發(fā)布時間：2020-06-01 10:37

【摘要】：花青素是一種天然水溶性色素,廣泛存在于有色植物中�；ㄇ嗨鼐哂袠O強的抗氧化、抗衰老、抗炎抑菌、保護肝臟和視力等作用。隨著農(nóng)業(yè)與生物技術(shù)的發(fā)展,出現(xiàn)了越來越多的富含花青素植物,這些植物中花青素的結(jié)構(gòu)類型、含量分布與所顯示的生物活性不完全相同。此外,近年來,心腦血管疾病的發(fā)病率越來越高,嚴(yán)重威脅著人類健康,而動脈粥樣硬化是心腦血管疾病的病理基礎(chǔ)。因此,尋找天然產(chǎn)物來有效緩解動脈粥樣硬化(AS),對降低心腦血管疾病的發(fā)病率至關(guān)重要。本文選取了15種富含花青素的植物,對花青素的提取純化工藝進行優(yōu)化,并對花青素純化物中花青素的含量、抗氧化活性及穩(wěn)定性進行測定與評價,研究黑枸杞花青素純化物改善動脈粥樣硬化的作用及機制。實驗結(jié)果如下:1.花青素提取純化工藝優(yōu)選利用紫胡蘿卜為代表,通過設(shè)計正交試驗考察,優(yōu)選出花青素的最佳提取純化工藝為:以pH為2的50%乙醇溶液為溶劑,按料液比為1:4加入植物材料中進行組織破碎提取1.5min,抽濾,將濾渣再加入料液比為1:2的pH為2的50%乙醇溶液室溫超聲提取40min,提取1次。抽濾,將濾液合并,在40℃下閃蒸濃縮至原體積的1/5,得到濃縮液。將濃縮液通過Diaion HP2 MGL大孔樹脂柱色譜進行富集純化,先用去離子水洗脫除去水溶性雜質(zhì),然后改用pH為3的60%的乙醇溶液,以0.6mL/min的流速進行洗脫,收集深色色帶洗脫液,在40℃下閃蒸濃縮結(jié)合旋蒸濃縮至干,得到總花青素純化物干粉,即花青素純化物。2.15種植物花青素純化物性能評價利用優(yōu)化的提取純化工藝對15種植物進行花青素純化物的制備,采用pH示差法和HPLC法分別測定各制備物中總花青素的含量和矢車菊素-3-O-葡萄糖苷的含量。通過實驗發(fā)現(xiàn),漿果類植物中花青素的含量要顯著高于蔬菜類植物,其中漿果類的黑枸杞花青素純化物中總花青素的含量相對最高(381.57±7.40mg/g DW)。測定結(jié)果還發(fā)現(xiàn)僅有8種植物中含有矢車菊素-3-O-葡萄糖苷。采用DPPH、FRAP及TRP 3種方法測定了各制備物的抗氧化活性,并對各制備物在不同的pH值、光照、溫度條件下進行穩(wěn)定性考察和評價,結(jié)果發(fā)現(xiàn),黑枸杞花青素純化物具有極強的清除自由基活性和抗氧化活性,且其水溶液在酸性、低溫、避光的條件下穩(wěn)定性更好。因此,篩選出高花青素含量的黑枸杞作為下一步生物活性研究的對象。3.黑枸杞花青素純化物改善動脈粥樣硬化的作用實驗開始給予腹腔注射70萬IU/kg·BW的維生素D_3,分4次,隔天給次,同時高脂飼料喂8周構(gòu)建動脈粥樣硬化大鼠模型。造模成功后隨機分成6組:正常組(NC;生理鹽水)、模型組(AS;生理鹽水)、辛伐他汀陽性組(SIM;50mg/kg/d)、低劑量(Low;50mg/kg/d)、中劑量(Mid;100mg/kg/d)、高劑量(Hig;200mg/kg/d)花青素用藥組。對所有大鼠灌胃給藥治療6周后,進行血清和組織病理檢測發(fā)現(xiàn),經(jīng)過辛伐他汀藥物和黑枸杞花青素純化物治療后血清中脂質(zhì)水平和炎癥因子水平都明顯得到改善,同時,主動脈內(nèi)膜泡沫細(xì)胞、脂質(zhì)和鈣鹽沉積及內(nèi)膜增厚程度明顯減輕;肝臟組織中空泡也明顯減少。黑枸杞花青素純化物明顯改善了動脈粥樣硬化,且呈現(xiàn)一定的劑量依賴性。4.黑枸杞花青素純化物改善動脈粥樣硬化的機制動脈粥樣硬化的發(fā)展與腸道菌群紊亂具有緊密聯(lián)系,且花青素主要在腸道被大量代謝吸收。通過對AS大鼠盲腸內(nèi)容物16S rDNA測序以及對主動脈、肝臟組織中相關(guān)信號通路檢測發(fā)現(xiàn):AS大鼠小腸組織遭到破壞,腸道菌群發(fā)生了紊亂。黑枸杞花青素純化物治療后顯著改善了小腸絨毛的完整性,抑制了LPS進入血液,還增加了擬桿菌門、雙歧桿菌科、乳酸桿菌科、Akkermansia、Lachnospiraceae_NK4A136_group、羅斯氏菌屬的相對豐度,降低了厚壁菌門、腸桿菌科和Prevotellaceae_NK3B31_group的相對豐度,從而抑制了動脈血管炎癥通路NF-kB和VCAM-1的表達以及肝臟膽固醇合成蛋白SREBP-2的表達,同時,上調(diào)了肝臟膽固醇代謝蛋白CYP7A1的表達,發(fā)揮了改善動脈粥樣硬化的作用。
【圖文】：

是 種天然水溶性色素，廣泛，并隨著液泡 pH 變化使其呈現(xiàn)不同的色彩色[1]�；ㄇ嗨氐慕Y(jié)構(gòu)是由 C6-C3-C6為骨架黃酮類物質(zhì)。由于芳香環(huán)上連接的取代基種，其中在食品中常見的花青素主要為天竺葵、飛燕草素（Delphinidin）、芍藥花色素（P葵色素（Malvidin），其結(jié)構(gòu)如圖 1.1 所示[2]的結(jié)構(gòu)被鑒定出來了，大部分由糖苷配基與形成花色苷的形式存在，其中矢車菊素-3-多植物中都存在；而游離形式的花青素極少

混勻后過 0.45μm 微孔濾膜，冷藏備用。.2 待測樣品溶液的配制精確稱取花青素純化物干粉 10.00mg，用 2%的鹽酸甲醇溶液定容至 10mL，再吸.00mL 用 2%的鹽酸甲醇溶液稀釋定容至 10mL，過濾膜后冷藏備用。.3 色譜條件色譜分析使用 20RBAX Eclipse XDB-C18 色譜柱（5μm，4.6mm 250mm），色件：流動相 A 為乙腈，B 為 0.1%磷酸；洗脫梯度 0-15 分鐘為 5%-20%A；檢測 510nm；流速 1.0 mL·min-1；柱溫為 30oC；進樣體積為 10μL。.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制依次準(zhǔn)確吸取對照品溶液 2μL、4μL、6μL、8μL、10μL 分別進樣，測定峰面積以矢車菊素-3-O-葡萄糖苷的含量為橫坐標(biāo)（X），峰面積（Y）為縱坐標(biāo)建立標(biāo)線：Y=1.89×106X-6080.1，R2= 0.999。表明對照品在 0.346~1.730μg 范圍內(nèi)，線系良好。圖 2.1 為矢車菊素-3-O-葡萄糖苷色譜圖，圖 2.2 為矢車菊素-3-O-葡萄糖照品的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。
【學(xué)位授予單位】：浙江農(nóng)林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R285;R284

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本文編號：2691358