【摘要】：目的:觀察六味地黃湯及其3個(gè)“一補(bǔ)一瀉”藥對(duì)干預(yù)絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥(PMOP)模型大鼠及其股骨和腎臟中骨保護(hù)素(OPG)及核因子κB受體活化因子配體(RANKL)的影響,并比較六味地黃湯及“酒萸肉-丹皮”藥對(duì)中莫諾苷的含量的差異,明確六味地黃湯干預(yù)PMOP的作用及其機(jī)制、藥效成分以及組方規(guī)律,進(jìn)而為六味地黃湯的臨床用藥提供實(shí)驗(yàn)依據(jù),豐富六味地黃湯“補(bǔ)瀉”藥對(duì)配伍理論。方法:1.將3-4月齡SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、六味地黃湯組、酒萸肉-丹皮組、山藥-茯苓組、熟地-澤瀉組、阿侖膦酸鈉組(陽(yáng)性藥物組)。除假手術(shù)組外,其余各組大鼠均采用摘除雙側(cè)卵巢的方法制備PMOP大鼠模型。造模后第16 d開(kāi)始,各組按相應(yīng)劑量連續(xù)灌胃給藥90天,每周觀察各組大鼠體重的變化,檢測(cè)模型大鼠骨密度(BMD)值、血清雌二醇(E2)水平、血鈣(Ca)及血磷(P)含量、堿性磷酸酶(ALP)及血清抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)水平。2.采用免疫組化法檢測(cè)大鼠股骨成骨細(xì)胞和腎臟腎小管上皮細(xì)胞中OPG、RANKL蛋白的表達(dá)。3.采用高效液相色譜法(流動(dòng)相為甲醇:水(24:76);體積流量1.0 m L/min;柱溫30℃;進(jìn)樣量10μL;檢測(cè)波長(zhǎng)為236nm)測(cè)定六味地黃湯及其酒萸肉-丹皮組藥對(duì)中莫諾苷成分的含量。結(jié)果:1.與模型組比較,六味地黃湯組可顯著提高PMOP模型大鼠的BMD值,升高模型大鼠的E2水平(P0.05),提高模型大鼠的血P、Ca含量(P0.05),降低模型大鼠的TRAP、ALP水平(P0.05);與六味地黃湯組比較,酒萸肉-丹皮藥對(duì)組沒(méi)有顯著性差異(P0.05),但實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)略低于六味地黃湯組;山藥-茯苓藥對(duì)組及熟地-澤瀉組有顯著性差異(P0.05)。2.與模型組比較,六味地黃湯組能上調(diào)股骨成骨細(xì)胞及腎臟腎小管上皮細(xì)胞中的OPG的蛋白表達(dá)、下調(diào)RANKL的蛋白表達(dá)(P0.05);酒萸肉-丹皮藥對(duì)僅能上調(diào)股骨成骨細(xì)胞中OPG的蛋白表達(dá)、下調(diào)RANKL的蛋白表達(dá)(P0.05)。3.酒萸肉-丹皮藥對(duì)中所含的莫諾苷濃度在0.480~7.680μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系(r=0.9993);平均回收率為102.79%,RSD值為1.73%;莫諾苷在六味地黃湯中含量為0.897%,在酒萸肉-丹皮藥對(duì)中含量為0.780%。結(jié)論:1.六味地黃湯可升高血磷、血鈣含量,降低血清ALP、TRAP水平,調(diào)節(jié)骨吸收和骨形成的骨代謝平衡,從而干預(yù)PMOP,且酒萸肉-丹皮藥對(duì)為該方干預(yù)PMOP的主要藥效組成部分之一。2.六味地黃湯干預(yù)PMOP的機(jī)制之一可能與其方中酒萸肉-丹皮藥對(duì)調(diào)節(jié)股骨中的OPG及RANKL的蛋白表達(dá)有關(guān)。3.六味地黃湯中莫諾苷的含量較酒萸肉-丹皮藥對(duì)略有增加,這可能是六味地黃湯全方干預(yù)PMOP的作用要優(yōu)于酒萸肉-丹皮藥對(duì)的原因之一。
【圖文】：

表1絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥模型模型大鼠股骨成骨細(xì)胞中OPG、RANKL灰度值變化（ x±s，n=6）組別 劑量 OPG RANKL假手術(shù)組 / 150.87±6.03 143.67±19.56模型組 / 176.8±4.36&& 105.13±25.48&&六味地黃湯組 6.75 g/kg 159.5±3.24**138.47±23.37**酒萸肉-丹皮組 1.89 g/kg 164.33±21.44*134.73±14.97**熟地-澤瀉組 2.97 g/kg 170.7±10.26△124.87±18.07△山藥-茯苓組 1.89 g/kg 172.17±9.18△123.93±4.83△阿侖膦酸鈉組 6.3 mg/kg 155.8±3.56**141.7±4.92**注：與假手術(shù)組比較，&P<0.05，&&P<0.01；與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01；與六味地黃湯比較，△P<0.05，，△△P<0.01

組別 劑量 OPG RANKL假手術(shù)組 / 150.87±6.03 143.67±19.56模型組 / 176.8±4.36&& 105.13±25.48&&六味地黃湯組 6.75 g/kg 159.5±3.24**138.47±23.37**酒萸肉-丹皮組 1.89 g/kg 164.33±21.44*134.73±14.97**熟地-澤瀉組 2.97 g/kg 170.7±10.26△124.87±18.07△山藥-茯苓組 1.89 g/kg 172.17±9.18△123.93±4.83△阿侖膦酸鈉組 6.3 mg/kg 155.8±3.56**141.7±4.92**注：與假手術(shù)組比較，&P<0.05，&&P<0.01；與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01；與六味地黃湯比較，△P<0.05，△△P<0.01圖 1 股骨成骨細(xì)胞免疫組化染色 OPG 蛋白表達(dá)（×200）
【學(xué)位授予單位】：湖南中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R285.5;R-332

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2700211