著;膽寧片組:治療后,tgfbr2b基因表達(dá)顯著下調(diào)(P0.01),具有顯著性差異,但smad2基因表達(dá)水平變化不顯著。研究結(jié)論:利用150mg/L濃度的二乙基亞硝胺浸泡6月齡的斑馬魚(yú)成魚(yú),染毒6周后,成功建立了斑馬魚(yú)肝纖維化模型,該模型穩(wěn)定,重復(fù)性好;抗肝纖維化藥物治療3周后,病理顯示肝纖維化程度得到改善,各組藥物對(duì)二乙基亞硝胺誘導(dǎo)的肝纖維化斑馬魚(yú)有一定程度的治療效果;通過(guò)對(duì)tgfbr2b,smad2基因mRNA水平的檢測(cè),可推斷出各組藥物均能通過(guò)下調(diào)肝纖維化相關(guān)基因及TGF β-Smad信號(hào)通路發(fā)揮作用。
【圖文】：

３．邋１斑馬魚(yú)肝纖維化模型時(shí)效量效死亡率統(tǒng)計(jì)逡逑本實(shí)驗(yàn)對(duì)ＤＥＮ的不同染毒濃度、不同時(shí)間的斑馬魚(yú)的死亡率進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)研究（表１、逡逑圖１）。發(fā)現(xiàn)１７５ｍｇ／Ｌ邋ＤＥＮ和２００ｍｇ／Ｌ邋ＤＥＮ濃度組死亡率過(guò)高，而１００ｍｇ／Ｌ邋ＤＥＮ和１２５ｍｇ／Ｌ逡逑ＤＥＮ濃度組死亡率相對(duì)較低，但肝臟組織病理未見(jiàn)明顯纖維化改變。逡逑表１ＤＥＮ染毒不同濃度不同時(shí)間下斑馬魚(yú)死亡率逡逑濃度逡逑１００ｍｇ／Ｌ邐１２５ｍｇ／Ｌ邐１５０ｍｇ／Ｌ邐１７５ｍｇ／Ｌ邐２００ｍｇ／Ｌ逡逑時(shí)間逡逑１Ｗ邐０％邐０％邐１％邐６％邐６％逡逑２Ｗ邐０％邐５％邐１％邐２９％邐２９％逡逑３Ｗ邐１０％邐５％邐４％邐５２％邐５２％逡逑４Ｗ邐１０％邐５％邐５％邐５５％邐５２％逡逑５Ｗ邐１５％邐１０％邐１３％邐５５％邐６１％逡逑６Ｗ邐２５％邐２０％邐３０％邐５５％邐７１％逡逑８０－｜逡逑６０－逡逑▲邋ｗ邐%煎危鄭椋希睿椋紓戾義希掊危卞澹ⅲу澹椋礤義蟝W邋４０＿邐／邐＋邋２００ｍｇ／ｌ逡逑＾邋＾邋＾逡逑染毒時(shí)間逡逑圖１邋ＤＥＮ染毒不同濃度不同時(shí)間下斑馬魚(yú)死亡率逡逑３．２斑馬魚(yú)肝臟ＨＥ染色及苦味酸天狼星紅染色結(jié)果逡逑ＨＥ染色及苦味酸天狼星紅染色結(jié)果顯示（圖２），正常對(duì)照組ＨＥ染色可見(jiàn)肝臟組織逡逑結(jié)構(gòu)正常，肝細(xì)胞排列整齊，苦味酸天狼星紅染色未見(jiàn)紅色的膠原纖維合成及分泌增逡逑多。１５０ｍｇ／Ｌ邋ＤＥＮ處理組ＨＥ染色可見(jiàn)肝臟組織結(jié)構(gòu)紊亂，失去正常結(jié)構(gòu)，肝細(xì)胞變性壞逡逑死

圖１邋ＤＥＮ染毒不同濃度不同時(shí)間下斑馬魚(yú)死亡率逡逑３．２斑馬魚(yú)肝臟ＨＥ染色及苦味酸天狼星紅染色結(jié)果逡逑ＨＥ染色及苦味酸天狼星紅染色結(jié)果顯示（圖２），，正常對(duì)照組ＨＥ染色可見(jiàn)肝臟組織逡逑結(jié)構(gòu)正常，肝細(xì)胞排列整齊，苦味酸天狼星紅染色未見(jiàn)紅色的膠原纖維合成及分泌增逡逑多。１５０ｍｇ／Ｌ邋ＤＥＮ處理組ＨＥ染色可見(jiàn)肝臟組織結(jié)構(gòu)紊亂，失去正常結(jié)構(gòu)，肝細(xì)胞變性壞逡逑死，有纖維結(jié)節(jié)形成，苦味酸天狼星紅染色可見(jiàn)明顯的膠原纖維沉積。逡逑２４逡逑
【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R285.5

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本文編號(hào)：2701963