【摘要】：[目的]實(shí)驗(yàn)研究顯示黃芪具有輔助抗腫瘤作用,已在臨床上得到了證實(shí)。氟尿嘧啶是一種廣譜抗腫瘤藥物,課題組對(duì)H22荷瘤小鼠采用氟尿嘧啶(5-Fluorouracil,5FU)化療1周,而后給予黃芪顆粒1周,發(fā)現(xiàn)化療后給予黃芪顆�？梢悦黠@抑制腫瘤的增殖,鞏固化療療效。通過(guò)qPCR實(shí)驗(yàn)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)化療后黃芪顆粒給藥組的糖酵解重要基因磷酸甘油酸激酶1(phosphoglycerate kinase 1,PGK1)表達(dá)明顯降低,為明確其機(jī)制,我們擬從腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞和缺氧誘導(dǎo)因子-1α(hypoxiain-duciblefactors-1alpha,HIF1α)進(jìn)行研究,嘗試闡明黃芪通過(guò)改善糖酵解產(chǎn)生化療增效作用的機(jī)制。[方法]1、藥效試驗(yàn)昆明小鼠30只,隨機(jī)分成模型組(M)、氟尿嘧啶組(5FU)、5FU化療后給予黃芪顆粒高中低劑量組,于小鼠右側(cè)前肢腋窩皮下注入0.2 mL 1.5×10~7個(gè).mL~(-1)的H22細(xì)胞懸浮液,建立肝癌模型小鼠。造模次日開(kāi)始給藥,前7日除M組注射生理鹽水外,其它各組均腹腔注射5FU溶液;自第8日起,M組和5FU組灌胃生理鹽水,化療后黃芪高、中、低劑量組灌胃相應(yīng)劑量黃芪溶液。給藥結(jié)束后,統(tǒng)計(jì)分析各組小鼠的體重及瘤體體積,并以此為判斷依據(jù)選擇最佳的給藥劑量的篩選。2、黃芪顆粒對(duì)化療藥抗腫瘤增效作用昆明小鼠18只,隨機(jī)分成模型組(M)、氟尿嘧啶組(5FU)、5FU化療后給予黃芪顆粒中劑量組(H),于小鼠右側(cè)前肢腋窩皮下注入0.2 mL 1.5×10~7個(gè).mL~(-1)的H22細(xì)胞懸浮液,建立肝癌模型小鼠。造模次日開(kāi)始給藥,前7日除M組注射生理鹽水外,其它各組均腹腔注射5FU溶液;自第8日起,M組和5FU組灌胃生理鹽水,H組灌胃中劑量黃芪溶液。給藥結(jié)束后,統(tǒng)計(jì)分析各組小鼠的瘤體體積及HE染色結(jié)果,并以此為判斷依據(jù)黃芪顆粒對(duì)化療藥抗腫瘤增效作用。3、機(jī)制探討采用實(shí)時(shí)定量PCR法(qPCR)檢測(cè)PGK1、HIF1α、乳酸脫氫酶A(Lactate Dehydrogenase A,LDHA)、丙酮酸激酶2(Pyruvate kinase isozymes M2,PKM2)mRNA表達(dá)量;采取蛋白免疫印跡法(Western blot)檢測(cè)HIF1α的表達(dá);通過(guò)免疫組織化學(xué)的方法,觀察腫瘤組織中CD68、CD163、白細(xì)胞介素-6(interleukin-6,IL-6)陽(yáng)性細(xì)胞的表達(dá)情況,光鏡下計(jì)數(shù)染色陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。試圖從能量代謝角度探討化療后給予黃芪顆粒對(duì)H22荷瘤小鼠化療增效機(jī)制的研究。[結(jié)果]1、對(duì)小鼠體重的影響:與M組比較,各給藥組荷瘤小鼠體重均顯著性降低,且其余各組組間在前7天注射氟尿嘧啶時(shí)無(wú)顯著性差異。但隨著中藥的給藥時(shí)間延長(zhǎng),聯(lián)合給藥的三個(gè)組體重增加趨勢(shì)明顯,且為后給藥的高、中劑量組體重增加最明顯。2、對(duì)荷瘤小鼠體積的影響:瘤體體積:與M組比較,5FU組、H組小鼠的腫瘤體積減小,具有顯著性差異(分別為P0.01,P0.001);與5FU組比較,H組瘤體有顯著減小(P0.01)。3、HE染色結(jié)果:腫瘤細(xì)胞向周圍骨骼肌組織大面積侵襲,炎性細(xì)胞浸潤(rùn),大量新生血管形成以及細(xì)胞核呈不對(duì)稱分裂象,提示腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)增殖能力極強(qiáng)。4、qPCR結(jié)果:與M組比較,5FU組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,H組小鼠PGK1的mRNA表達(dá)量均降低,且有顯著性差異(P0.001);與5FU組比較,H組PGK1的mRNA表達(dá)量降低,有顯著減小(P0.001)。與M組比較,5FU組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,H組小鼠LDHA的mRNA表達(dá)量均降低,且有顯著性差異(P0.05);與5FU組比較,H組LDHA的mRNA表達(dá)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與M組相比,5FU組、H組的PKM2、HIF1α的mRNA表達(dá)量無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。5、Western blot顯示:與M組相比,5FU組、H組的HIF1α的蛋白表達(dá)量無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。6、免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果:與M組相比較,5FU組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,H組CD68、CD163、IL-6陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)均明顯減少,且有顯著性差異(均為P0.001);與5FU組相比,H組CD68、CD163、IL-6陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)亦明顯降低,具有顯著性差異(均為P0.001)。[結(jié)論]1、黃芪顆粒的最佳給藥劑量為化療后給予黃芪劑量為25mg·kg~(-1);2、黃芪顆粒可增強(qiáng)5FU的抗腫瘤作用,能抑制腫瘤細(xì)胞對(duì)周圍正常組織及骨骼肌組織的侵襲和破壞,在腫瘤細(xì)胞侵襲、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、血管新生、細(xì)胞核分裂等病理表現(xiàn)改善更為明顯。3、在腫瘤細(xì)胞中,化療后給予黃芪顆粒通過(guò)抑制極化的M2型巨噬細(xì)胞的表達(dá),減少IL-6的分泌,進(jìn)而抑制PGK1的表達(dá),從而達(dá)到改善腫瘤細(xì)胞能量代謝,發(fā)揮抗腫瘤的作用;而非通過(guò)抑制HIF1α,進(jìn)而抑制其下游PGK1活化來(lái)抑制腫瘤細(xì)胞能量代謝。
【圖文】：

荷瘤小鼠體重的影響（接種后前七天）（n on the weight of H22 bearing mice(In the firs荷瘤小鼠體重的影響（接種后后七天）（ts on the weight of H22 bearing mice（After seM 組比較，接種后前七天給藥組均注射化療，且各組間體重?zé)o明顯差異。由圖 2 可知

*P<0.05，***P<0.001；與 5FU 組比較圖 3 對(duì)荷瘤小鼠腫瘤體積的影響（n=6Effects on the size of tumor tissue of H22 bea 組比較，給藥組各組小鼠的腫瘤體積減小性差異(分別為 P<0.05，P<0.05，P<0.05)，001)；與 5FU 組比較，5FU+H 中組瘤體體藥組體積減少不明顯，且無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。驗(yàn)可行性好。化療后給予黃芪高中低劑量組的荷瘤小鼠體用了化療后給予黃芪中劑量組(H 組)為有驗(yàn)也綜合黃芪對(duì)化療后荷瘤小鼠體重和腫瘤H 組)進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)，，實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致。
【學(xué)位授予單位】：江西中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R285.5

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 葉敏君;;黃芪顆粒聯(lián)合阿昔洛韋治療復(fù)發(fā)性阿弗他潰瘍的療效觀察[J];河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2010年12期

2 李琴;;孟魯斯特聯(lián)合黃芪顆粒在兒童咳嗽變異性哮喘中的療效觀察[J];吉林醫(yī)學(xué);2013年21期

3 張玉清;;黃芪顆粒防治兒童反復(fù)呼吸道感染的臨床觀察[J];西部醫(yī)學(xué);2012年01期

4 梁軍;;黃芪顆粒制作工藝研究[J];黑龍江醫(yī)藥;2012年03期

5 辛朝雄;謝華麗;楊儉;吳小霞;邱哲;;黃芪顆粒輔助治療淋巴結(jié)結(jié)核的臨床觀察[J];現(xiàn)代醫(yī)院;2012年11期

6 劉超;;黃芪顆粒對(duì)紫癜性腎炎后續(xù)治療的療效觀察[J];川北醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2011年01期

7 劉超;;黃芪顆粒對(duì)紫癜性腎炎后續(xù)治療的療效觀察[J];華西醫(yī)學(xué);2010年01期

8 葉世武;;黃芪顆粒治療小兒多汗癥的臨床療效觀察[J];兒科藥學(xué)雜志;2009年02期

9 邱億騰,周才,李容漢,林少勇,曾麗;黃芪顆粒輔佐治療小兒反復(fù)呼吸道感染的療效觀察[J];實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志;2004年07期

10 鄭浪花;林慧;曾活;;黃芪顆粒對(duì)原發(fā)性高血壓動(dòng)態(tài)動(dòng)脈硬化指數(shù)的影響[J];中國(guó)當(dāng)代醫(yī)藥;2016年01期

相關(guān)會(huì)議論文 前9條

1 黃殷;徐培菊;;黃芪顆粒治療小兒反復(fù)呼吸道感染的臨床療效[A];第五次全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合中青年學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2004年

2 段雪云;吳松濤;;防己黃芪顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究(摘要)[A];中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)2014第七次臨床中藥學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2014年

3 張愛(ài)華;曹衛(wèi)華;魏愛(ài)風(fēng);黃麗紅;;黃芪顆粒對(duì)早期糖尿病腎病療效的研究[A];全國(guó)首屆代謝綜合征的基礎(chǔ)與臨床專題學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2004年

4 李白恩;康國(guó)貴;;黃芪顆粒對(duì)兒童單純性腎病綜合征免疫功能的影響[A];2008年浙江省腎臟病學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2008年

5 陳騰;簡(jiǎn)桂花;李軍輝;汪年松;;黃芪顆粒對(duì)糖尿病腎病大鼠腎臟中TLR4/MyD88信號(hào)通路影響[A];中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)腎臟疾病專業(yè)委員會(huì)2018年學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要匯編[C];2018年

6 戴宇文;傅海東;劉愛(ài)民;陳業(yè)歡;;黃芪顆粒對(duì)兒童單純性腎病綜合征治療作用的研究[A];慶祝浙江省中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)成立三十周年論文集粹2011[C];2011年

7 陳騰;;黃芪顆粒對(duì)糖尿病腎病大鼠腎臟中TLR4/MyD88信號(hào)通路的影響[A];中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)腎臟疾病專業(yè)委員會(huì)2018年學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要匯編[C];2018年

8 張?jiān)?;黃芪顆粒和孟魯司特鈉治療兒童哮喘療效觀察[A];第十一次全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合兒科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2004年

9 姚明;;亞急性皮膚型紅斑狼瘡1例[A];2017全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2017年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前1條

1 俞淑敏（上海市第一人民醫(yī)院兒內(nèi)科副主任醫(yī)師）;寶寶長(zhǎng)期咳嗽怎么辦[N];上海中醫(yī)藥報(bào);2005年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前9條

1 李影;基于能量代謝探討黃芪顆粒對(duì)H22荷瘤小鼠化療增效機(jī)制的研究[D];江西中醫(yī)藥大學(xué);2019年

2 李雙雙;黃芪顆粒對(duì)過(guò)敏性紫癜患兒免疫功能的影響[D];湖北中醫(yī)藥大學(xué);2019年

3 葉蓁;非索非那定體內(nèi)探針?lè)ǹ疾於鄤┝奎S芪顆粒對(duì)人體P-gp活性影響的隨機(jī)、安慰劑對(duì)照研究[D];浙江大學(xué);2010年

4 韋練;復(fù)方石斛黃芪顆粒的藥學(xué)研究[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2013年

5 崔雪梅;黃芪顆粒提高豬、雞免疫功能和生長(zhǎng)性能的臨床試驗(yàn)[D];河北農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

6 楊紅梅;黃芪中黃芪甲苷提取工藝研究和黃芪顆粒的制備[D];廣西大學(xué);2017年

7 周玲娟;黃芪聯(lián)合西藥治療兒童原發(fā)性腎病綜合征系統(tǒng)評(píng)價(jià)[D];山東中醫(yī)藥大學(xué);2009年

8 孫京惠;玉丹榮心丸治療兒童反復(fù)呼吸道感染氣陰兩虛型的臨床和實(shí)驗(yàn)研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2007年

9 劉丹;脫氧雪腐鐮刀菌烯醇的毒性及黃芪的解毒作用研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

本文編號(hào)：2691315