【摘要】：背景:非酒精性脂肪性肝病(Nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)全球患病率在逐年升高,造成嚴(yán)重的臨床和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān),已成為全球性健康問題。目前尚無完全確切的治療方法與基于充足證據(jù)的臨床指南以支持某藥的治療效果,開發(fā)新型藥物是健康所趨,腸-肝軸成為NAFLD新型治療方式。目的:本文以腸-肝軸為切入點(diǎn),研究田黃方對NAFLD小鼠糖脂代謝紊亂的機(jī)制可能是改善腸道屏障功能和膽汁酸代謝。方法:1.C57/BL 6J雄性小鼠給予20周高脂飲食,誘導(dǎo)建立NAFLD模型,隨機(jī)分組為正常組、高脂模型組、陽性藥阿托伐他汀鈣組、田黃方低劑量組、田黃方高劑量組,給予12周的灌胃治療;2.稱量小鼠體重、肝重量、肌肉重量,肝臟和睪周脂肪組織HE染色、肝臟油紅O染色;3.采用試劑盒檢測小鼠空腹血糖、胰島素、糖耐量試驗(yàn)和血漿中TG、TC、HDL-C、LDL-C的含量;RT-PCR檢測脂質(zhì)生成基因Perlipin2、CD36、C/EBPα、FAS、SCD1、PPARα、lipin1等脂質(zhì)代謝相關(guān)基因表達(dá)量;4.ELISA檢測血漿中LPS含量,Western blot檢測其信號下游TLR4、NF-κB蛋白在肝臟表達(dá)量,RT-PCR檢測肝臟中炎癥相關(guān)基因表達(dá)量;5.收集小鼠糞便,采用16SrDNA測序檢測田黃方對腸道微生物豐度、多樣性、某些與代謝相關(guān)菌落豐度的影響;6.采用RT-PCR、Western blot和免疫熒光檢測田黃方對小腸、大腸中緊密連接分子(Calduin-7、occludin、Calduin-1、Calduin-2、Calduin-3、Calduin-4、Calduin-18)基因和蛋白的表達(dá)情況以及Proglucagon、GLP-2mRNA的表達(dá)情況;7.采用RT-PCR檢測田黃方對小腸、大腸中TNFα、IL-6、IL-1β、IL-10等炎癥基因表達(dá)的影響;8.采用RT-PCR檢測田黃方對肝臟和腸道中FXR、SHP、FGFR4、FGF15、CYP7A1、CYP7B1、CYP8B1等膽汁酸代謝相關(guān)基因表達(dá)的影響。結(jié)果:1.造模過程中,高脂飲食小鼠體重持續(xù)增加;高脂模型組小鼠的空腹血糖、胰島素、HOMA-IR、血漿中TG、TC含量較正常飲食組均顯著性升高;2.與高脂飲食模型組相比,田黃方可明顯減少肝臟重量、脾指數(shù),肝臟HE染色和油紅O染色脂滴減少,睪周脂肪HE染色的細(xì)胞體積明顯減小;3.與高脂飲食模型組相比,田黃方可顯著性降低空腹血糖、胰島素、HOMA-IR、曲線下面積和血漿中TG、TC、LDL-C水平,顯著性升高血漿中HDL-C;田黃方可顯著性降低肝臟中TG、TG含量和perlipin2、C/EBPα、CD36、FAS、SCD1 mRNA表達(dá)量,顯著性升高肝臟中PPARα、lipin1和ACOX-1 mRNA表達(dá)量;4.與高脂飲食模型組相比,田黃方可顯著性降低血漿中LPS含量,降低肝臟中TLR4、NF-κB和TNFα、IL-6、IL-1β的mRNA表達(dá)量;5.與高脂飲食模型組相比,田黃方可降低腸道微生物OTUs、Shannon index,降低厚壁菌門豐度、厚壁菌門/擬桿菌門比例,顯著性升高疣微菌門的豐度;6.與高脂飲食模型組相比,田黃方可升高小腸、大腸中claudin-7、occludin、ZO-1、GLP2、GCG的mRNA表達(dá)量,增加腸道中緊密連接分子claudin-7、occludin、ZO-1、Claudin-1、Claudin-2、Claudin-3、Claudin-4的蛋白表達(dá);7.與高脂飲食模型組相比,田黃方可降低小腸、大腸中TNFα、IL-6、IL-1βmRNA表達(dá)量,升高IL-10 mRNA表達(dá)量;8.與高脂飲食模型組相比,田黃方可抑制肝臟和腸道中FXR、SHP、FGFR4和FGF15 mRNA表達(dá)量,升高肝臟中膽汁酸合成酶CYP7A1、CYP7B1、CYP8B1 mRNA表達(dá)量。結(jié)論:1.田黃方可顯著改善NAFLD小鼠的脂質(zhì)沉積、胰島素抵抗、脂質(zhì)代謝紊亂和肝臟炎癥;2.其機(jī)制與改善腸道生物屏障、機(jī)械屏障、免疫屏障和膽汁酸代謝有關(guān)。
【圖文】：

廣東藥科大學(xué)碩士畢業(yè)論文第一章 序言1.1 研究背景1.1.1 NAFLD 的簡介非酒精性脂肪性肝病(Nonalcoholic fatty liver disease, NAFLD)是一種與胰島素抵抗和遺傳易感密切相關(guān)的代謝應(yīng)激性肝臟損傷，疾病譜包括非酒精性單純性脂肪肝、非酒精性脂肪性肝炎（Nonalco-holic steatohepatitis, NASH）及其肝硬化和肝癌。肝細(xì)胞中脂質(zhì)過度沉積引起脂肪變性，進(jìn)而出現(xiàn) NASH 的炎癥反應(yīng)、肝細(xì)胞壞死和纖維化，最后導(dǎo)致肝癌。

圖 1-2 膳食因素、腸道菌群與腸屏障損害共同作用于 NAFLDFigure1-2.The interplay between dietary factors, gut microbiota, and gut barrier damage in thedevelopment of NAFLD[37]按照腸屏障防御功能的不同可分為微生物屏障、機(jī)械屏障（連接分子）和免屏障。腸道微生物約有 1014個細(xì)菌和古生菌，一千多個物種，，總重量約有 1-2g[38]。腸道微生物紊亂包含微生物群落數(shù)量和種類的變化、代謝活性和分布的改[39, 40]，菌群失調(diào)在 NAFLD 病理生理中產(chǎn)生重大的影響。在近 30 年研究中，腸
【學(xué)位授予單位】：廣東藥科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5

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本文編號：2699319