【摘要】：目的:實(shí)驗(yàn)研究金水六君煎及其拆方對(duì)COPD陰虛痰飲證模型大鼠的影響,檢測(cè)其血清IFN-γ、IL-1β、IL-4、TNF-α含量變化,觀察其黏蛋白MUC5AC,MUC5B基因表達(dá)的變化,探討金水六君煎治療COPD陰虛痰飲證的作用機(jī)制,為金水六君煎治療COPD陰虛痰飲證的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:從60只清潔級(jí)SD雄性大鼠中隨機(jī)抽選10只作為空白組;其余50只為造模組。對(duì)造模組大鼠采用氣道內(nèi)滴入脂多糖+煙熏+肌肉注射地塞米松的方法制備COPD大鼠陰虛痰飲證模型。造模成功后,將造模組大鼠隨機(jī)分為模型組、金水六君煎組(全方組)、養(yǎng)陰組、化痰組、阿奇霉素組,每組10只�？瞻捉M,模型組大鼠采用生理鹽水灌胃,其余四組分別給予等量相應(yīng)藥物治療,連續(xù)用藥14天。動(dòng)態(tài)觀察整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中各組大鼠的一般情況。末次灌胃后禁食12h處死大鼠,采集血液與肺組織標(biāo)本。應(yīng)用蘇木精-伊紅(HE)染色和Masson染色觀察肺組織炎癥及纖維化情況;采用過碘酸雪夫(PAS)染色計(jì)算杯狀細(xì)胞數(shù)量;通過免疫組化觀察肺組織MUC5AC,MUC5B蛋白表達(dá);通過ELISA檢測(cè)血清IFN-γ、IL-1β、IL-4、TNF-α含量變化;通過RT-PCR觀察肺組織黏蛋白(MUC5AC、MUC5B)基因表達(dá)的變化。結(jié)果:1.各組大鼠一般情況的變化:與模型組對(duì)比,各治療組大鼠呼吸頻率減慢,氣喘,煩躁易激惹等癥狀均有減輕,活動(dòng)度較之前增強(qiáng),二便情況均有改善。2.各組大鼠肺組織病理學(xué)變化:空白組無明顯變化。模型組呈明顯炎細(xì)胞浸潤。與模型組相比,各治療組炎癥及纖維化情況得到改善。3.與正常組比較,模型組IFN-γ含量明顯增加(P0.05),IL-1β、IL-4、TNF-a含量變化無明顯差異。與模型組比較,全方組、養(yǎng)陰組及化痰組IFN-γ含量均明顯減少(P0.05);全方組及養(yǎng)陰組TNF-α含量增多(P0.05);各組IL-β、IL-4表達(dá)無明顯差異。4.氣道杯狀細(xì)胞計(jì)數(shù):模型組大鼠支氣管上皮杯狀細(xì)胞的數(shù)量顯著高于空白組[(90.17±16.47)個(gè)vs(16.00±10.20)個(gè),P0.05];全方組,化痰組,阿奇霉素組大鼠支氣管上皮杯狀細(xì)胞的數(shù)量均低于模型組[(58.17±22.99)個(gè)vs(90.17±16.47)個(gè),(58.33±23.48)個(gè)vs(90.17±16.47)個(gè),(60.07±18.47)個(gè)vs(90.17±16.47)個(gè),P均0.05];養(yǎng)陰組大鼠支氣管上皮杯狀細(xì)胞的數(shù)量與模型組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[(87.07±15.47)個(gè)vs(90.17±16.47)個(gè),P0.05];全方組,化痰組和阿奇霉素組的杯狀細(xì)胞數(shù)量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[(58.17±22.99)個(gè)vs(60.07±18.47)個(gè),(58.33±23.48)個(gè)vs(60.07±18.47)個(gè),P均0.05]。5.MUC5AC mRNA,MUC5B mRNA的表達(dá)變化:與空白組相比,模型組大鼠黏蛋白MUC5AC mRNA,MUC5B mRNA表達(dá)顯著上升[(5.44±2.84)vs(1.08±0.74),(5.61±1.91)vs(1.09±0.56),P均0.05];與模型組相比,全方組,化痰組,養(yǎng)陰組,阿奇霉素組大鼠黏蛋白MUC5AC mRNA,MUC5B mRNA表達(dá)均下調(diào)(P均0.05);與阿奇霉素組相比,全方組能顯著下調(diào)MUC5AC mRNA,MUC5B mRNA表達(dá)(P0.05)。結(jié)論:提示COPD陰虛痰飲證大鼠模型存在炎癥反應(yīng)與黏蛋白MUC5AC、MUC5B基因高表達(dá)。金水六君煎能減少IFN-γ含量,減少黏蛋白MUC5AC,MUC5B的分泌,在轉(zhuǎn)錄水平抑制COPD陰虛痰飲模型MUC5ACmRNA、MUC5B mRNA的表達(dá)。
【圖文】：

⑶RNA 的瓊脂糖凝膠電泳電泳槽用 3%的雙氧水（處理 0.5h；配制１%變性瓊脂糖凝膠20ml 1xTAE buffer，加熱至瓊脂糖溶解，冷至 60℃,加入 0.5核酸染料，混勻后倒膠；取 3μl 提取的 RNA，按 1:5 的比例與premix 混勻，，140V 恒壓電泳，溴酚藍(lán)前沿遷移至凝膠總長 2/3膠成像系統(tǒng)下觀察。條帶由上至下依次為 28s，18s，5s，說明 RNA 完整性較好（定容至 100ul，在 260nm 與 280nm 處測(cè)其吸光度值，并計(jì)算濃度（ng/ul）=A260*稀釋倍數(shù)*40，濃度在 100ng/ul-5=OD260/OD280，比值在 1.8-2.0 之間均可。

湖南中醫(yī)藥大學(xué)整。⑵模型組大鼠 HE 染色可見有大小不等的肺小泡形成，肺泡間隔破壞，小支氣管擴(kuò)張，氣管上皮粘膜脫落，管腔內(nèi)炎性分泌物，氣管壁變型，管壁周圍及肺間質(zhì)可見淋巴細(xì)胞及中性粒細(xì)胞浸潤。⑶全方組，化痰組，養(yǎng)陰組，阿奇霉素組呈輕度炎癥變化，支氣管黏膜未見明顯脫落，基底膜增厚不顯著，支氣管管壁以及周圍炎性細(xì)胞浸潤等癥狀得以改善。⑷養(yǎng)陰組呈輕度炎性改變，可見支氣管黏膜脫落。如圖 2，圖 3。
【學(xué)位授予單位】：湖南中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2699500