發(fā)布時間：2020-05-31 16:39

【摘要】：壇紫菜作為一種常見的大型海藻,占我國養(yǎng)殖紫菜總量的80%以上,在《本草綱目》等中藥典籍中均有記載,其中含有維生素、蛋白質(zhì)、多糖等豐富的營養(yǎng)物質(zhì)。壇紫菜多糖是壇紫菜中的主要活性成分之一,屬硫酸化多糖,具有抗氧化和免疫調(diào)節(jié)等多種生物活性,這些活性往往與理化性質(zhì)、分子量大小、結(jié)構(gòu)等有著密切關(guān)系。本文以壇紫菜(P.haitanensis)為試驗材料,采用傳統(tǒng)的水提醇沉法,經(jīng)過除蛋白、透析、冷凍干燥后得到壇紫菜粗多糖(PHP),得率為7.1%。用H_2O_2-Vc體系對粗多糖進行降解,當降解條件為:H_2O_2(5 mmol/L)+Vc(0.5 mmol/L)、H_2O_2(4 mmol/L)+Vc(1 mmol/L)、H_2O_2(4 mmol/L)+Vc(1.5 mmol/L)、H_2O_2(20 mmol/L)+Vc(20 mmol/L),將PHP水溶液按上述條件分別在30℃反應(yīng)2 h時,得到的降解組分的分子量分別為329 kDa、203kDa、128 kDa和10 kDa,依次命名為PHPD-I、PHPD-II、PHPD-III和PHPD-IV。紅外光譜分析表明這種降解方法沒有破壞壇紫菜多糖的主要結(jié)構(gòu)。理化性質(zhì)測定結(jié)果表明,PHP、PHPD-I、PHPD-II、PHPD-III和PHPD-IV主要由半乳糖組成,且糖含量分別為59.11%、54.63%、60.65%、56.07%、58.76%,蛋白含量分別為9.1%、7.08%、8.18%、5.62%、5.07%,硫酸基含量依次為4.9%、6.2%、4.5%、6.7%、5.7%,3,6-內(nèi)醚-半乳糖含量分別為11.13%、7.17%、14.34%、10.26%、9.32%,半乳糖含量分別為46.89%、46.2%、45.01%、44.51%、50.7%。體外抗氧化活性和細胞免疫活性測定結(jié)果表明,PHP及其降解組分都具有一定的抗氧化活性和細胞免疫活性,且呈濃度依賴性。此外,四個降解組分的活性高于PHP,其中分子量最小的組分PHPD-IV的活性最強。將活性最佳的組分PHPD-IV經(jīng)DEAE-52纖維素柱純化后得到五個組分,分別為PHPD-IV-1、PHPD-IV-2、PHPD-IV-3、PHPD-IV-4和PHPD-IV-5,得率分別為3.3%、36.6%、20.2%、6.6%和6.9%。細胞免疫活性測定結(jié)果顯示,PHPD-IV-4的活性最佳,在對五個組分的理化性質(zhì)測定結(jié)果顯示PHPD-IV-4的硫酸基含量最高。接著以PHPD-IV-4為試驗材料,對MAPKs信號通路進行研究,發(fā)現(xiàn)MAPKs信號通路通過上調(diào)ERK、JNK、p38的表達量來參與壇紫菜多糖的免疫調(diào)節(jié)過程。將PHPD-IV-4經(jīng)Sephadex-G50純化后,利用GC、GC-MS進行單糖組成分析。結(jié)果顯示,PHPD-IV-4是由半乳糖、6-O-Me-半乳糖組成的。利用紅外光譜法和核磁共振光譜法對PHPD-IV-4的結(jié)構(gòu)進行解析,發(fā)現(xiàn)其中含有3,6-內(nèi)醚半乳糖,且具有α和β兩種構(gòu)型的糖苷鍵,結(jié)構(gòu)中有→3)β-D-半乳糖(1→4)3,6-內(nèi)醚-α-L-半乳糖(1→和→3)β-D-半乳糖(1→4)α-L-半乳糖-6-S(1→這兩種二糖構(gòu)成的重復(fù)結(jié)構(gòu)單元,其中部分半乳糖的C-6位和3,6-內(nèi)醚-半乳糖的C-2位被甲氧基取代。
【圖文】：

圖 2.1 壇紫菜粗多糖的提取流程圖Fig. 2.1 Flow chart of extraction of crude Porphyra haitanensis polysacchari壇紫菜粗多糖降解條件的篩選采用 H2O2-Vc 結(jié)合的方法降解壇紫菜粗多糖，此方法模擬了植物體內(nèi)首先對 H2O2和 Vc 的濃度及反應(yīng)時間進行了考查，如表 3 所示。不c 直接加入 0.5%的 PHP 水溶液中，在恒溫水浴鍋中于 30°C 分別攪拌津 LC-2010（配有 RID-20 示差檢測器）上用 HPGPC 法測定所有降色譜柱為 TSK-GEL G4000PWXL和 TSK-GEL G3000PWXL（7.8 mm測器溫度都為 25°C，以 0.02 mol/L 的磷酸鹽緩沖液（pH 6.0)為流動/min，進樣量為 20 μL。曲線：將葡聚糖標準品（5、12、25、50、80、150、270 kDa）溶在/mL 的溶液，按照分子量大小依次進樣。以保留時間為橫坐標，以坐標，繪制標準曲線。

圖 2.2 壇紫菜粗多糖及其降解組分的 HPGPC 圖A.TSK-gel G4000PWXL 的分子量標準曲線; B.PHPD-I、PHPD-II、PHPD-III 的 HPGPC圖;C.TSK-gel G3000PWXL 的分子量標準曲線;D.PHPD-IV 的 HPGPC 圖Fig. 2.2 High performance gel permeation chromatography (HPGPC) profile of degraded fractions.A. Standard curve of average molecular weight determination of TSK-GEL G4000PWXL. B.HPGPC profile of PHPD-I, PHPD-II, and PHPD-III. C. Standard curve of average molecular weightdetermination of TSK-GEL G3000PWXL. D. HPGPC profile of PHPD-IV.將 4 份 100 mg 的壇紫菜粗多糖分別按照 H2O2（5 mmol/L）+Vc（0.5 mmol/L）、H2O2（4 mmol/L）+Vc（1 mmol/L）、H2O2（4 mmol/L）+Vc（1.5 mmol/L）和 H2O2（20 mmol/L）+Vc（20 mmol/L）的降解條件反應(yīng) 2 h，進行大量制備，，降解完成后抽干，然后溶于雙蒸水中，再用截留量為 3500 Da 的透析袋對雙蒸水透析 3 天，隨后冷凍干燥，即得 4 個不同分子量段的樣品，得率分別為 68%（PHPD-I）、72%（PHPD-II）、69%（PHPD-III）、70%（PHPD-IV）。2.2.3 壇紫菜粗多糖及其降解組分的紅外光譜測定
【學(xué)位授予單位】：西北大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R284;R285

【參考文獻】

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本文編號：2690156