【摘要】：金黃色葡萄球菌(簡稱金葡菌)是肺炎和感染性休克的主要病源,其分泌的多種毒力因子可通過不同受體介導免疫系統(tǒng)。金葡菌細胞壁的組成成分——脂磷壁酸(lipoteichoic acid,LTA),是其主要毒力因子之一,且與炎癥反應有關。LTA作為一種聚甘油磷酸酯構成的兩親性物質(zhì),可以激活Toll樣受體2(TLR2),并與脂多糖(LPS)表現(xiàn)出類似的炎癥特征。LTA等多種威脅,能夠導致活性氧(ROS)的顯著產(chǎn)生,其中也包括羥基自由基以及其他自由基在內(nèi)。機體出現(xiàn)氧化應激情況時,通常是由于促氧化劑和抗氧化劑之間的平衡遭到了破壞。超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)和谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)可消除氧化應激產(chǎn)生的ROS。和厚樸酚(honokiol,HNK)與厚樸酚互為異構體,是厚樸的有效成分之一,具有抗氧化、抗炎以及神經(jīng)保護等多種生物活性。因此,本文就和厚樸酚對于金葡菌LTA誘導的氧化損傷及TLR2信號通路的影響進行了探究。本研究首先檢測了和厚樸酚清除自由基的能力。進行了DPPH、ABTS~+·和O_2~-·自由基清除率實驗,結果顯示當和厚樸酚濃度為64μg/mL時,對三種自由基的清除率分別達94.57%、90.43%和91.24%,表明和厚樸酚有較強的清除自由基能力。T-AOC法測定總抗氧化能力實驗結果顯示,和厚樸酚濃度為16μg/mL、32μg/mL和64μg/mL時,總抗氧化值分別達到5.94 unit、7.62 unit和8.16 unit,表現(xiàn)出劑量相關性,表明和厚樸酚有較強抗氧化能力。其次,本文研究了和厚樸酚對LTA誘導造成的細胞多方面氧化損傷的抑制效果。通過熒光顯微鏡觀察細胞內(nèi)ROS水平,實驗結果表明LTA的刺激大量增加了細胞內(nèi)ROS含量,在和厚樸酚作用下ROS含量下降。此外,細胞內(nèi)MDA含量,SOD、CAT以及GSH-Px三種抗氧化酶活力的檢測實驗表明,經(jīng)和厚樸酚(32μg/mL)處理,與LTA組相比MDA含量下降了35.87%,三種抗氧化酶活力分別增至LTA組的1.54,2.91和3.17倍。Western blot檢測結果表明和厚樸酚可提高三種抗氧化酶的活性,且能夠抑制LTA刺激作用引起的抗氧化酶活性的下降。最后,本文研究了和厚樸酚對LTA誘發(fā)的細胞炎癥反應的影響。western blot法檢測了TLR2炎癥通路蛋白表達水平,實驗結果表明LTA刺激可被TLR2受體識別,進而激活MyD88和NF-κB及其下游蛋白的表達,最終引起炎癥反應;不同濃度的和厚樸酚,可對LTA誘發(fā)的炎癥反應發(fā)揮不同程度的抑制作用。利用ELISA法和qRT-PCR實驗分別考察促炎性細胞因子和及其相關基因表達水平,結果顯示在LTA的誘導下,細胞內(nèi)促炎性因子水平顯著增加,且導致炎性因子相關基因以及TLR2基因表達水平上調(diào);經(jīng)過和厚樸酚預處理的實驗組,LTA引起的炎性因子產(chǎn)量增加和基因水平上調(diào)均受到了抑制作用,且與和厚樸酚劑量呈正相關。以上實驗結果表明,和厚樸酚可抑制金葡菌磷壁酸誘導的氧化損傷及TLR2通路炎癥反應,為和厚樸酚進一步被開發(fā)為安全天然且高效的保健品或藥劑奠定了基礎。
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吉 大學碩士學位論文活下游 NF-κB 的表達水平亦不同。有研究稱[13]，金葡菌 LTA 可誘導細胞產(chǎn)生炎性因子，然而乳酸桿菌的 LTA 對此可發(fā)揮抑制作用。有科學家研究糞腸球 LTA 對細胞的影響[14]，，研究發(fā)現(xiàn)細胞受到 LTA 刺激作用后，胞內(nèi)炎性因子不數(shù)量上劇增，種類也有所增加。除此之外，該研究證明了脂多糖（LPS）與 LTA者之間可互相促進，即表現(xiàn)出協(xié)同作用。

圖 1.2 和厚樸酚結構式.2 constitutional formular of ho究者對于天然植物提取物產(chǎn)生]。在多年傳統(tǒng)醫(yī)學研究記載中腸不舒等疾病[33-36]。另有眾多生物生長以及消除炎癥等作用凋亡的作用，在大鼠模型研究在消化和血液系統(tǒng)中抗癌抗腫療機制不盡相同[45-50]。由于和射和外敷等多種途徑給藥[51,5破，分別通過對細胞周期的調(diào)
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R285

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