【摘要】：目的:以胃癌SGC7901/VCR裸鼠耐藥移植瘤為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型,從體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究生脈注射液逆轉(zhuǎn)人胃癌裸鼠移植瘤多藥耐藥性,并初步探討其信號通路作用機(jī)制,為進(jìn)一步尋找有效的胃癌多藥耐藥逆轉(zhuǎn)劑提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:1.耐藥細(xì)胞株SGC7901/VCR的培養(yǎng)及MTT法檢測其多藥耐藥性。2.通過皮下移植建立人胃癌耐藥裸鼠移植瘤模型及檢測其多藥耐藥性,將裸鼠隨機(jī)分為生理鹽水組、5-Fu組、生脈注射液組(以下簡稱生脈組)、5-Fu+異搏定組、5-Fu+生脈組,觀察裸鼠生長狀態(tài)并繪制腫瘤生長曲線圖,計(jì)算移植瘤平均瘤重及抑瘤率。3.采用流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測裸鼠移植瘤瘤細(xì)胞凋亡率:獲取細(xì)胞熒光信號后經(jīng)細(xì)胞周期分析軟件進(jìn)行分析。4.Western Blot檢測生脈注射液對人胃癌裸鼠移植瘤P-gp及c-jun、p-c-jun表達(dá)的影響:以蛋白印跡在膠片上的曝光程度來表達(dá)耐藥蛋白的高低。5.RT-PCR檢測生脈注射液對人胃癌裸鼠移植瘤MDR1、MRP1表達(dá)的影響:以基因擴(kuò)增產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳的光密度半定量值來表示耐藥基因表達(dá)的高低。結(jié)果:1.SGC7901細(xì)胞及SGC7901/VCR細(xì)胞均為貼壁生長,呈上皮樣單層排列狀,SGC7901細(xì)胞邊界清晰,以多角形為特點(diǎn)。SGC7901/VCR以胞核較大的梭形細(xì)胞為主,胞漿內(nèi)及培養(yǎng)液中可見許多泥沙樣顆粒。胃癌細(xì)胞耐藥性檢測結(jié)果顯示:SGC7901/VCR細(xì)胞對5-Fu、ADM、VCR、DDP的耐藥倍數(shù)分別為27.45、4.62、16.74、2.65。不僅對VCR具有耐藥性,對5-Fu、ADM、DDP亦有耐藥性,其中以對5-Fu的耐藥倍數(shù)為最高。證明SGC7901/VCR細(xì)胞具有多藥耐藥性。裸鼠移植瘤細(xì)胞(SGC7901/VCR/nude)耐藥性檢測結(jié)果:SGC7901/VCR/nude對5-Fu、ADM、VCR、DDP的耐藥倍數(shù)(RI)分別為26.79、5.35、13.98、2.48,有交叉耐藥性,表明裸鼠移植瘤細(xì)胞具有多藥耐藥性。2.各組皮下移植瘤生長特點(diǎn)及病理形態(tài)基本相似,病理組織學(xué)檢查均為低分化腺癌,成功建立胃癌多藥耐藥裸鼠移植瘤模型。模型組瘤重、瘤體積與5-Fu組、5-Fu+異搏定組、5-Fu+生脈組比較,P0.05,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。模型組瘤重、瘤體積與生脈組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P0.05,說明生脈注射液無抑瘤作用。5-Fu組、生脈組瘤體積、瘤重分別與5-Fu+異搏定組、5-Fu+生脈組比較,P0.05,差異顯著。5-Fu+異搏定組瘤重、瘤體積與5-Fu+生脈組相比,P0.05,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3.各組耐藥移植瘤細(xì)胞凋亡率比較:各組耐藥移植瘤細(xì)胞均有不同程度的凋亡。其中,5-Fu+生脈組凋亡率最高,與模型組、5-Fu組、生脈組、5-Fu+異搏定組比較,P0.05,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說明生脈注射液增加化療藥物對胃癌細(xì)胞的殺傷力,加快誘導(dǎo)腫瘤耐藥細(xì)胞凋亡。4.Western Blot結(jié)果顯示:模型組p-gp、c-jun、p-c-jun的表達(dá)與生脈組、5-Fu+異搏定組、5-Fu+生脈組比較,差異顯著(P0.05)。說明生脈注射液降低耐藥p-gp,提高c-jun及其磷酸化表達(dá)。模型組p-gp、c-jun、p-c-jun蛋白的表達(dá)與5-Fu組比較,P0.05,差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。5-Fu+異搏定組、5-Fu+生脈組p-gp、c-jun、p-c-jun蛋白的表達(dá)與生脈組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。說明聯(lián)合用藥降低p-gp、提高c-jun及其磷酸化能力更為顯著。5-Fu+異搏定組p-gp、c-jun、p-c-jun蛋白的表達(dá)與5-Fu+生脈組相比,P0.05,差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說明生脈注射液降低p-gp,提高c-jun及其磷酸化的表達(dá)與異博定作用相當(dāng)。5.RT-PCR結(jié)果顯示:生脈組、5-Fu+異搏定組、5-Fu+生脈組MDR1、MRP1基因的表達(dá)均低于模型組,差異顯著(P0.05)。說明生脈注射液降低耐藥基因MDR1、MRP1表達(dá)。模型組MDR1、MRP1表達(dá)與5-Fu組比較,P0.05,差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。生脈組MDR1、MRP1表達(dá)顯著低于5-Fu組,P0.05,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。5-Fu+異搏定組、5-Fu+生脈組MDR1、MRP1表達(dá)均低于生脈組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。說明聯(lián)合用藥降低MDR1、MRP1更為顯著。5-Fu+異搏定組與5-Fu+生脈組相比,P0.05,差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說明生脈注射液降低MDR1、MRP1基因表達(dá)與異博定持平。結(jié)論:1.人胃癌SGC7901/VCR細(xì)胞具有多藥耐藥性。2.成功建立具有多藥耐藥性的人胃癌SGC7901/VCR/nude皮下移植瘤模型,為研究腫瘤耐藥提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。3.生脈注射液聯(lián)合化療能抑制胃癌耐藥裸鼠移植瘤生長;增加化療藥物對胃癌細(xì)胞的殺傷力,加速誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。4.生脈注射液具有逆轉(zhuǎn)胃癌多藥耐藥的作用,其作為逆轉(zhuǎn)劑值得進(jìn)一步研究。5.逆轉(zhuǎn)耐藥機(jī)制:生脈注射液通過提高JNK通路下游底物c-jun及其磷酸化水平的表達(dá),降低MDR1/p-gp的表達(dá),降低耐藥基因MDR1、MRP1的表達(dá),一定程度上逆轉(zhuǎn)胃癌多藥耐藥。
【學(xué)位授予單位】：山西省中醫(yī)藥研究院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R285

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