【摘要】：茵陳蒿湯出自東漢張仲景的《傷寒論》,由茵陳、梔子、大黃三味藥材組成,是臨床治療濕熱黃疸的名方�，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明,茵陳蒿湯也具有治療肝損傷、肝纖維化等保肝作用。然而,目前對(duì)于茵陳蒿湯化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)和保肝作用機(jī)理的研究尚不全面。本課題以茵陳蒿湯化學(xué)物質(zhì)組研究為基礎(chǔ),進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究,初步探討其保肝作用機(jī)制,并在網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)結(jié)果的指導(dǎo)下開展相關(guān)藥材活性成分的體外、體內(nèi)定量研究。本文的研究?jī)?nèi)容主要分為以下四個(gè)部分:一、茵陳蒿湯化學(xué)成分的快速鑒別:UHPLC-Q-TOF/MS是一種靈敏度高、定性能力強(qiáng)的液質(zhì)聯(lián)用技術(shù),可在較短時(shí)間內(nèi)對(duì)復(fù)雜體系進(jìn)行快速分離和鑒定。本研究將這項(xiàng)技術(shù)應(yīng)用于茵陳蒿湯水煎液中化學(xué)成分的快速鑒別。實(shí)驗(yàn)中采用ACQUITY UPLC HSS T3色譜柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm)分離,0.1%甲酸水溶液-0.1%甲酸乙腈溶液系統(tǒng)梯度洗脫,分別在正、負(fù)離子模式下采集質(zhì)譜信息,對(duì)照已建立的茵陳蒿湯化學(xué)成分庫進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,共鑒別得到茵陳蒿湯中140種化學(xué)成分,為下一步網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究奠定基礎(chǔ)。二、基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的茵陳蒿湯“成分-靶標(biāo)”相互作用網(wǎng)絡(luò)分析:本研究首先通過化學(xué)物質(zhì)組學(xué)和文本挖掘方法,從茵陳蒿湯中篩選了18個(gè)代表性的保肝活性成分。然后,應(yīng)用HTDocking Anti-Liver Fibrosis平臺(tái)對(duì)這些化合物的潛在靶標(biāo)進(jìn)行預(yù)測(cè),得到成分-靶標(biāo)對(duì)信息。最后,采用可視化軟件Cytoscape構(gòu)建茵陳蒿湯保肝作用的“成分-靶標(biāo)”相互作用網(wǎng)絡(luò),推測(cè)茵陳蒿湯主要通過抑制肝星狀細(xì)胞的增殖和活化、抗氧化應(yīng)激等方式發(fā)揮保肝作用。三、茵陳蒿湯的體外定量分析:大量研究表明茵陳蒿湯中的濱蒿內(nèi)酯、兒茶素、綠原酸、東莨菪內(nèi)酯、金絲桃苷、秦皮乙素、京尼平苷、槲皮素、京尼平、大黃酸、蘆薈大黃素、大黃酚、大黃素和大黃素甲醚均有保肝的功效。本研究采用HPLC-DAD技術(shù),應(yīng)用Agilent Eclipse Plus C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色譜柱進(jìn)行分離,乙腈-0.1%磷酸水溶液系統(tǒng)梯度洗脫,對(duì)茵陳蒿湯中14種化學(xué)成分進(jìn)行含量測(cè)定。3批茵陳蒿湯中濱蒿內(nèi)酯、兒茶素、綠原酸、東莨菪內(nèi)酯、金絲桃苷、秦皮乙素、京尼平苷、槲皮素、京尼平、大黃酸、蘆薈大黃素、大黃酚、大黃素、大黃素甲醚14個(gè)成分的含量測(cè)定結(jié)果分別為0.136~0.168、0.080~0.104、0.403~0.470、0.008~0.009、0.061~0.068、0.020~0.027、0.269~0.306、0.036~0.048、0.005~0.006、0.122~0.164、0.037~0.044、0.030~0.037、0.011~0.014、0.007~0.010 mg·g-1。本章建立了一種便捷、通用的定量分析方法,可用于不同批次茵陳蒿湯的含量測(cè)定和質(zhì)量控制研究。四、茵陳蒿湯中8種成分在正常與急性肝損傷大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)比較研究:中藥復(fù)方口服給藥后,血漿中有效成分的含量與治療效果有直接關(guān)系,且疾病狀態(tài)對(duì)藥物的體內(nèi)過程有顯著影響。本研究基于UHPLC-MS/MS技術(shù),建立了一種單次灌胃給藥茵陳蒿湯后,大鼠血漿中濱蒿內(nèi)酯、東莨菪內(nèi)酯、京尼平苷、大黃酸、大黃素、蘆薈大黃素、大黃酚和大黃素甲醚8種成分的含量測(cè)定方法,并將這種方法應(yīng)用于正常和急性肝損傷大鼠灌胃給藥茵陳蒿湯后的比較藥動(dòng)學(xué)研究。研究結(jié)果表明,疾病狀態(tài)影響濱蒿內(nèi)酯、京尼平苷、蘆薈大黃素、大黃酸、大黃酚、大黃素甲醚的體內(nèi)過程,對(duì)東莨菪內(nèi)酯和大黃素沒有顯著影響。此研究為日后茵陳蒿湯的臨床安全、合理用藥提供一定的參考。綜上所述,本研究在明確了茵陳蒿湯的化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)上,通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)構(gòu)建“成分-靶標(biāo)”網(wǎng)絡(luò),闡釋茵陳蒿湯保肝作用機(jī)制。進(jìn)一步采用HPLC-DAD方法對(duì)茵陳蒿湯中具有保肝作用的14個(gè)化合物進(jìn)行體外定量研究,并建立了進(jìn)入大鼠血漿中的8種成分的定量方法。通過構(gòu)建急性肝損傷模型大鼠,比較研究茵陳蒿湯在正常和疾病大鼠體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)行為,說明藥物體內(nèi)過程會(huì)受到肝損傷疾病的影響。本研究為茵陳蒿湯的質(zhì)量控制和臨床合理用藥提供了參考,也為中藥復(fù)方現(xiàn)代化研究提供了新的思路。
【圖文】：

按照上述液相和質(zhì)譜的測(cè)試條件進(jìn)行樣品分析，得到茵陳蒿湯樣品溶液的正、負(fù)離子模式下的總離子流圖，如圖1-1 所示。圖 1-1 茵陳蒿湯提取物正、負(fù)離子模式下的總離子流圖Figure 1-1 The total ion chromatograms under positive and negative ion modes of YinChen Hao Tang extract by UHPLC-Q-TOF/MS從茵陳蒿湯樣品溶液的 UHPLC-Q-TOF/MS 總離子流圖中，提取分子量與數(shù)據(jù)庫中化合物相符的色譜峰，利用質(zhì)譜測(cè)得的準(zhǔn)分子離子峰的精確質(zhì)量數(shù)與建立的成分?jǐn)?shù)

茵陳蒿湯網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)與藥效物質(zhì)基（三）茵陳蒿湯“成分-靶標(biāo)”網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建據(jù)高通量對(duì)接得到的茵陳蒿湯活性化合物靶標(biāo)信息，，構(gòu)建“成分-靶標(biāo)”網(wǎng)表現(xiàn)中藥復(fù)方“多成分-多靶標(biāo)”的作用特點(diǎn)，揭示復(fù)方配伍起效的機(jī)制。構(gòu)如圖 2-1 所示，該圖包含 71 個(gè)節(jié)點(diǎn)：綠色菱形節(jié)點(diǎn)代表茵陳蒿湯的 18 個(gè)；矩形節(jié)點(diǎn)代表對(duì)接的靶點(diǎn)，其中紅色的矩形代表至少有 10 個(gè)代表性化靶點(diǎn)相關(guān)，藍(lán)色的矩形代表 4-9 個(gè)代表性化合物與這個(gè)靶點(diǎn)相關(guān)，黃色的于 4 個(gè)代表性化合物與這個(gè)靶點(diǎn)相關(guān)。圖中包括 303 條邊，表明共有 30靶標(biāo)對(duì)信息。
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2700220