基于“病證—效應(yīng)—生物樣本分析”方法的炮姜溫經(jīng)止血藥效及其歸經(jīng)研究

發(fā)布時(shí)間：2020-06-06 02:18

【摘要】：目的:觀察炮姜水煎液對(duì)虛寒性出血大鼠模型溫經(jīng)止血的藥效,闡明其溫經(jīng)止血的物質(zhì)基礎(chǔ),通過觀察其指標(biāo)成分虛寒性出血大鼠模型體內(nèi)的代謝分布,討論炮姜的歸經(jīng)。方法:1炮姜對(duì)脾胃虛寒出血證大鼠止血藥理作用觀察與溫中止血功效物質(zhì)研究:SD雄性大鼠72只隨機(jī)分成6組,每組12只。分別為模型組,陽性對(duì)照組,炮姜水煎液高、中、低劑量組以及空白對(duì)照組。第一天除空白對(duì)照組外,其余各組50%乙醇1ml/100g灌胃,空白對(duì)照組灌飲用水。第一天起每日觀察大鼠體重、大便性狀及便血指證并每天測(cè)量動(dòng)物體溫。模型組、高低劑量組上午灌胃4℃的食醋每只1ml/100g,連續(xù)灌胃10天。在第7天給予模型組大鼠0.6mg/100g消炎痛,灌胃處理。后7天每天下午給藥組(高低劑量、正常給藥組)分別灌胃相應(yīng)的藥物。第14天解剖,觀察胃、小腸病理變化,觀察黏膜損害程度,做病理切片觀察其病理改變。末次給藥60分鐘后采集血清、臟腑組織進(jìn)行化學(xué)分析。用新鮮全血進(jìn)行ELisa試劑盒胃動(dòng)素(MTL)、胃泌素(GAS)檢測(cè),凝血四項(xiàng)指標(biāo),包括凝血酶原時(shí)間(prothrombin time,PT),活化部分凝血活酶時(shí)間(activated partial thromboplastin time,APTT),凝血酶時(shí)間(thrombin time,TT),以及血漿纖維蛋白原(fibrinogen,FIB)等各項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)測(cè)試,并將臟器組織進(jìn)行HPLC分析,與藥材及標(biāo)品HPLC對(duì)照,研究炮姜進(jìn)入臟器組織的功效物質(zhì)、成分代謝產(chǎn)物等,認(rèn)識(shí)炮姜溫中止血的藥效物質(zhì)及其歸經(jīng)。2炮姜對(duì)虛寒性子宮出血證大鼠止血藥理作用觀察與溫經(jīng)止血功效物質(zhì)研究:將健康未孕的雌鼠100只與50只雄鼠于17:00時(shí)按2:1的比例合籠,次日上午8:00進(jìn)行陰道檢查,以雌鼠陰部發(fā)現(xiàn)陰栓為妊娠第1天,取受孕大鼠60只,隨機(jī)分為5組,每組12只,分別為模型組,陽性對(duì)照組,炮姜高、中、低劑量組,以及12只正常雌鼠為空白對(duì)照組。于第7天分別灌胃米非司酮(8∶00)和米索前列醇(18∶00),同時(shí)于陰道內(nèi)置入定量棉球一個(gè),每日于8∶00和18∶00將棉球取出,,同時(shí)放置一個(gè)新的定量棉球于大鼠陰道內(nèi),連續(xù)14天觀察陰道出血情況,米非司酮配伍米索前列醇灌胃早孕大鼠,可致早孕大鼠不全流產(chǎn)。除正常對(duì)照組外,其余各組動(dòng)物均按上述方法造模。在大鼠平時(shí)飲用水中并放入適量冰塊,冷凍大鼠飼料,以此造成大鼠虛寒性癥狀,造模成功后,于造模第8日各組動(dòng)物開始ig給藥,每天1次,連續(xù)7d。觀察其對(duì)子宮出血的治療作用,第14天,末次給藥后1h,取血及各組織,處死大鼠,將每日收集的每鼠陰道棉球進(jìn)行出血量測(cè)定。用新鮮全血測(cè)定四項(xiàng)凝血指標(biāo)PT、APTT、TT、FIB。各臟器稱重,各組大鼠子宮做病理切片進(jìn)行分析比較。結(jié)果:1本次實(shí)驗(yàn)所制備的模型脾胃虛寒出血證大鼠均出現(xiàn)了體重減輕,飲食量減少,被毛發(fā)黃稀少,有柏油樣大便,以及大便黏滯污濁,腹部腫脹,精神倦怠,模型組大鼠血清中的MTL、GAS測(cè)定值,以及凝血四項(xiàng)指數(shù)均明顯延長(zhǎng),這與臨床中脾胃虛寒性出血的表現(xiàn)基本相一致,模型組胃大小腸也出現(xiàn)了相應(yīng)的炎癥及出血情況且組內(nèi)比重偏高。給藥后,對(duì)比模型組,各模型給藥組大鼠的飲食量和體重明顯增加,柏油樣黑便現(xiàn)象明顯減少,體重由下降變?yōu)榫徛鲩L(zhǎng),凝血時(shí)間顯著縮短,精神較之前喜動(dòng),癥狀有了明顯改善。胃動(dòng)素、胃泌素含量顯著升高,脾胃虛寒癥狀有所改善。便隱血現(xiàn)象逐漸減少,凝血四項(xiàng)指標(biāo)顯著改善,出血癥狀有所緩解,病理組織較模型組完好,病理改變輕且淺,有恢復(fù)空白對(duì)照組織的傾向。因此,本實(shí)驗(yàn)初步證明炮姜對(duì)于虛寒性出血具有治療作用。2虛寒性子宮出血模型組大鼠形體較空白對(duì)照組明顯體重偏輕,身體瘦弱,被毛干枯,皮膚蒼白無血色,精神倦怠,大便黏滯質(zhì)稀,體溫較低,宮溫偏高,飲食量減少,體重增長(zhǎng)慢,捉持時(shí)無力,每日出血量偏多且出血時(shí)間長(zhǎng),凝血時(shí)間明顯延長(zhǎng),凝血四項(xiàng)數(shù)值較空白對(duì)照組偏高,表明子宮虛寒出血模型制備成功。模型組中存在崩漏下血大鼠,出血量異常,死亡率高,也存在雌鼠淋漓不盡,點(diǎn)滴出血不止,子宮出血遷延不愈時(shí)間較別的造模組比較明顯偏長(zhǎng)。炮姜各劑量組在給藥后上述情況均有所改善,飲食量逐漸增加,體重增長(zhǎng)加快,毛色逐漸有光澤,皮膚逐漸出現(xiàn)血色,出血量較模型組少,出血凝血時(shí)間縮短。由此可見炮姜可以明顯改善虛寒性子宮出血的癥狀,炮姜確實(shí)具有溫經(jīng)止血的療效,因此可以應(yīng)用于虛寒性子宮出血證。結(jié)論:1炮姜藥效實(shí)驗(yàn)中,炮姜具有良好的溫經(jīng)止血藥效,能夠有效改善模型組大鼠所表現(xiàn)出的虛寒性出血癥狀。2炮姜溫中止血物質(zhì)基礎(chǔ)研究及其組織分布實(shí)驗(yàn)中,建立HPLC的方法測(cè)定血清中所含炮姜的藥效物質(zhì)基礎(chǔ),結(jié)果發(fā)現(xiàn)姜酮、6-姜酚、6-姜烯酚、8-姜酚、8-姜烯酚、10-姜烯酚,說明此六種成分為炮姜溫經(jīng)止血藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。結(jié)合藥動(dòng)學(xué)參數(shù)觀察炮姜這六種代表性成分在脾胃虛寒大鼠體內(nèi)的分布,炮姜中姜辣素的姜酮、6-姜酚、6-姜烯酚、8-姜酚、8-姜烯酚、10-姜烯酚這六種成分,在肝、脾、胃、小腸的選擇性是很高的,尤其是脾和肝,由此可以猜測(cè)炮姜可能入脾、胃、肝經(jīng)。
【圖文】：

色譜圖,姜酮,色譜圖,歸經(jīng)