【摘要】：[目的]實驗研究顯示黃芪具有輔助抗腫瘤作用,已在臨床上得到了證實。氟尿嘧啶是一種廣譜抗腫瘤藥物,課題組對H22荷瘤小鼠采用氟尿嘧啶(5-Fluorouracil,5FU)化療1周,而后給予黃芪顆粒1周,發(fā)現(xiàn)化療后給予黃芪顆粒可以明顯抑制腫瘤的增殖,鞏固化療療效。通過qPCR實驗檢測發(fā)現(xiàn)化療后黃芪顆粒給藥組的糖酵解重要基因磷酸甘油酸激酶1(phosphoglycerate kinase 1,PGK1)表達明顯降低,為明確其機制,我們擬從腫瘤相關(guān)巨噬細胞和缺氧誘導因子-1α(hypoxiain-duciblefactors-1alpha,HIF1α)進行研究,嘗試闡明黃芪通過改善糖酵解產(chǎn)生化療增效作用的機制。[方法]1、藥效試驗昆明小鼠30只,隨機分成模型組(M)、氟尿嘧啶組(5FU)、5FU化療后給予黃芪顆粒高中低劑量組,于小鼠右側(cè)前肢腋窩皮下注入0.2 mL 1.5×10~7個.mL~(-1)的H22細胞懸浮液,建立肝癌模型小鼠。造模次日開始給藥,前7日除M組注射生理鹽水外,其它各組均腹腔注射5FU溶液;自第8日起,M組和5FU組灌胃生理鹽水,化療后黃芪高、中、低劑量組灌胃相應劑量黃芪溶液。給藥結(jié)束后,統(tǒng)計分析各組小鼠的體重及瘤體體積,并以此為判斷依據(jù)選擇最佳的給藥劑量的篩選。2、黃芪顆粒對化療藥抗腫瘤增效作用昆明小鼠18只,隨機分成模型組(M)、氟尿嘧啶組(5FU)、5FU化療后給予黃芪顆粒中劑量組(H),于小鼠右側(cè)前肢腋窩皮下注入0.2 mL 1.5×10~7個.mL~(-1)的H22細胞懸浮液,建立肝癌模型小鼠。造模次日開始給藥,前7日除M組注射生理鹽水外,其它各組均腹腔注射5FU溶液;自第8日起,M組和5FU組灌胃生理鹽水,H組灌胃中劑量黃芪溶液。給藥結(jié)束后,統(tǒng)計分析各組小鼠的瘤體體積及HE染色結(jié)果,并以此為判斷依據(jù)黃芪顆粒對化療藥抗腫瘤增效作用。3、機制探討采用實時定量PCR法(qPCR)檢測PGK1、HIF1α、乳酸脫氫酶A(Lactate Dehydrogenase A,LDHA)、丙酮酸激酶2(Pyruvate kinase isozymes M2,PKM2)mRNA表達量;采取蛋白免疫印跡法(Western blot)檢測HIF1α的表達;通過免疫組織化學的方法,觀察腫瘤組織中CD68、CD163、白細胞介素-6(interleukin-6,IL-6)陽性細胞的表達情況,光鏡下計數(shù)染色陽性細胞數(shù)并進行統(tǒng)計分析。試圖從能量代謝角度探討化療后給予黃芪顆粒對H22荷瘤小鼠化療增效機制的研究。[結(jié)果]1、對小鼠體重的影響:與M組比較,各給藥組荷瘤小鼠體重均顯著性降低,且其余各組組間在前7天注射氟尿嘧啶時無顯著性差異。但隨著中藥的給藥時間延長,聯(lián)合給藥的三個組體重增加趨勢明顯,且為后給藥的高、中劑量組體重增加最明顯。2、對荷瘤小鼠體積的影響:瘤體體積:與M組比較,5FU組、H組小鼠的腫瘤體積減小,具有顯著性差異(分別為P0.01,P0.001);與5FU組比較,H組瘤體有顯著減小(P0.01)。3、HE染色結(jié)果:腫瘤細胞向周圍骨骼肌組織大面積侵襲,炎性細胞浸潤,大量新生血管形成以及細胞核呈不對稱分裂象,提示腫瘤細胞生長增殖能力極強。4、qPCR結(jié)果:與M組比較,5FU組無統(tǒng)計學意義,H組小鼠PGK1的mRNA表達量均降低,且有顯著性差異(P0.001);與5FU組比較,H組PGK1的mRNA表達量降低,有顯著減小(P0.001)。與M組比較,5FU組無統(tǒng)計學意義,H組小鼠LDHA的mRNA表達量均降低,且有顯著性差異(P0.05);與5FU組比較,H組LDHA的mRNA表達無統(tǒng)計學意義。與M組相比,5FU組、H組的PKM2、HIF1α的mRNA表達量無統(tǒng)計學差異。5、Western blot顯示:與M組相比,5FU組、H組的HIF1α的蛋白表達量無統(tǒng)計學差異。6、免疫組織化學實驗結(jié)果:與M組相比較,5FU組無統(tǒng)計學意義,H組CD68、CD163、IL-6陽性細胞數(shù)均明顯減少,且有顯著性差異(均為P0.001);與5FU組相比,H組CD68、CD163、IL-6陽性細胞數(shù)亦明顯降低,具有顯著性差異(均為P0.001)。[結(jié)論]1、黃芪顆粒的最佳給藥劑量為化療后給予黃芪劑量為25mg·kg~(-1);2、黃芪顆粒可增強5FU的抗腫瘤作用,能抑制腫瘤細胞對周圍正常組織及骨骼肌組織的侵襲和破壞,在腫瘤細胞侵襲、炎性細胞浸潤、血管新生、細胞核分裂等病理表現(xiàn)改善更為明顯。3、在腫瘤細胞中,化療后給予黃芪顆粒通過抑制極化的M2型巨噬細胞的表達,減少IL-6的分泌,進而抑制PGK1的表達,從而達到改善腫瘤細胞能量代謝,發(fā)揮抗腫瘤的作用;而非通過抑制HIF1α,進而抑制其下游PGK1活化來抑制腫瘤細胞能量代謝。
【圖文】：

荷瘤小鼠體重的影響（接種后前七天）（n on the weight of H22 bearing mice(In the firs荷瘤小鼠體重的影響（接種后后七天）（ts on the weight of H22 bearing mice（After seM 組比較，接種后前七天給藥組均注射化療，且各組間體重無明顯差異。由圖 2 可知

*P<0.05，***P<0.001；與 5FU 組比較圖 3 對荷瘤小鼠腫瘤體積的影響（n=6Effects on the size of tumor tissue of H22 bea 組比較，給藥組各組小鼠的腫瘤體積減小性差異(分別為 P<0.05，P<0.05，P<0.05)，001)；與 5FU 組比較，5FU+H 中組瘤體體藥組體積減少不明顯，且無統(tǒng)計學意義。驗可行性好。化療后給予黃芪高中低劑量組的荷瘤小鼠體用了化療后給予黃芪中劑量組(H 組)為有驗也綜合黃芪對化療后荷瘤小鼠體重和腫瘤H 組)進行后續(xù)實驗，，實驗結(jié)果一致。
【學位授予單位】：江西中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5

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本文編號：2691315