發(fā)布時(shí)間：2020-06-07 18:05

【摘要】：黃芪是中國傳統(tǒng)的中草藥,又是食藥兩用物品,所含黃芪皂苷具有抑制腫瘤生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移、血管生成與調(diào)節(jié)腫瘤免疫等功能。結(jié)直腸癌是消化道常見惡性腫瘤之一,其治療除了常規(guī)的外科切除、放療和化療手段以外,分子靶向藥也是一種有效的治療方式。PLKs,Polo樣激酶(polo-likekinases),是一種高保守絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶。哺乳動(dòng)物PLKs存在2個(gè)結(jié)構(gòu)域,N末端蛋白激酶結(jié)構(gòu)域和C末端polo-box結(jié)構(gòu)域,polo-box結(jié)構(gòu)域與底物結(jié)合和調(diào)節(jié)激酶活性有關(guān)。PLK2是細(xì)胞分裂的有效調(diào)節(jié)劑,參與細(xì)胞周期中心體的成熟、有絲分裂的進(jìn)入與染色體的分離等過程。本文首先探討黃芪皂苷對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞的作用效果:經(jīng)CCK8細(xì)胞活性實(shí)驗(yàn)、克隆形成實(shí)驗(yàn),顯示黃芪皂苷Ⅱ、異黃芪皂苷Ⅱ?qū)Y(jié)直腸癌細(xì)胞的增殖無影響(p0.05);經(jīng)transwell遷移實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)觀察黃芪皂苷對(duì)4種結(jié)直腸癌細(xì)胞系遷移能力的影響,表明黃芪皂苷Ⅱ?qū)Y(jié)直腸癌細(xì)胞DLD1、HCT116、HT29的遷移能力均有抑制作用(p0.05),對(duì)HCT15細(xì)胞的遷移能力無影響(p0.05);異黃芪皂苷Ⅱ僅對(duì)HCT116細(xì)胞的遷移具有抑制作用(p0.01),對(duì)其他腸癌細(xì)胞的遷移能力無影響(p0.05)。分析表明,相同條件下黃芪皂苷干預(yù)各類腸癌細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不同反應(yīng),表明細(xì)胞間具有異質(zhì)性。進(jìn)一步就黃芪皂苷對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞可能發(fā)揮的作用機(jī)制進(jìn)行探討:經(jīng)Western Blot實(shí)驗(yàn)、qRT-PCR實(shí)驗(yàn)表明,黃芪皂苷能夠下調(diào)表達(dá)PLK2,進(jìn)一步在DLD1細(xì)胞系上構(gòu)建敲降PLK2的慢病毒穩(wěn)定細(xì)胞株DLDl-shPLK2,經(jīng)細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,沉默PLK2的表達(dá)對(duì)DLD1的增殖無影響(p0.05),而對(duì)細(xì)胞的遷移能力有影響(p0.05);驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果與黃芪皂苷處理腸癌細(xì)胞的結(jié)果相一致。由此推測(cè),黃芪皂苷通過下調(diào)PLK2的表達(dá)抑制了腸癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移,從而為該物質(zhì)治療與應(yīng)用提供了依據(jù)。
【圖文】：

圖１－２２０１２年全球男性（上）和女性（下）結(jié)直腸癌死亡率的分布圖逡逑邋Ｇｌｏｂａｌ邋Ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ邋Ｃａｎｃｅｒ邋Ｍｏｒｔａｌｉｔｙ邋ｉｎ邋Ｍｅｎ邋（ａｂｏｖｅ）邋ａｎｄ邋Ｗｏｍｅｎ邋（ｂｅｌｏｗ癌發(fā)病率和死亡率的時(shí)間趨勢(shì)逡逑的結(jié)直腸癌發(fā)病率整體呈上升趨勢(shì)，但不同的國家增長(zhǎng)速增長(zhǎng)速率較緩，死亡率呈下降趨勢(shì)，如美國、澳大利亞、

邐ｓｃａｔ邋ｔｗｍ）逡逑ｔｍｍ邋＆ｍｎ逡逑圖２－１邋ｐＬＫＯ．ｌ－ＴＲＣ克隆載體逡逑Ｆｉｇ．２－１邋ｐＬＫＯ．ｌ－ＴＲＣ邋ｃｏｌｏｎ邋ｖｅｃｔｏｒ逡逑Ｍａｒｋｅｒ邋Ｓａｍｐｌｅ逡逑圖２－２酶切ｐＬＫＯ．ｌ－ＴＲＣ載體逡逑Ｆｉｇ．２－２邋Ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ邋ｐＬＫＯ．ｌ－ＴＲＣ邋ｃｏｌｏｎ邋ｖｅｃｔｏｒ逡逑（３）膠回收：回收凝膠電泳酶切載體。用ＴＩＡＮＧＥＮ邋ＤＮＡ純化試劑盒回收目的片段。逡逑膠回收步驟：①柱平衡：向吸附柱加入５００邋ｐＬ平衡液，１２０００邋ｒｐｎｉ離心１邋ｍｉｎ，，去離心管逡逑廢液；②稱量切下來的膠，加入等體積的ＰＣ溶液，５０°Ｃ水浴１０邋ｍｉｎ，在此期間溫和的上逡逑下倒置樣品，使膠充分溶解，將溶解后的膠溶液轉(zhuǎn)移至吸附柱收集管中；③〗２０００邋ｒｐｍ離逡逑
【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R285

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2701799