【摘要】：研究背景及目的肝纖維化是多種原因引起的慢性肝損害所致的病理改變,表現(xiàn)為肝內(nèi)細(xì)胞外間質(zhì)成分過度異常地沉積,并影響肝臟的功能,是慢性肝病發(fā)展到肝硬化必經(jīng)之階段。肝纖維化發(fā)病過程中,肝星狀細(xì)胞的活化增殖是核心環(huán)節(jié)。雖然現(xiàn)己明確肝纖維化是個可逆的過程,但是現(xiàn)代醫(yī)學(xué)臨床上迄今仍沒有能夠逆轉(zhuǎn)它的藥物。“肝纖維化”當(dāng)屬于中醫(yī)“ve積”、“脅痛”等病范疇,近年來各項研究表明中藥復(fù)方、中藥單藥及某些中藥成分或提取物在抗肝纖維化治療中發(fā)揮了良好的作用。中藥虎杖為蓼科植物虎杖的干燥根及根莖,藥用歷史悠久�，F(xiàn)代研究認(rèn)為虎杖清熱利濕解毒之功與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)中的保肝利膽、抗菌、抗病毒作用相關(guān),但尚無實驗研究揭示虎杖抗肝纖維化的作用及具體機(jī)制。據(jù)此,本實驗以活化的大鼠肝星狀細(xì)胞HSC-T6為體外細(xì)胞模型,采用細(xì)胞活性與藥物分離相結(jié)合的方法,對虎杖抗肝纖維化作用及活性成分進(jìn)行探究,以期從虎杖中發(fā)掘出明確具有抗肝纖維化作用的有效成分,從而為研制出抗肝纖維化的藥物提供依據(jù)。研究方法1.藥物分離、鑒定技術(shù)(1)水提法制備得到虎杖浸膏,依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇對浸膏進(jìn)行萃取,分別得到各極性部位;(2)采用溶劑系統(tǒng)分離法結(jié)合高效液相色譜法,對各極性部位分離;對分離得到的單體進(jìn)一步純化;(3)應(yīng)用現(xiàn)代波譜技術(shù)(質(zhì)譜法、核磁共振波譜法等)對上述獲得單體化合物進(jìn)行鑒定和分析,確定其化學(xué)結(jié)構(gòu)。2.活性驗證細(xì)胞模型:大鼠肝星狀細(xì)胞HSC-T6細(xì)胞株(1)CCK-8試劑盒檢測各極性部位對HSC-T6細(xì)胞活化增殖的影響;(2)采用5-乙炔基-2'脫氧尿嘧啶核苷(EdU)染色法,熒光顯微鏡下觀察有效成分對HSC-T6細(xì)胞增殖的影響;(3)免疫印跡法(Western Blot)檢測細(xì)胞Bcl-2、Bax蛋白的表達(dá)變化。3.數(shù)據(jù)統(tǒng)計計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,采用SPSS21.0軟件包分析數(shù)據(jù),以P0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。實驗結(jié)果1.虎杖乙酸乙酯部位對HSC-T6細(xì)胞增殖有較強(qiáng)的抑制作用,石油醚部位次之,正丁醇部位作用較弱;2.從虎杖乙酸乙酯部位分離得到大量淡黃色針狀晶體,經(jīng)鑒定其結(jié)構(gòu)為大黃素甲醚;3.與對照組相比,大黃素甲醚可抑制HSC-T6細(xì)胞增殖,且呈濃度依賴性;4.EdU染色實驗中,大黃素甲醚組陽性細(xì)胞數(shù)目及所占比例均顯著小于對照組(P0.001);5.Western Blot結(jié)果顯示大黃素甲醚在10μmol/L和20μmol/L時可降低Bcl-2表達(dá)水平(P0.001),同時升高Bax水平(P0.001)。
【圖文】：

邐第二章前期實驗基礎(chǔ)２．部分中藥單體化合物結(jié)構(gòu)鑒定逡逑２．１白花丹：白花丹酸逡逑從白花丹乙酸乙酯部位分離得到大量黃色油狀物，經(jīng)鑒定為白花丹酸，分逡逑子式為ｃ？ｈ９ｎ３ｏ３。逡逑Ａ逡逑

圖３－１虎杖萃取物制備流程圖逡逑Ｆｉｇ．３－１邋Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ邋ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ邋ｏｆ邋Ｐｏｌｙｇｏｎｕｍ邋ｃｕｓｐｉｄａｔｕｍ逡逑２．１實驗材料逡逑２．１．１藥材：上步制備所得虎杖干浸膏。逡逑２．１．２試劑：石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、甲醇，均為分析純試劑，，購自廣州化逡逑學(xué)試劑廠。逡逑２．１．３儀器：５Ｌ分液漏斗，ＥＹＥＬＡ旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀系統(tǒng)（具體規(guī)格同表３－１）。逡逑２９逡逑
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2699646