【摘要】：研究背景和目的:毛雞酒(MJ)是一種傳統(tǒng)保健酒,在民間常用于補血,但其補血作用及機(jī)制尚未報道。本研究旨在探討MJ對乙酰苯肼(APH)和環(huán)磷酰胺(CTX)聯(lián)合所致血虛模型大鼠的補血作用,并基于代謝組學(xué)技術(shù)分析血虛模型大鼠血漿中代謝物的變化,以期闡明MJ的補血作用機(jī)制,為MJ的進(jìn)一步研發(fā)和臨床應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。方法:36只SPF級雌性SD大鼠隨機(jī)分為6組:正常對照組,模型組,復(fù)方阿膠漿組(FEJ,劑量為6.0 mL/kg),毛雞酒高、中、低劑量組(MJ-H、MJ-M、MJ-L,劑量分別為10.0 mL/kg、5.0 mL/kg、2.5 mL/kg),每組6只。除正常對照組外,其余各組大鼠均皮下注射APH和腹腔注射CTX復(fù)制血虛大鼠模型。給藥10 d后,采血,處死大鼠,解剖收集肝臟、胸腺、脾臟和肺。分別采用全自動血細(xì)胞分析儀檢測大鼠外周血樣品中白細(xì)胞(WBC)、紅細(xì)胞(RBC)、血紅蛋白(HGB)、紅細(xì)胞壓積(HCT)和血小板(PLT);比重法計算肝臟指數(shù)、胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)和肺指數(shù);試劑盒法測定肝臟組織中超氧化物歧化酶(SOD)活力、總抗氧化能力(T-AOC)和丙二醛(MDA)含量;HE染色法觀察脾臟組織病理學(xué)變化;免疫組化法檢測脾臟組織中Bcl-2和Bax蛋白表達(dá)。采用超高效液相色譜-四極桿飛行時間質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(UHPLC-Q/TOF-MS)檢測正常對照組、模型組、MJ-H、MJ-M和MJ-L組大鼠血漿中的代謝物,應(yīng)用主成分分析法(PCA)、正交偏最小二乘法-判別分析(OPLS-DA)和t檢驗篩選血漿中差異代謝物,尋找潛在的生物標(biāo)志物,結(jié)合生物標(biāo)志物涉及的代謝通路,闡明MJ的補血作用機(jī)制。結(jié)果:(1)MJ對血虛模型大鼠外周血指標(biāo)的影響:與正常對照組比較,模型組的外周血WBC、RBC、HGB、HCT和PLT均顯著降低(P0.01);與模型組比較,FEJ、MJ-H和MJ-M的WBC、RBC、HGB和HCT均顯著升高(P0.05),MJ-L的WBC、RBC、HGB和HCT均有一定程度升高,但僅RBC的升高具有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。MJ各劑量組的PLT與模型組的差異無統(tǒng)計學(xué)意義。(2)MJ對血虛模型大鼠臟器指數(shù)的影響:與正常對照組比較,模型組的肝臟指數(shù)和脾臟指數(shù)均顯著升高(P0.01),胸腺指數(shù)顯著降低(P0.01);與模型組比較,FEJ和MJ各劑量組的肝臟指數(shù)和脾臟指數(shù)有降低趨勢,胸腺指數(shù)有升高趨勢。正常對照組、FEJ和MJ各劑量組的肺指數(shù)與模型組的差異無統(tǒng)計學(xué)意義。(3)MJ對血虛模型大鼠肝臟組織中SOD、T-AOC和MDA的影響:與正常對照組比較,模型組的T-AOC顯著降低(P0.01),MDA含量顯著升高(P0.01);與模型組比較,FEJ、MJ-H、MJ-M和MJ-L的T-AOC顯著升高(P0.05),FEJ、MJ-H和MJ-M的MDA顯著降低(P0.05)。正常對照組、FEJ和MJ各劑量組的SOD活力與模型組的差異無統(tǒng)計學(xué)意義。(4)MJ對血虛模型大鼠脾臟組織中Bcl-2和Bax蛋白表達(dá)的影響:與正常對照組比較,模型組大鼠脾臟組織中Bcl-2、Bax蛋白的表達(dá)和Bcl-2/Bax比值均顯著降低(P0.05);與模型組比較,FEJ、MJ-H和MJ-M大鼠脾臟組織中Bcl-2蛋白的表達(dá)和Bcl-2/Bax比值均顯著升高(P0.05),FEJ和MJ-H大鼠脾臟組織中的Bax蛋白表達(dá)顯著升高(P0.05)。(5)血虛模型大鼠血漿的代謝組學(xué)分析:在PCA得分圖和OPLS-DA得分圖中正常對照組和模型組大鼠血漿的樣本點均完全分離,說明造模后大鼠血漿中代謝物發(fā)生了變化,從代謝物的變化說明血虛大鼠模型復(fù)制成功。根據(jù)代謝物在OPLS-DA的變量投影重要度(VIP)和t檢驗從大鼠血漿中篩選出15種潛在生物標(biāo)志物。模型組與正常對照組相比,血漿中尿嘧啶、5-L-谷氨酰-L-丙氨酸、胞嘧啶核苷、L-谷氨酸、L-精氨酸、乳清酸、尿苷、膽紅素、原卟啉和亞油酸的相對強(qiáng)度顯著升高(P0.05),氧化谷胱甘肽、吡啶甲酸、L-色氨酸、5-羥基吲哚乙酸和鄰甲酰氨基苯甲酸的相對強(qiáng)度顯著降低(P0.05);MJ治療組與模型組相比,血漿中尿嘧啶、5-L-谷氨酰-L-丙氨酸、胞嘧啶核苷、L-谷氨酸、L-精氨酸、乳清酸、尿苷、膽紅素、原卟啉和亞油酸的相對強(qiáng)度均有不同程度降低,氧化谷胱甘肽、吡啶甲酸、L-色氨酸、5-羥基吲哚乙酸和鄰甲酰氨基苯甲酸的相對強(qiáng)度具有不同程度升高,有趨于正常對照組趨勢。通過代謝通路分析,結(jié)果顯示以上潛在生物標(biāo)志物與亞油酸代謝、D-谷氨酰胺和D-谷氨酸代謝、丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代謝、色氨酸代謝、精氨酸和脯氨酸代謝、谷胱甘肽代謝、卟啉和葉綠素代謝和嘧啶代謝等代謝通路相關(guān)。結(jié)論:MJ對APH和CTX聯(lián)合導(dǎo)致的血虛模型大鼠有一定的治療作用,表現(xiàn)為外周血常規(guī)的改善,肝臟指數(shù)、胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)的回調(diào),脾臟抗氧化能力的增強(qiáng)損傷和實質(zhì)損傷的減輕。通過代謝組學(xué)方法證明MJ的補血作用與調(diào)節(jié)亞油酸代謝,D-谷氨酰胺和D-谷氨酸代謝,丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代謝,色氨酸代謝,精氨酸和脯氨酸代謝,谷胱甘肽代謝,卟啉和葉綠素代謝,嘧啶代謝等代謝通路的異常相關(guān),說明將代謝組學(xué)在中藥復(fù)方療效和機(jī)制的研究中是一種有很有前途的技術(shù)。
【圖文】：

圖 1-1 HE 染色法觀察 MJ 對血虛模型大鼠脾臟組織結(jié)構(gòu)的影響（HE 染色，200×）ure 1-1 Effects of MJ on the histological structure in spleen tissues of blood deficiency mode(HE staining, 200×)(A：正常對照組，，B：模型組，C：FEJ，D：MJ-H，E：MJ-M，F(xiàn)：MJ-L）(A: control group, B: model group, C: FEJ, D: MJ-H, E: MJ-M, F: MJ-L）

圖 1-2 MJ 對血虛模型大鼠脾臟組織 Bcl-2 蛋白表達(dá)的影響（免疫組化染色，200×）igure 1-2 Effects of MJ on expression of Bcl-2 in spleen tissues of blood deficiency model r(Immunohistochemical staining, 200×)（A：正常對照組，B：模型組，C：FEJ，D：MJ-H，E：MJ-M，F(xiàn)：MJ-L）（A: control group, B: model group, C: FEJ, D: MJ-H, E: MJ-M, F: MJ-L）
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2699479