【摘要】：目的:探究四逆軟肝方對人正常肝細胞L02株和人肝星狀細胞LX-2株增殖、凋亡以及蛋白Caspase-3和Bcl-2表達的影響。方法:1取對數(shù)生長的L02和LX-2細胞,傳至96孔板中培養(yǎng),并分別以不同濃度的四逆軟肝方和不同濃度扶正化瘀片干預24h,利用CCK-8試劑盒檢測細胞增殖情況,挑選四逆軟肝方干預細胞的高、中、低濃度和陽性對照藥扶正化瘀片的適宜濃度。2在四逆軟肝方高、中、低藥物濃度和陽性對照藥適宜濃度下干預L02和LX-2細胞24h,在顯微鏡下觀察細胞形態(tài)變化。3在四逆軟肝方高、中、低濃度下干預L02和LX-2細胞24h,并以陽性對照藥進行對照,檢測細胞凋亡情況。4在四逆軟肝方高、中、低藥物濃度下干預L02和LX-2細胞,應用Western Blot檢測細胞凋亡相關蛋白Caspase-3和Bcl-2的表達情況。結(jié)果:1隨著濃度的增加,L02和LX-2存活率均出現(xiàn)下降,但LX-2細胞存活率下降更為明顯。根據(jù)細胞存活率情況,選擇四逆軟肝方1、2、4 mg·ml~(-1)作為后期實驗干預的高、中、低濃度,陽性對照藥扶正化瘀片選擇0.3mg·ml~(-1)作為干預濃度。2顯微鏡下,LX-2細胞隨著給藥濃度增加生長狀態(tài)發(fā)生變化,出現(xiàn)脫落、抱團生長等現(xiàn)象;L02細胞無明顯變化。3高、中、低濃度干預下,LX-2細胞凋亡明顯,L02細胞凋亡不明顯(P0.05)。4高、中、低濃度干預下,LX-2細胞Caspase-3蛋白表達量明顯升高(P0.01),Bcl-2蛋白表達量明顯降低(P0.01)。L02細胞各組中Caspase-3和Bcl-2蛋白表達量無差別(P0.05)。結(jié)論:1四逆軟肝方水提物對LX-2和L02細胞均有抑制作用,但是作用濃度相差較大。其共同出現(xiàn)的抑制作用可能是由藥物的濃度增加改變了細胞滲透壓導致。2四逆軟肝方水提物在1、2、4mg·ml~(-1)濃度下,明顯增加了LX-2細胞的凋亡率,對L02細胞凋亡無影響。說明該方在臨床運用中起到逆轉(zhuǎn)肝功能和逆轉(zhuǎn)肝硬度程度作用和該方選擇抑制肝星狀細胞有關。3四逆軟肝方水提物在1和4 mg·ml~(-1)可明顯上調(diào)LX-2細胞Caspase-3的表達,下調(diào)Bcl-2的表達,對L02細胞的Caspase-3和Bcl-2表達無影響。說明四逆軟肝方可能是通過影響LX-2細胞的Caspase-3和Bcl-2兩種蛋白來促進該細胞凋亡。4四逆軟肝方在在治療肝纖維化過程中可保護肝細胞,調(diào)控肝星狀細胞凋亡。使損傷的肝臟得到雙向的修復。
【圖文】：

2 不同濃度四逆軟肝方水提物作用 24h后，L02和 LX-2細胞在顯微鏡下狀況：陽性對照組扶正化瘀片選擇0.3mg·ml-1作為干預濃度，，四逆軟肝方選擇 1mg·ml-1、2mg·ml-1、4mg·ml-1作為觀察濃度。藥物干預 24小時后，顯微鏡下觀察 L02細胞，除在 4mg·ml-1和扶正化瘀組中可以看到細胞出現(xiàn)少量脫離外、形態(tài)變圓外，其余組與正常組比較無明顯變化；觀察 LX-2細胞，隨著四逆軟肝方水提物濃度的增加，細胞出現(xiàn)抱團縮聚、數(shù)量明顯減少的現(xiàn)象，扶正化瘀組也出現(xiàn)類似情況。（圖 3）

圖 3 藥物作用 24小時后 L02 細胞和 LX-2細胞形態(tài)情況：×403 藥物對 LX-2和 L02 細胞凋亡的影響：選擇AnnexinV-FITC/PIapoptosis試劑盒對藥物干預 24小時后的細胞進行染色，利用 CellometerK2 雙熒光細胞分析
【學位授予單位】：湖南中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5

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本文編號：2698790