【摘要】：目的:中藥決明子,為豆科植物決明Cassia obtusifolia L.或小決明Cassia tora L.的干燥、成熟的種子。具有名目、保肝、通便等功效。現(xiàn)代藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn),決明子具有降血壓、降血脂、抗衰老、抗氧化以及免疫和抗腫瘤等作用。其在全國各地及海外均有廣泛種植,但是由于各地栽培環(huán)境的不同,加工運輸?shù)炔町?導(dǎo)致了該藥材的質(zhì)量存在一定的差異�！吨袊幍洹�(2015年版)規(guī)定將其中所含的蒽醌類成分橙黃決明素和大黃酚的含量測定作為決明子藥材的質(zhì)量控制的標準。但是由于其藥理作用廣泛,主要的藥效成分較多,僅憑兩個成分的含量測定作為其質(zhì)量控制的指標不能完全反應(yīng)其質(zhì)量。因此需要對其質(zhì)量控制的標準繼續(xù)進行補充和完善。本實驗建立決明子超高效液相色譜指紋圖譜、五種蒽醌類成分的含量測定方法并結(jié)合液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)來對決明子中所含的化學(xué)成分進行分析,對現(xiàn)有的決明子質(zhì)量標準進行補充,并采用斑馬魚的高脂血癥模型,以斑馬魚尾部血脂染色強度作為定量指標,初步評價不同批次間決明子藥材的藥理活性,為中藥質(zhì)量控制體系進行補充和完善。中藥鉤藤,為茜草科植物鉤藤Uncariarhynchophylla(Miq.)Miq.ex Havil、大葉鉤藤Uncariamacrophylla Wall、毛鉤藤Uncariahirsute Havil、華鉤藤Uncariasinensis(Oliv)Havil.或無柄果鉤藤Uncaria sessilifiuctus Roxb.的干燥帶鉤莖枝。目前,市場上的鉤藤藥材品種較為復(fù)雜,而不同品種間的鉤藤藥材的化學(xué)成分、藥理作用也存在差異。《中國藥典》(2015年版)尚未收載鉤藤含量測定的標準,只有定性鑒別,嚴重影響鉤藤藥材的質(zhì)量控制及其應(yīng)用。本實驗通過收集鉤藤品種和大葉鉤藤品種的鉤藤藥材,在同一色譜條件下建立其UPLC指紋圖譜,并測定大葉鉤藤中具有顯著藥理活性的鉤藤堿與異鉤藤堿的含量,為完善鉤藤和大葉鉤藤兩個品種藥材的區(qū)分和質(zhì)量控制提供參考。方法:(1)收集28批不同產(chǎn)地的決明子藥材,采用UPLC法結(jié)合聚類分析、主成分分析以及相似度評價三種分析方法建立了中藥決明子的指紋圖譜。(2)采用UPLC法同時測定28批決明子藥材中大黃素、大黃酚、大黃素甲醚、橙黃決明素、黃決明素五種蒽醌類成分含量,為其現(xiàn)有的質(zhì)量標準的完善提供參考。(3)采用LC-MS對決明子藥材中所含的化學(xué)成分進行分析,為決明子藥材的質(zhì)量控制以及藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究提供參考。(4)采用斑馬魚的高脂血癥模型,將斑馬魚尾部血脂染色強度作為實驗的定量分析指標,初步評價不同批次決明子藥材的藥理活性,為其質(zhì)量控制的補充提供參考。(5)收集不同產(chǎn)地的12批鉤藤藥材和10批大葉鉤藤藥材,采用UPLC法建立鉤藤和大葉鉤藤的指紋圖譜,為上述兩個品種鉤藤藥材的區(qū)分和質(zhì)量控制提供參考。(6)采用UPLC法測定10批大葉鉤藤中鉤藤堿和異鉤藤堿的含量,為大葉鉤藤的質(zhì)量控制進行補充。(7)根據(jù)上述實驗所得結(jié)果,初步制定決明子和鉤藤藥材的質(zhì)量標準增訂草案。結(jié)果:(1)運用UPLC的方法,建立28批不同產(chǎn)地間的決明子藥材的UPLC指紋圖譜,共計匹配出40個共有峰,通過與標準品的比對,指認出10種成分,28批藥材的相似度較高,其相似度的范圍在0.827～0.990之間,總體來看,中藥決明子的質(zhì)量是較為穩(wěn)定的。通過聚類分析、主成分分析得出中藥決明子雖廣泛種植于全國各地,但是海南與山東所產(chǎn)的品質(zhì)較好,可能與當?shù)氐臍夂驐l件相關(guān)。(2)采用UPLC的方法,對決明子藥材中的五種蒽醌類成分大黃素、大黃酚、橙黃決明素、黃決明素、大黃素甲醚進行了含量測定,結(jié)果表明,橙黃決明素和大黃酚的含量均符合藥典規(guī)定,黃決明素含量在0.1809～1.1311 mg·g-1,大黃素含量在0.1952～0.8940 mg·g-1,大黃素甲醚含量在0.1917～0.8752mg·g-1。并進行方法學(xué)考察,表明本實驗所用儀器精密度良好,樣品的穩(wěn)定性和重復(fù)性以及加樣回收率均可符合藥典規(guī)定的標準,為《中國藥典》質(zhì)量標準的進一步完善提供參考。(3)采用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)來推測決明子中所含有的化學(xué)成分,在正離子和負離子模式下,對實驗所得的數(shù)據(jù)進行分析,并推斷出39個決明子中可能含有的化合物。結(jié)果表明,決明子中所含的蒽醌類成分以游離型蒽醌和結(jié)合型蒽醌苷類的形式存在,蒽醌苷類成分由于其與糖連接的位置以及糖基種類的不同而呈現(xiàn)出多樣化。同時,萘并吡喃酮類化合物在決明子中大量存在,種類繁多,其藥理活性有待進一步的開發(fā)和利用。本方法可以快速的推斷決明子藥材中所含有的化學(xué)成分。同時,也可為決明子藥材的質(zhì)量控制提供一定的參考。(4)采用斑馬魚的高脂血癥模型來驗證決明子藥材對于高脂血癥的防治作用,并對不同批次藥材的活性進行分析,結(jié)果表明,在實驗濃度范圍內(nèi),決明子藥材的藥理活性隨著給藥濃度的增大而增強,不同批次的決明子藥材總提物均能對斑馬魚幼魚的脂肪吸收產(chǎn)生不同程度的抑制作用。其中指紋圖譜中相似度較低的藥材S27在藥效作用的發(fā)揮上弱于S25和S26,相似度評價較高的藥材在藥效作用的發(fā)揮上更加明顯。(5)在同一色譜條件下建立12批鉤藤品種藥材和10批大葉鉤藤品種藥材的UPLC指紋圖譜。經(jīng)相似度評價軟件進行分析,12批鉤藤品種藥材的UPLC指紋圖譜共計匹配出22個共有峰,12批鉤藤品種藥材中,11批的相似度均大于0.9,僅一批低于0.9,為0.737,10批大葉鉤藤共匹配出12個共有峰,其相似度均在0.9以上。而通過對比鉤藤和大葉鉤藤的兩個品種的對照指紋圖譜,發(fā)現(xiàn)其所含化學(xué)成分差異較大、而其中有效成分鉤藤堿、異鉤藤堿的含量亦有較大差異。大葉鉤藤中鉤藤堿和異鉤藤堿的含量較高,因此,本實驗所建立的方法可以用于對鉤藤和大葉鉤藤兩個不同品種間的藥材進行區(qū)分,同時也可用于兩個品種的質(zhì)量控制。(6)運用UPLC的方法,測定大葉鉤藤藥材中的鉤藤堿和異鉤藤堿的含量,其中,鉤藤堿的含量范圍在0.2214～0.6469 mg·g-1,而異鉤藤堿的含量范圍在0.0424～0.1309 mg·g-1。二者總和的含量范圍在0.2657～0.7559 mg·g-1。通過對其進行方法學(xué)考察,表明本實驗精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性以及加樣回收率實驗均可達到《中國藥典》所規(guī)定的相關(guān)標準,因此,本方法結(jié)合前期指紋圖譜的相關(guān)實驗,可為大葉鉤藤藥材的質(zhì)量控制提供參考。(7)以上述實驗結(jié)果為依據(jù),對中藥決明在現(xiàn)有質(zhì)量標準的基礎(chǔ)上增加指紋圖譜和3個成分的含量測定項;對大葉鉤藤增加指紋圖譜和2個成分的含量測定項;對鉤藤增加指紋圖譜,初步制定中藥決明子和鉤藤的質(zhì)量標準增訂草案。結(jié)論:運用UPLC建立中藥決明子的指紋圖譜并對其中的五種蒽醌類化學(xué)成分進行了含量測定,同時結(jié)合LC-MS技術(shù)對決明子中的所含的化學(xué)成分進行分析,有利于決明子的進一步開發(fā)和利用,實驗驗證斑馬魚的高脂血癥模型,并初步評價不同批次間的決明子藥材的藥理活性,為中藥決明子質(zhì)量標準的完善提供了新的思路和方法。本文建立鉤藤藥材中鉤藤和大葉鉤藤的UPLC指紋圖譜,并對大葉鉤藤中的鉤藤堿和異鉤藤堿進行了含量測定,為這兩個品種的鉤藤藥材的區(qū)分和質(zhì)量控制的完善提供參考。
【圖文】：

１逡逑．邋））））））＾逡逑２６｛２５｛２４（ｇ２２｛２１（２０（１９（１６（１？（１４（１３（１２（１１（１０（９（１６（１（１（１３（１２（ｔ１（１邐，ｓ邋ｉ逡逑２２２２２２２１１１１１１９＾５：１逡逑

模式圖的生成方式，運用多點校正的方法手動調(diào)節(jié)了第１４號共有峰，并對２８批樣品的逡逑色譜峰進行了全譜峰的匹配，建立了中藥決明子指紋圖譜共有模式，得到４０個共有峰，逡逑結(jié)果見圖２－１、圖２－２。逡逑通過與對照品進行比對，初步可以確認樣品中的１０個化合物，分別為決明子苷Ｂ２，逡逑決明子苷（：２，紅鏈霉素－６－０－Ｐ－龍膽二糖苷，決明子苷Ｃ，橙黃決明素，大黃酸，黃決明逡逑素，，大黃素，大黃酚，大黃素甲醚，結(jié)果見圖２－３。逡逑４４逡逑
【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R284.1

【參考文獻】

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本文編號：2693483