【摘要】：目的:探討海帶多糖基于肝癌相關(guān)抗原SMP-30的抗肝癌作用及其機制,為肝癌的防治以及海帶特產(chǎn)資源的開發(fā)利用提供有價值的參考資料。方法:(1)取對數(shù)生長期的人肝癌細胞株(Bel-7404和HepG2),每孔接種5×10~3個細胞于96孔培養(yǎng)板中,培養(yǎng)24h后棄上清,設(shè)濃度為5、10、15、20、25、30、35、40mg/mL的海帶多糖組,以不加海帶多糖干預(yù)的Bel-7404/HepG2細胞設(shè)為對照組,并以不含Bel-7404/HepG2細胞的DMEM培養(yǎng)液為空白組,每組設(shè)3個復(fù)孔。繼續(xù)培養(yǎng)24h、48h、72h后,倒置顯微鏡下觀察各組肝癌細胞的形態(tài)學(xué)改變,加入CCK-8試劑檢測上述各組肝癌細胞的增殖抑制情況。(2)采用qRT-PCR和Western blot技術(shù)檢測海帶多糖對人正常肝細胞(LO2)和人肝癌細胞(Bel-7404/HepG2)中肝癌相關(guān)抗原SMP-30表達的影響。(3)以小鼠肝癌細胞Hepa 1-6構(gòu)建肝癌移植瘤小鼠模型,將造模成功的C57BL/6小鼠隨機分為4組:生理鹽水組、海帶多糖低濃度組(200 mg/kg·d)、海帶多糖中濃度組(400 mg/kg·d)、海帶多糖高濃度組(800 mg/kg·d),每組6只,定期尾靜脈注射相應(yīng)溶液,動態(tài)觀察各組小鼠體重和腫瘤體積的變化情況。給藥4周后結(jié)束實驗,處死小鼠并取出腫瘤塊,測量各組腫瘤大小并稱重,計算各組的抑瘤率。結(jié)果:(1)通過倒置顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)對照組Bel-7404/HepG2細胞生長狀態(tài)良好,而不同濃度海帶多糖作用24h、48h、72h后,Bel-7404/HepG2細胞體積逐漸變小、固縮變形,其中35mg/mL組的細胞變形最明顯。CCK-8結(jié)果顯示,海帶多糖對Bel-7404/HepG2細胞的增殖有抑制作用,且與海帶多糖劑量呈正相關(guān)。其中濃度為35mg/mL的海帶多糖對Bel-7404/HepG2細胞作用72h后,增殖的抑制作用最明顯,抑制率分別為89%和87%。各組間兩兩比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),證明海帶多糖對肝癌細胞增殖抑制的最佳濃度為35mg/mL,最佳作用時間為72h。(2)qRT-PCR結(jié)果顯示,經(jīng)濃度為35mg/mL的海帶多糖處理72h后的Bel-7404/HepG2細胞中SMP-30的表達均高于對照組,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),說明海帶多糖能增加肝癌細胞中SMP-30的表達;同時,我們還發(fā)現(xiàn),經(jīng)濃度為35mg/mL的海帶多糖處理后各組細胞SMP-30的增長率分別為:正常肝細胞LO2組(100%)、人肝癌細胞Bel-7404組(161%)、人肝癌細胞HepG2組(128%),差異具有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),說明海帶多糖對人肝癌細胞Bel-7404的作用效果最明顯。Western blot檢測結(jié)果顯示,經(jīng)過35mg/mL海帶多糖作用后,Bel-7404/HepG2細胞中SMP-30蛋白的表達量有所上升,均高于正常肝細胞LO2組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。(3)經(jīng)過測量,以小鼠肝癌細胞Hepa 1-6構(gòu)建的移植瘤小鼠在海帶多糖治療后體重均有所增加,且海帶多糖濃度越高,小鼠增加的體重越大(P0.05);此外,隨著海帶多糖作用的時間越長、濃度越高,腫瘤生長的抑制作用越明顯,其腫瘤體積越小、抑瘤率越高(P0.05)。結(jié)論:海帶多糖具有抑制肝癌細胞生長的作用,通過上調(diào)肝癌相關(guān)抗原SMP-30可能是其作用機制中的一個途徑。
【圖文】：

結(jié) 果. 海帶多糖對人肝癌 Bel-7404、HepG2 細胞增殖的抑制作1 海帶多糖對人肝癌細胞形態(tài)的影響海帶多糖作用 Bel-7404/HepG2 細胞 24h、48h、72h 后，細胞體增長逐漸變小、固縮變形，其中 35mg/mL 組的細胞變形最明顯，如 2A。不同濃度海帶多糖作用 72h 后用倒置顯微鏡觀察，如圖 1B、照組 Bel-7404/HepG2 細胞(a)生長狀態(tài)良好。貼壁細胞多，輪廓胞間排列緊密。經(jīng)海帶多糖作用后（b-e），貼壁細胞隨海帶多糖大逐漸減少，細胞變形越明顯。

海帶多糖基于 SMP-30 的抗肝癌作 2018 屆 碩 倍。igure 1 Morphological changes in Bel-7404 cells after LJP treatment. (A) a, b, corphological changes of Bel-7404 cells treated with 30 mg/mL LJP for 24 h, 48 h, and 72 h,) a shows the growth of Bel-7404 cells without LJP treatment in the control group; b owth of Bel-7404 cells treated with 5-, 10-, 20-, and 30-mg/mL LJP, respectively. The magn
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5

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本文編號：2698991