【摘要】：目的:對(duì)中藥注射劑中的大分子蛋白質(zhì)進(jìn)行檢查是嚴(yán)格控制中藥注射劑質(zhì)量、減少中藥注射劑不良反應(yīng)發(fā)生的重要手段。現(xiàn)行的2015年版中國藥典采用磺基水楊酸比濁法檢查中藥注射劑中的大分子蛋白質(zhì),該方法簡(jiǎn)單易行、快速直觀,但靈敏度低、專屬性差,在檢查含有增溶性輔料的中藥注射劑時(shí)易出現(xiàn)假陽性結(jié)果。本實(shí)驗(yàn)在課題組前期研究的基礎(chǔ)上,采用柱切換技術(shù)建立二維高效液相色譜法,通過全面優(yōu)化該方法的實(shí)驗(yàn)條件,測(cè)試該方法的工作性能,考察該方法對(duì)增溶性輔料吐溫-80和丙二醇的耐受濃度,實(shí)現(xiàn)對(duì)中藥注射劑中大分子蛋白質(zhì)的快速準(zhǔn)確檢查。方法:1.通過對(duì)色譜柱類型、流動(dòng)相種類、流速、柱切換時(shí)間等實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行優(yōu)化,確定閥切換時(shí)間,建立二維高效液相色譜體系,并對(duì)該體系的性能進(jìn)行測(cè)試。2.對(duì)二維高效液相色譜系統(tǒng)進(jìn)行方法學(xué)考察。綜合考慮注射劑組方種類以及是否添加增溶性輔料,最終確定了市售的28種45個(gè)批次的中藥注射劑作為研究對(duì)象,利用該方法對(duì)所有中藥注射劑樣品進(jìn)行檢測(cè),將檢測(cè)結(jié)果同藥典方法進(jìn)行比較,從而對(duì)市場(chǎng)上中藥注射劑產(chǎn)品的質(zhì)量進(jìn)行評(píng)價(jià)。3.通過對(duì)人為添加不同濃度吐溫-80和丙二醇的樣品及標(biāo)準(zhǔn)品溶液進(jìn)行檢查,考察確定該方法對(duì)增溶性輔料的耐受程度。結(jié)果:1.實(shí)驗(yàn)建立了二維高效液相色譜體系,經(jīng)過實(shí)驗(yàn)優(yōu)化確定了實(shí)驗(yàn)條件。第一維預(yù)處理色譜條件:色譜柱:Asahipak ODP-50 4E Guard-Columns(4.6× 10mm);流動(dòng)相:A甲醇,B0.1%磷酸溶液。梯度洗脫:0-2min70%B-70%B,2-12min 70%B-0%B,12-17 min 0%B-70%B,17-20 min 70%B-70%B;檢測(cè)波長(zhǎng) 280 nm;流速1mL/min。第二維分析色譜條件:色譜柱:TSKgel 5000 PWxl(7.8×300 mm,5μm);流動(dòng)相:0.1mol·L-1硫酸鈉和0.1mol·L-1磷酸緩沖鹽等體積混合液(含30%甲醇);檢測(cè)波長(zhǎng)280nm;流速:0.8mL·min-1。六通閥切換時(shí)間確定為10s-30s。2.二維高效液相色譜法的專屬性、線性、重復(fù)性、精密度等結(jié)果均符合要求。本實(shí)驗(yàn)共選擇市售28種共45個(gè)批次的中藥注射劑進(jìn)行檢測(cè),并人為設(shè)定了含量限度,檢測(cè)結(jié)果表明所有中藥注射劑均合格,此外二維高效液相色譜法可以耐受的吐溫-80濃度8%,而相同濃度的丙二醇對(duì)方法沒有影響,表明大部分的中藥注射劑可以利用此方法得以準(zhǔn)確檢測(cè)。結(jié)論:本研究針對(duì)藥典磺基水楊酸比濁法檢測(cè)中藥注射劑中大分子蛋白質(zhì)易出現(xiàn)假陽性的問題,建立了二維高效液相色譜法,該方法在準(zhǔn)確度和靈敏度方面有了較大提高。本研究為中藥注射劑中的大分子蛋白檢查提供了新方法,為中藥注射劑的質(zhì)量控制提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
【圖文】：

邐在樣品測(cè)逡逑定過程中，ｌｍＬ中藥注射液被稀釋了邋２５倍，即相當(dāng)于中藥注射液中大分子蛋逡逑白的限量值為２０陽迎！／１。ＴＳＫ凝膠高效液相色譜圖見圖１－２。最后選取幾十批逡逑市售中藥注射劑進(jìn)行檢測(cè)，將兩步凝膠法同磺基水楊酸比濁法的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行逡逑比較發(fā)現(xiàn)，兩方法的檢測(cè)結(jié)果基本一致也說明了本實(shí)驗(yàn)建立方法的可靠性。逡逑ｅ．粉逡逑0，祁，逡逑0潘邐３逡逑0．邋＾逡逑光邋￡３．３０－逡逑Ｂ．逡逑0．．邋２０＇邐Ａ逡逑／邋＼逡逑枿．邐Ｉ邋＼逡逑？？丨。．邐Ｉ邐＼逡逑Ｑ．ｆ３Ｓ＊邐！邐＼逡逑ＤＤ，＊ｃ＃邋ｍｍ邋ｏｏｖｐｓ邋ｍｍ邋ｏｄ？邋ｕ邋{潰錚錚輳椋翦澹恚潁礤，

本文編號(hào)：2699151