【摘要】：目的:探究四逆軟肝方對(duì)人正常肝細(xì)胞L02株和人肝星狀細(xì)胞LX-2株增殖、凋亡以及蛋白Caspase-3和Bcl-2表達(dá)的影響。方法:1取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)的L02和LX-2細(xì)胞,傳至96孔板中培養(yǎng),并分別以不同濃度的四逆軟肝方和不同濃度扶正化瘀片干預(yù)24h,利用CCK-8試劑盒檢測(cè)細(xì)胞增殖情況,挑選四逆軟肝方干預(yù)細(xì)胞的高、中、低濃度和陽(yáng)性對(duì)照藥扶正化瘀片的適宜濃度。2在四逆軟肝方高、中、低藥物濃度和陽(yáng)性對(duì)照藥適宜濃度下干預(yù)L02和LX-2細(xì)胞24h,在顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)變化。3在四逆軟肝方高、中、低濃度下干預(yù)L02和LX-2細(xì)胞24h,并以陽(yáng)性對(duì)照藥進(jìn)行對(duì)照,檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況。4在四逆軟肝方高、中、低藥物濃度下干預(yù)L02和LX-2細(xì)胞,應(yīng)用Western Blot檢測(cè)細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白Caspase-3和Bcl-2的表達(dá)情況。結(jié)果:1隨著濃度的增加,L02和LX-2存活率均出現(xiàn)下降,但LX-2細(xì)胞存活率下降更為明顯。根據(jù)細(xì)胞存活率情況,選擇四逆軟肝方1、2、4 mg·ml~(-1)作為后期實(shí)驗(yàn)干預(yù)的高、中、低濃度,陽(yáng)性對(duì)照藥扶正化瘀片選擇0.3mg·ml~(-1)作為干預(yù)濃度。2顯微鏡下,LX-2細(xì)胞隨著給藥濃度增加生長(zhǎng)狀態(tài)發(fā)生變化,出現(xiàn)脫落、抱團(tuán)生長(zhǎng)等現(xiàn)象;L02細(xì)胞無(wú)明顯變化。3高、中、低濃度干預(yù)下,LX-2細(xì)胞凋亡明顯,L02細(xì)胞凋亡不明顯(P0.05)。4高、中、低濃度干預(yù)下,LX-2細(xì)胞Caspase-3蛋白表達(dá)量明顯升高(P0.01),Bcl-2蛋白表達(dá)量明顯降低(P0.01)。L02細(xì)胞各組中Caspase-3和Bcl-2蛋白表達(dá)量無(wú)差別(P0.05)。結(jié)論:1四逆軟肝方水提物對(duì)LX-2和L02細(xì)胞均有抑制作用,但是作用濃度相差較大。其共同出現(xiàn)的抑制作用可能是由藥物的濃度增加改變了細(xì)胞滲透壓導(dǎo)致。2四逆軟肝方水提物在1、2、4mg·ml~(-1)濃度下,明顯增加了LX-2細(xì)胞的凋亡率,對(duì)L02細(xì)胞凋亡無(wú)影響。說(shuō)明該方在臨床運(yùn)用中起到逆轉(zhuǎn)肝功能和逆轉(zhuǎn)肝硬度程度作用和該方選擇抑制肝星狀細(xì)胞有關(guān)。3四逆軟肝方水提物在1和4 mg·ml~(-1)可明顯上調(diào)LX-2細(xì)胞Caspase-3的表達(dá),下調(diào)Bcl-2的表達(dá),對(duì)L02細(xì)胞的Caspase-3和Bcl-2表達(dá)無(wú)影響。說(shuō)明四逆軟肝方可能是通過(guò)影響LX-2細(xì)胞的Caspase-3和Bcl-2兩種蛋白來(lái)促進(jìn)該細(xì)胞凋亡。4四逆軟肝方在在治療肝纖維化過(guò)程中可保護(hù)肝細(xì)胞,調(diào)控肝星狀細(xì)胞凋亡。使損傷的肝臟得到雙向的修復(fù)。
【圖文】：

2 不同濃度四逆軟肝方水提物作用 24h后，L02和 LX-2細(xì)胞在顯微鏡下?tīng)顩r：陽(yáng)性對(duì)照組扶正化瘀片選擇0.3mg·ml-1作為干預(yù)濃度，，四逆軟肝方選擇 1mg·ml-1、2mg·ml-1、4mg·ml-1作為觀察濃度。藥物干預(yù) 24小時(shí)后，顯微鏡下觀察 L02細(xì)胞，除在 4mg·ml-1和扶正化瘀組中可以看到細(xì)胞出現(xiàn)少量脫離外、形態(tài)變圓外，其余組與正常組比較無(wú)明顯變化；觀察 LX-2細(xì)胞，隨著四逆軟肝方水提物濃度的增加，細(xì)胞出現(xiàn)抱團(tuán)縮聚、數(shù)量明顯減少的現(xiàn)象，扶正化瘀組也出現(xiàn)類似情況。（圖 3）

圖 3 藥物作用 24小時(shí)后 L02 細(xì)胞和 LX-2細(xì)胞形態(tài)情況：×403 藥物對(duì) LX-2和 L02 細(xì)胞凋亡的影響：選擇AnnexinV-FITC/PIapoptosis試劑盒對(duì)藥物干預(yù) 24小時(shí)后的細(xì)胞進(jìn)行染色，利用 CellometerK2 雙熒光細(xì)胞分析
【學(xué)位授予單位】：湖南中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R285.5

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本文編號(hào)：2698790