【摘要】：金粟蘭屬(Chloranthus)是金粟蘭科(Chloranthaceae)中的一屬,該屬植物為多年生草本或半灌木,全世界約17種,主要分布于亞洲的溫帶和熱帶。其中在我國分布的約13個種及5個變種,多集中分布在我國西南地區(qū)。金粟蘭屬植物具有祛風(fēng)散寒,活血散瘀,消腫止痛,舒筋強骨等傳統(tǒng)功效,作為民間用藥通常多被用于治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、跌打損傷等疾病。目前為止,研究表明,本屬植物的化學(xué)成分在結(jié)構(gòu)上呈現(xiàn)出多樣性和復(fù)雜性,類型主要為萜類及其聚合物,其次還有香豆素、黃酮類、酰胺類化學(xué)成分;關(guān)于其藥理活性的報道主要集中在抗炎、抗腫瘤、K+離子通道的選擇性抑制、抗病毒、抗菌等方面。金粟蘭屬植物銀線草Chloranthus japonicus Sieb又名四葉草,鬼督郵等,在我國主要分布于吉林、黑龍江、陜西、甘肅、河北等省,在日本、朝鮮也有分布。根據(jù)文獻報道來看,銀線草中的主要化學(xué)成分類型是倍半萜及其二聚體。結(jié)構(gòu)新穎的倍半萜及其聚合物以及它們的功能研究一直是本課題組的主要研究方向之一。因此,選取銀線草全草作為本課題的研究對象,對其所含的倍半萜類成分及其聚合物進行系統(tǒng)的化學(xué)成分研究。同時,對獲得的銀線草部分倍半萜類成分及其二聚體進行生物活性研究。一、化學(xué)成分研究本課題對銀線草全草乙醇提取物運用各種色譜技術(shù)(正相色譜、凝膠色譜、反相色譜、大孔樹脂色譜、薄層色譜、HPLC等)和多種光譜技術(shù)(HRESIMS、NMR、CD、OR、X-ray等)共分離鑒定了55個化合物,其中包括倍半萜有42個,類型分別為桉葉烷型、吉瑪烷型、孤木烷型、愈創(chuàng)木烷型、烏藥烷型倍半萜及其二聚體,其他類型萜類及其苷有5個,甾體類有2個,黃酮類有4個,其他類型有2個。首次從該植物中分離到的化合物數(shù)共31個�；衔锝Y(jié)構(gòu)圖如下:化合物Y-1,Y-2,Y-3,Y-4,Y-19,Y-20,Y-21,Y-25,Y-30被鑒定為新化合物。化合物Y-1~Y-4為新的桉葉烷型倍半萜,其中化合物Y-1是首次發(fā)現(xiàn)8,9位裂環(huán)桉烷型倍半萜,利用CD數(shù)據(jù),確定其C-12位的羥基構(gòu)型;化合物Y-19為新的吉瑪烷型倍半萜,化合物Y-20和Y-21為新的愈創(chuàng)木烷型倍半萜,化合物Y-25和Y-30為新的烏藥烷型倍半萜,且化合物Y-30是比較罕見的具有過氧羥基結(jié)構(gòu)的烏藥烷型倍半萜內(nèi)酯二聚體。另外,我們通過X-射線單晶衍射實驗獲取了化合物Y-2,Y-3,Y-20和Y-21的單晶數(shù)據(jù)。二、生物活性研究采用CCK-8法對分離得到的倍半萜類化合物進行體外5種腫瘤細(xì)胞株毒性篩選(胃癌細(xì)胞MGC803、肝癌細(xì)胞Hep G2、人早幼粒白血病細(xì)胞HL-60、人結(jié)腸癌細(xì)胞HCT116、人肺癌細(xì)胞A549)。結(jié)果顯示,倍半萜單倍體均未顯示明顯的腫瘤細(xì)胞毒性,僅有部分烏藥烷型倍半萜內(nèi)酯二聚體化合物顯示出對腫瘤細(xì)胞毒性。其中不具有十八元內(nèi)酯環(huán)結(jié)構(gòu)的化合物Y-39對胃癌細(xì)胞MGC803、肝癌細(xì)胞Hep G2、人早幼粒白血病細(xì)胞HL-60的增殖具有很強的抑制作用,其IC50值分別為4.60±1.05μM、3.17±0.66μM、1.57±0.27μM,而化合物Y-35、36對HL-60人早幼粒白血病細(xì)胞增殖抑制作用較弱,其IC50值分別為10.28±0.70μM、10.19±2.28μM,化合物Y-36對MGC803胃癌細(xì)胞增殖有較弱抑制作用,IC50值為15.81±5.92μM。體外抑制LPS誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞RAW264.7一氧化氮釋放篩選實驗的結(jié)果顯示,化合物Y-2具有顯著抑制NO釋放的作用,其IC50值為9.56±0.71μM,且與陽性對照藥氨基胍的活性相當(dāng),IC50值為8.50±0.35μM,分析其結(jié)果,可能與化合物Y-2具有兩個α,β-不飽和酮結(jié)構(gòu)片段有關(guān)。
【圖文】：

Chloranthus 植物，又名四葉草，鬼督郵等，多年生草本。多生長于海拔 500 - 230的林下蔭濕處或溝邊草叢中，，高 20-50cm，根莖橫走，有節(jié)，有特殊氣味；莖直立不分枝；葉對生，呈寬橢圓形或倒卵圓形；花期 4-5 月，果期 5-7 月[1,2]。在我國要分布于吉林、遼寧、河北、陜西、山西、甘肅等省份；作為民間藥用，主要用于濕痹痛、風(fēng)寒感冒、毒蛇咬傷，跌打損傷等疾病[1,2]。根據(jù)文獻報道來看，銀線草中主要化學(xué)成分類型是倍半萜及其二聚體[3,4]。二、實驗部分（一）植物來源與鑒定藥材名稱：銀線草標(biāo)本保存：第二軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)院天然藥化教研室 1116 室（NO. A2015100311采集時間與地點：2015 年 10 月、吉林省磐石市鑒定人：黃寶康教授（第二軍醫(yī)大學(xué)生藥學(xué)教研室）

（二）儀器與試劑柱層析填料：硅膠（200-300 目，100-200 目，煙臺江友硅膠開發(fā)有限公司）；凝膠Sephadex LH-20（Pharmacia 公司）；反相硅膠 C18（40-70μ,Merck 公司）；HSGF254硅膠板（煙臺江友硅膠開發(fā)有限公司）；色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18 規(guī)格為 9.4×250 mm, 5μm;實驗溶劑：EtOH, Petroleum ether, CH2Cl2, CHCl3, ethyl acetate, CH3CN, Isopropanol,MeOH, 試劑級別：分析純，購自國藥集團化學(xué)試劑有限公司；顯色劑：濃硫酸-香草醛試液儀器：WFH-203B 三用紫外分析儀（上海米青科實業(yè)有限公司）；真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（型號：Value, Heidolph 公司，德國）；中壓制備液相色譜儀（型號: BUCHI C605,BUCHI 公司，瑞士）；高效液相色譜儀（型號：1200, Agilent 公司，美國）；核磁共振儀（型號:500MHz,Bruker 公司，德國）；Model343 旋光儀（PerkinElmer公司，美國）；質(zhì)譜儀（型號：MSD-Trap-XCT,G6250A,Agilent 公司，美國）；（三）提取分離
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R284.1;R285

【參考文獻】

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本文編號：2695437