【摘要】：研究目的:桑菊飲是中醫(yī)經(jīng)典著作《溫病條辨》中著名的方劑,由:桑葉、菊花、連翹、薄荷、生甘草、蘆根、杏仁和桔梗配伍組成,具有疏風清熱,宣肺止咳的功效。臨床上常應用于治療外感咳嗽、急性支氣管炎、上呼吸道感染、肺炎等屬風熱犯肺或肝經(jīng)風熱癥等呼吸系統(tǒng)疾病�，F(xiàn)代藥理研究表明桑菊飲具有明顯的抗炎、抑菌、抗氧化及保護線粒體、抗急性肺損傷、解熱發(fā)汗、抑制腸蠕動和提高免疫功能等作用,但其藥效學及臨床研究還不夠深入,作用機制尚不明確。本文采用辣椒素誘導小鼠咳嗽模型,對桑菊飲的止咳作用及其機制進行了初步探討,并通過桑菊飲拆方給藥挖掘其配伍機理,為桑菊飲的臨床應用和進一步的開發(fā)提供科學依據(jù)。研究方法:SPF級昆明小鼠,采用0.1 mmol·L-1的辣椒素噴霧法復制小鼠咳嗽模型,咳嗽小鼠模型成功建立后,將小鼠隨機分為模型對照組,桑菊飲全方及其拆方治療組分為三個劑量組,分別為高劑量(相當于等效劑量的5倍)、中劑量(相當于等效劑量的2倍)和低劑量(相當于等效劑量),另設健康小鼠為正常組,每組10只。造模3d后,正常組和模型組隨機選取3只小鼠處死,取出氣管支氣管黏膜及三叉神經(jīng)節(jié)組織,采用HE染色法檢查小鼠氣管支氣管組織病理變化,采用ELISA法檢測三叉神經(jīng)節(jié)組織中SP的釋放量變化。其余各組小鼠第4d開始灌胃給藥,每日1次,連續(xù)治療5d,正常組及模型組小鼠灌胃生理鹽水0.5 mL/d。觀察各組小鼠的狀態(tài)變化,治療5 d后,第6 d上午所有小鼠以0.1 mmol·L-1的辣椒素噴霧引咳,記錄小鼠咳嗽次數(shù),所有小鼠眼眶取血、取出氣管支氣管及三叉神經(jīng)節(jié)組織,采用RT-PCR法檢測氣管支氣管組織中TRPV1mRNA的表達量變化,Western Blot法測定各組小鼠氣管支氣管組織中TRPV1蛋白的表達變化,ELISA法檢測三叉神經(jīng)節(jié)中SP的釋放量的變化。研究結(jié)果:造模后,小鼠出現(xiàn)好動、煩躁等癥狀,咳嗽次數(shù)明顯增加,HE染色結(jié)果顯示,其氣管支氣管黏膜組織出現(xiàn)炎癥變化,與正常組相比,模型組三叉神經(jīng)節(jié)中SP的含量增加且有顯著性差異(P0.05),提示造模成功。同時,與正常組相比,模型組的氣管支氣管中TRPV1mRNA及TRPV1蛋白的表達增加量有顯著性差異(P0.05或P0.01)。經(jīng)桑菊飲全方及拆方干預后,與模型組相比,桑菊飲全方高、中劑量組小鼠的咳嗽次數(shù)明顯減少(P0.05),三叉神經(jīng)節(jié)中SP的含量較模型組有顯著降低(P0.05或P0.01),氣管支氣管中TRPV1基因和蛋白的表達量較模型組均有不同程度的下調(diào)(P0.05或P0.01),且中劑量組效果最佳,而全方低劑量組沒有明顯的治療效果。桑菊飲拆方各組與模型組相比,咳嗽次數(shù)未見明顯變化,SP釋放量、氣管支氣管中TRPV1基因和蛋白的表達量部分有降低的趨勢,但不具有統(tǒng)計學意義。研究結(jié)論:1、本實驗建立的辣椒素噴霧造模法成功復制了小鼠咳嗽模型。2、桑菊飲全方高、中劑量組可減輕模型小鼠的咳嗽癥狀,下調(diào)TRPV1受體基因和蛋白的表達水平,降低三叉神經(jīng)節(jié)中SP含量,中劑量較高劑量顯著。3、桑菊飲拆方各組給藥前后咳嗽小鼠的咳嗽次數(shù)無明顯變化,部分組別TRPV1基因有所下調(diào),但蛋白的表達水平?jīng)]有實質(zhì)性改變,療效不及全方組,提示桑菊飲組方配伍的合理有效性。4、桑菊飲下調(diào)TRPV1受體表達可能是其治療咳嗽的生物分子機制之一。
【圖文】：

圖ITRPV1通道的激活【}a}

，，ｍ組相比仍有顯著性差異（戶＜０．０／或，與模型組相比，桑菊飲高、中、逡逑劑量均有降低，且具有顯著性差異（Ｐ＜ａ0５）。逡逑表５桑菊飲全方對辣椒素誘導咳嗽模型小鼠氣管及支氣管中逡逑ＴＲＰＶｌｍＲＮＡ相對表達量的影響（７土邋ｓ，ｎ＝６）逡逑組別邐相對表達量（２－ＡＡＣＴ）逡逑正常組邐Ｉ．邋００±０．２２＂逡逑模型組邐３．邋０７邋±０．４１逡逑全方高劑量組邐１．８４邋±０．３０＊逡逑全方中劑量組邐丨．７９±０．邋４８＊逡逑全方低劑量組邐２．邋３丨±邋０．邋２３＊逡逑＂戶模型組逡逑？４０
【學位授予單位】：中國中醫(yī)科學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5

【參考文獻】

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本文編號：2691374