【摘要】：目的:實驗研究金水六君煎及其拆方對COPD陰虛痰飲證模型大鼠的影響,檢測其血清IFN-γ、IL-1β、IL-4、TNF-α含量變化,觀察其黏蛋白MUC5AC,MUC5B基因表達的變化,探討金水六君煎治療COPD陰虛痰飲證的作用機制,為金水六君煎治療COPD陰虛痰飲證的臨床應(yīng)用提供實驗依據(jù)。方法:從60只清潔級SD雄性大鼠中隨機抽選10只作為空白組;其余50只為造模組。對造模組大鼠采用氣道內(nèi)滴入脂多糖+煙熏+肌肉注射地塞米松的方法制備COPD大鼠陰虛痰飲證模型。造模成功后,將造模組大鼠隨機分為模型組、金水六君煎組(全方組)、養(yǎng)陰組、化痰組、阿奇霉素組,每組10只�？瞻捉M,模型組大鼠采用生理鹽水灌胃,其余四組分別給予等量相應(yīng)藥物治療,連續(xù)用藥14天。動態(tài)觀察整個實驗過程中各組大鼠的一般情況。末次灌胃后禁食12h處死大鼠,采集血液與肺組織標(biāo)本。應(yīng)用蘇木精-伊紅(HE)染色和Masson染色觀察肺組織炎癥及纖維化情況;采用過碘酸雪夫(PAS)染色計算杯狀細胞數(shù)量;通過免疫組化觀察肺組織MUC5AC,MUC5B蛋白表達;通過ELISA檢測血清IFN-γ、IL-1β、IL-4、TNF-α含量變化;通過RT-PCR觀察肺組織黏蛋白(MUC5AC、MUC5B)基因表達的變化。結(jié)果:1.各組大鼠一般情況的變化:與模型組對比,各治療組大鼠呼吸頻率減慢,氣喘,煩躁易激惹等癥狀均有減輕,活動度較之前增強,二便情況均有改善。2.各組大鼠肺組織病理學(xué)變化:空白組無明顯變化。模型組呈明顯炎細胞浸潤。與模型組相比,各治療組炎癥及纖維化情況得到改善。3.與正常組比較,模型組IFN-γ含量明顯增加(P0.05),IL-1β、IL-4、TNF-a含量變化無明顯差異。與模型組比較,全方組、養(yǎng)陰組及化痰組IFN-γ含量均明顯減少(P0.05);全方組及養(yǎng)陰組TNF-α含量增多(P0.05);各組IL-β、IL-4表達無明顯差異。4.氣道杯狀細胞計數(shù):模型組大鼠支氣管上皮杯狀細胞的數(shù)量顯著高于空白組[(90.17±16.47)個vs(16.00±10.20)個,P0.05];全方組,化痰組,阿奇霉素組大鼠支氣管上皮杯狀細胞的數(shù)量均低于模型組[(58.17±22.99)個vs(90.17±16.47)個,(58.33±23.48)個vs(90.17±16.47)個,(60.07±18.47)個vs(90.17±16.47)個,P均0.05];養(yǎng)陰組大鼠支氣管上皮杯狀細胞的數(shù)量與模型組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義[(87.07±15.47)個vs(90.17±16.47)個,P0.05];全方組,化痰組和阿奇霉素組的杯狀細胞數(shù)量差異無統(tǒng)計學(xué)意義[(58.17±22.99)個vs(60.07±18.47)個,(58.33±23.48)個vs(60.07±18.47)個,P均0.05]。5.MUC5AC mRNA,MUC5B mRNA的表達變化:與空白組相比,模型組大鼠黏蛋白MUC5AC mRNA,MUC5B mRNA表達顯著上升[(5.44±2.84)vs(1.08±0.74),(5.61±1.91)vs(1.09±0.56),P均0.05];與模型組相比,全方組,化痰組,養(yǎng)陰組,阿奇霉素組大鼠黏蛋白MUC5AC mRNA,MUC5B mRNA表達均下調(diào)(P均0.05);與阿奇霉素組相比,全方組能顯著下調(diào)MUC5AC mRNA,MUC5B mRNA表達(P0.05)。結(jié)論:提示COPD陰虛痰飲證大鼠模型存在炎癥反應(yīng)與黏蛋白MUC5AC、MUC5B基因高表達。金水六君煎能減少IFN-γ含量,減少黏蛋白MUC5AC,MUC5B的分泌,在轉(zhuǎn)錄水平抑制COPD陰虛痰飲模型MUC5ACmRNA、MUC5B mRNA的表達。
【圖文】：

⑶RNA 的瓊脂糖凝膠電泳電泳槽用 3%的雙氧水（處理 0.5h；配制１%變性瓊脂糖凝膠20ml 1xTAE buffer，加熱至瓊脂糖溶解，冷至 60℃,加入 0.5核酸染料，混勻后倒膠；取 3μl 提取的 RNA，按 1:5 的比例與premix 混勻，，140V 恒壓電泳，溴酚藍前沿遷移至凝膠總長 2/3膠成像系統(tǒng)下觀察。條帶由上至下依次為 28s，18s，5s，說明 RNA 完整性較好（定容至 100ul，在 260nm 與 280nm 處測其吸光度值，并計算濃度（ng/ul）=A260*稀釋倍數(shù)*40，濃度在 100ng/ul-5=OD260/OD280，比值在 1.8-2.0 之間均可。

湖南中醫(yī)藥大學(xué)整。⑵模型組大鼠 HE 染色可見有大小不等的肺小泡形成，肺泡間隔破壞，小支氣管擴張，氣管上皮粘膜脫落，管腔內(nèi)炎性分泌物，氣管壁變型，管壁周圍及肺間質(zhì)可見淋巴細胞及中性粒細胞浸潤。⑶全方組，化痰組，養(yǎng)陰組，阿奇霉素組呈輕度炎癥變化，支氣管黏膜未見明顯脫落，基底膜增厚不顯著，支氣管管壁以及周圍炎性細胞浸潤等癥狀得以改善。⑷養(yǎng)陰組呈輕度炎性改變，可見支氣管黏膜脫落。如圖 2，圖 3。
【學(xué)位授予單位】：湖南中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 熊英;張金娟;李玲;陳燕;吳艷俊;黃惠妍;;香煙煙霧對慢性阻塞性肺疾病大鼠肺功能及血清細胞因子水平影響[J];實驗動物與比較醫(yī)學(xué);2017年04期

2 段敏超;韓偉;;Th17細胞與Th1細胞在慢性阻塞性肺疾病炎癥發(fā)病機制中的調(diào)控作用[J];國際免疫學(xué)雜志;2016年06期

3 梁建華;;長期吸煙慢性阻塞性肺疾病患者炎癥因子表達水平與體質(zhì)量指數(shù)的相關(guān)性研究[J];國際呼吸雜志;2016年19期

4 陶和平;涂小金;李順文;黃淑華;朱彬;祝兵兵;萬小芳;;黏液高分泌對慢性阻塞性肺疾病轉(zhuǎn)歸的預(yù)測價值[J];中國現(xiàn)代醫(yī)生;2015年33期

5 顧文超;袁亞平;;血清IL-8、TNF-α在慢性阻塞性肺疾病中的作用[J];中國生化藥物雜志;2014年09期

6 韓利紅;張國俊;;老年慢性阻塞性肺疾病患者血清細胞因子及細胞免疫的水平及意義[J];中國老年學(xué)雜志;2014年21期

7 虞玉英;胡克崇;徐慧芳;;布地奈德聯(lián)合孟魯司特鈉對慢性阻塞性肺疾病患者肺功能及血清中IL-6、IL-8和TNF-α的影響[J];中國生化藥物雜志;2014年07期

8 侯嘉;馬偉榮;劉潔;段喻;鄭西衛(wèi);;慢性阻塞性肺疾病患者肺組織和血清HMGB1的表達及與TNF-α和IL-1β的相關(guān)性[J];中國老年學(xué)雜志;2014年18期

9 夏炳江;童培建;孫燕;周羅瑜;金紅婷;;地塞米松致骨質(zhì)疏松腎陰虛型病證結(jié)合模型構(gòu)建與評價的實驗研究[J];中國骨傷;2014年08期

10 王華英;翁躍頌;應(yīng)華娟;俞萬鈞;;慢性阻塞性肺疾病患者Th17/Treg細胞失衡與肺功能相關(guān)性研究[J];中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志;2014年07期

本文編號：2699500