【摘要】：目的:如圣湯出自由明太祖第五子周定王主持,教授滕碩、長史劉醇等人執(zhí)筆匯編而成的《普濟(jì)方》,該書是中國歷史上最大的方劑書籍。處方由四味藥物:桔梗、甘草、牛蒡子和麥門冬組成,書中記載其功效主要為治痰去熱,利咽喉,治咽中有瘡咽物不下等。通過查閱現(xiàn)代研究文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn),這四味單味藥在治療咽喉腫痛和抑菌方面均有一定作用,主要作用為抗菌消炎方面。目前,科研文獻(xiàn)中有關(guān)如圣湯單味藥研究的報(bào)道較多,但關(guān)于如圣湯的研究較少,對(duì)如圣湯現(xiàn)代制劑研究未見報(bào)道。因此,本課題通過文獻(xiàn)檢索明確四味中藥抗菌消炎的活性組分:桔�？傇碥�、甘草總?cè)圃碥�、牛蒡子總木脂素、麥門冬總皂苷和多糖,分別對(duì)其進(jìn)行提取、純化,并比較研究純化前后體外藥效,采用正交優(yōu)化確定各有效組分的最佳提取工藝,并采用大孔吸附樹脂法確定各有效組分的最佳純化工藝,采用牛津杯法和二倍稀釋法分別對(duì)各組分純化前后進(jìn)行體外抑菌作用效果進(jìn)行比較研究。將純化前后的有效成分按照《普濟(jì)方》原方中配伍比例進(jìn)行配伍,比較配伍組和如圣湯的體外抑菌作用。將配伍組制成如圣口服液,采用HPLC方法測(cè)定如圣口服液中桔梗皂苷D的含量。同時(shí),對(duì)如圣口服液進(jìn)行初步的藥效學(xué)研究。為如圣湯的合理利用和開發(fā)提供依據(jù)。材料與方法:1.采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)法分別對(duì)桔�？傇碥�、甘草總?cè)圃碥�、牛蒡子總木脂素、麥門冬總皂苷和多糖進(jìn)行提取工藝考察,確定各組分的最佳提取工藝;采用大孔吸附樹脂法,通過靜態(tài)、動(dòng)態(tài)吸附與解吸實(shí)驗(yàn),優(yōu)選處方中桔梗、甘草、牛蒡子、麥門冬有效組分的最佳純化工藝。2.使用牛津杯法和二倍稀釋法,選擇的指標(biāo)是抑菌圈直徑和MIC值,研究桔�？傇碥铡⒏什菘�?cè)圃碥�、牛蒡子總木脂素、麥門冬總皂苷和多糖純化前后對(duì)金黃色葡萄球菌和肺炎鏈球菌體外抑菌作用的差異。3.采用牛津杯法和二倍稀釋法,將抑菌圈直徑和MIC值作為指標(biāo),對(duì)如圣湯總提液和配伍純化前后的有效組分進(jìn)行抑菌作用的研究。4.采用HPLC方法,對(duì)自制的如圣口服液中桔梗皂苷D的含量進(jìn)行測(cè)定,建立如圣口服液的初步標(biāo)準(zhǔn)。5.如圣口服液初步藥效學(xué)研究,通過小鼠氨水引咳和小鼠酚紅排泄實(shí)驗(yàn)來證明如圣口服液的鎮(zhèn)咳和祛痰作用。結(jié)果:1.桔�？傇碥盏闹苽�:最佳提取工藝是提取3次,每次用6倍量60%乙醇提取1.5小時(shí)。最佳純化工藝是用D101型大孔吸附樹脂進(jìn)行純化,以飲片量與樹脂體積比換算上樣量計(jì)算結(jié)果為0.75g·mL~(-1),上樣濃度為0.20g·mL~(-1),除雜用水量為50mL,以80%乙醇為洗脫劑,洗脫用量60mL,洗脫液蒸干,即得含量為7.40mg·g~(-1)、出膏率為1.99%的桔梗總皂苷純化物。2.甘草總?cè)圃碥盏闹苽?最佳提取工藝是提取2次,每次用8倍量60%乙醇提取1.5小時(shí)。最佳純化工藝是用HPD-300型大孔吸附樹脂進(jìn)行純化,以飲片量與樹脂體積比換算上樣量計(jì)算結(jié)果為0.25g·mL~(-1),上樣濃度為0.10g·mL~(-1),除雜用水量為72mL,以70%乙醇為洗脫劑,洗脫用量70mL,洗脫液蒸干,即得含量為252.33mg·g~(-1)、出膏率為11.85%的甘草總?cè)圃碥占兓铩?.牛蒡子總木脂素的制備:最佳提取工藝是將牛蒡子較淺破碎(壓碎,不過篩),提取3次,每次用12倍量80%乙醇提取1.5小時(shí)。最佳純化工藝是用AB-8型大孔吸附樹脂進(jìn)行純化,以飲片量與樹脂體積比換算上樣量計(jì)算結(jié)果為0.35 g·mL~(-1),上樣濃度為0.050g·mL~(-1),除雜用水量為60mL,以70%乙醇為洗脫劑,洗脫用量50mL,洗脫液蒸干,即得含量為205.09mg·g~(-1)、出膏率為7.88%的牛蒡子總木脂素純化物。4.麥冬多糖的制備:最佳提取工藝是提取2次,每次用8倍量水提取0.5小時(shí),以濃度80%乙醇進(jìn)行醇沉,收集沉淀物蒸干,即得含量為28.80mg·g~(-1)、出膏率為28.94%的麥冬多糖純化物。5.麥冬總皂苷的制備:最佳的提取工藝是提取3次,每次用8倍量70%乙醇提取1小時(shí)。最佳純化工藝是用D101型大孔吸附樹脂進(jìn)行純化,以飲片量與樹脂體積比換算上樣量計(jì)算結(jié)果為1.50g·mL~(-1),上樣濃度為0.10g·mL~(-1),除雜用水量為72mL,以70%乙醇為洗脫劑,洗脫用量60mL,洗脫液蒸干,即得含量為0.50mg·g~(-1)、出膏率為2.03%的麥冬總皂苷純化物。6.桔�？傇碥占兓昂篌w外抑菌作用比較:作用于金黃色葡萄球菌的抑菌圈直徑為9.33±0.58mm、14.17±1.61mm、MIC值分別為125.00mg·mL~(-1)、62.50mg·mL~(-1)、作用于肺炎鏈球菌的抑菌圈直徑為9.67±0.58mm、10.27±0.58mm、MIC值分別31.25mg·mL~(-1)、31.25mg·mL~(-1);甘草總?cè)圃碥占兓昂篌w外抑菌作用比較:作用于金黃色葡萄球菌的抑菌圈直徑為10.27±0.58mm、24.06±0.99mm、MIC值分別為250.00mg·mL~(-1)、125.00mg·mL~(-1)、作用于肺炎鏈球菌的抑菌圈直徑為7.68±0.15mm、8.75±0.46mm、MIC值分別31.25mg·mL~(-1)、15.63mg·mL~(-1);牛蒡子總木脂素純化前后體外抑菌作用比較:作用于金黃色葡萄球菌的抑菌圈直徑為9.33±0.58mm、10.00±0.50mm、MIC值分別為250.00mg·mL~(-1)、125.00mg·mL~(-1)、作用于肺炎鏈球菌的抑菌圈直徑為8.00±1.00mm、9.50±0.50、MIC值分別250.00mg·mL~(-1)、250.00mg·mL~(-1);麥冬多糖純化前后體外抑菌作用比較:作用于金黃色葡萄球菌的抑菌圈直徑為6.66±0.29mm、6.83±0.29mm、MIC值分別為250.00mg·mL~(-1)、250.00mg·mL~(-1)、作用于肺炎鏈球菌的抑菌圈直徑基本沒有,MIC值分別500.00mg·mL~(-1)、500.00mg·mL~(-1);麥冬總皂苷純化前后體外抑菌作用比較:作用于金黃色葡萄球菌的抑菌圈直徑為7.30±0.47mm、8.35±0.15mm、MIC值分別為250.00mg·mL~(-1)、125.00mg·mL~(-1)、作用于肺炎鏈球菌的抑菌圈直徑為7.26±0.35mm、7.55±0.10mm,MIC值分別250.00mg·mL~(-1)、125.00mg·mL~(-1)。7.如圣湯湯劑體外抑菌作用結(jié)果:作用于金黃色葡萄球菌和肺炎鏈球菌的抑菌圈直徑為14.00±1.73mm、9.33±1.53mm、MIC值分別為250.00mg·mL~(-1)、125.00mg·mL~(-1);配伍組純化前后體外抑菌作用結(jié)果:作用于金黃色葡萄球菌的抑菌圈直徑為16.33±1.53mm、17.67±2.52mm、MIC值分別為125.00mg·mL~(-1)、62.50mg·mL~(-1)、作用于肺炎鏈球菌的抑菌圈直徑為8.33±0.58mm、13.67±0.58mm、MIC值分別15.63mg·mL~(-1)、7.80mg·mL~(-1);結(jié)果顯示,配伍組分在純化前后的抑菌作用效果強(qiáng)于如圣湯,并且純化后配伍組的抑菌作用優(yōu)于純化前的配伍組。8.如圣口服液中桔梗皂苷D含量測(cè)定結(jié)果顯示,桔梗皂苷D進(jìn)樣量在0.15~14.45μg范圍內(nèi)線性關(guān)系較好,r=0.9995,測(cè)定桔梗皂苷D含量為18.69mg/mL。方法學(xué)考察精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性均良好,加樣回收率為RSD=1.78%。9.通過小鼠體內(nèi)藥效學(xué)研究表明,如圣口服液高劑量組能夠延長氨水引咳小鼠咳嗽的潛伏期和減少一定時(shí)間內(nèi)咳嗽的次數(shù)。如圣口服液高劑量組的小鼠酚紅排泄量大于陽性對(duì)照組。表明在如圣口服液的作用下,小鼠呼吸道黏膜排出的酚紅量增多,如圣口服液能夠影響氣道的通透性和分泌液量。小鼠藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)表明,如圣口服液具有鎮(zhèn)咳、祛痰的作用。結(jié)論:1.通過正交提取實(shí)驗(yàn)和動(dòng)靜態(tài)考察大孔吸附法對(duì)如圣湯中有效組分進(jìn)行提取和純化,確定工藝參數(shù)且工藝方法先進(jìn)合理,適合工業(yè)生產(chǎn)等優(yōu)點(diǎn),為桔梗、甘草、牛蒡子和麥冬四味藥物的進(jìn)一步研究及開發(fā)奠定理論基礎(chǔ)。2.通過有效組分純化前后抑菌圈直徑和MIC值說明,在對(duì)單味藥有效成分進(jìn)行純化的過程中,降低了出膏率,通過純化前后抑菌作用比較試驗(yàn),說明,在純化操作過程中,抑菌活性成分沒有明顯損失,表明純化工藝合理,減少復(fù)方服用量。3.通過配伍組和如圣湯抑菌效果比較,配伍組分在抑菌圈直徑和MIC上的抑菌效果都強(qiáng)于如圣湯。表明,配伍組不僅減少服用量,而且在療效上更具有優(yōu)勢(shì)。4.測(cè)定如圣口服液中桔梗皂苷D的含量,為如圣口服液建立了初步的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。5.通過體內(nèi)初步藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)表明,如圣口服液具有鎮(zhèn)咳和祛痰的作用,為如圣口服液在藥理方面上提供了依據(jù)。
【圖文】：

圖 1-1 標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為 y=6.8493x-0.0080 r=0.9998（n=6）。表明桔梗皂苷在 0.0255mL 范圍內(nèi)與吸光度呈良好的線性關(guān)系。2. 提取工藝研究2.1 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果表 1-3 正交試驗(yàn)直觀分析結(jié)果因素A 醇濃度（%）B 溶劑用量（倍）C 提取時(shí)間（h）D 提取次數(shù)（次）出膏率（%）總皂苷提取量（mg·g-1）權(quán)重分實(shí)驗(yàn) 1 1 1 1 1 31.11 26.62 0.84實(shí)驗(yàn) 2 1 2 2 2 24.44 24.93 0.74實(shí)驗(yàn) 3 1 3 3 3 23.33 13.94 0.52實(shí)驗(yàn) 4 2 1 2 3 37.78 19.44 0.78

HPD100 23.85 19.19 71.57HPD300 29.91 56.27 47.10HPD600 22.89 36.28 67.16計(jì)算公式如下：=（吸附前藥液質(zhì)量濃度 吸附后藥液質(zhì)量濃度） 藥液體積吸附量樹脂干重% = 100% （吸附前藥液質(zhì)量濃度 吸附后藥液質(zhì)量濃度）率（ ）吸附前藥液質(zhì)量濃度% = 100% （解吸后藥液質(zhì)量濃度 解吸后藥液體積率（ ）吸附總量通過實(shí)驗(yàn)結(jié)果，D101 型樹脂對(duì)桔梗總皂苷的吸附率和解吸率均較高。因此， D101 樹脂純化桔梗總皂苷。泄露曲線的繪制
【學(xué)位授予單位】：遼寧中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R283.6;R286.0

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 蔣利君;;抑菌圈直徑測(cè)量的人員比對(duì)[J];應(yīng)用預(yù)防醫(yī)學(xué);2012年01期

2 買爾旦;熱衣汗;;血中慶大霉素微量微生物法實(shí)驗(yàn)條件的考察[J];新疆醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1988年02期

3 王雨仙,張紹先,冀洪福;抑菌圈直徑測(cè)量的微機(jī)方法[J];齊齊哈爾師范學(xué)院學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);1992年01期

4 賀雯;;關(guān)于標(biāo)準(zhǔn)菌株用于室內(nèi)藥敏質(zhì)控代次的探討[J];現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生;2012年06期

5 閆東輝,張淑蘭,許淑珍,李志安;應(yīng)用6種M-H培養(yǎng)基測(cè)試磺胺類藥物抑菌圈直徑的結(jié)果分析[J];上海醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志;2001年03期

6 陳婷婷;王陽光;宋茹;;陳醋對(duì)蝦、蟹腐敗菌的抑制作用研究[J];中國調(diào)味品;2014年05期

7 褚少朋,邵海楓,李珍大,王衛(wèi)萍,曹紅琴;舒巴坦單劑對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌的體外抑菌活性研究[J];臨床檢驗(yàn)雜志;2004年05期

8 胡振英，，趙志銘，宋中樞，杜健，羅敬完;復(fù)方中草藥散劑的抗菌效力測(cè)定[J];中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志;1995年05期

9 乞永艷,駱尚驊,劉富海,許正鼎,謝玉衡;乳化劑對(duì)蜂膠抑菌作用的影響[J];中國養(yǎng)蜂;2001年05期

10 王悅;董薈慧;李有;劉忠梅;;13味中藥對(duì)雞大腸桿菌的抑菌試驗(yàn)[J];中國獸醫(yī)雜志;2013年11期

相關(guān)會(huì)議論文 前3條

1 李欣華;黃金偉;黃建勝;李國雄;王曉光;陳秀英;;亞胺培南對(duì)肺炎克雷伯菌抑菌圈直徑與KPC型碳青霉烯酶檢測(cè)[A];浙江省醫(yī)學(xué)會(huì)醫(yī)學(xué)微生物與免疫學(xué)及醫(yī)學(xué)病毒學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2009年

2 肖永紅;李耘;劉健;鐘巍;楊維維;;安妥沙星體外抗菌活性折點(diǎn)研究[A];第六屆全國抗菌藥物臨床藥理學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2006年

3 唐甜;崔澤華;倪衛(wèi)娜;廖曉萍;劉雅紅;孫堅(jiān);;一種基于酶失活的替加環(huán)素新型耐藥基因tet(X)的檢測(cè)方法[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)獸醫(yī)藥理毒理學(xué)分會(huì)第十五次學(xué)術(shù)討論會(huì)論文集[C];2019年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 李淵;痰熱清注射液對(duì)產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌耐藥性影響的研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2011年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 張倩;3D打印可吸收釋藥載體治療骨髓炎骨缺損的實(shí)驗(yàn)研究[D];青島大學(xué);2019年

2 張麗珉;如圣口服液制備工藝、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及初步藥效研究[D];遼寧中醫(yī)藥大學(xué);2019年

3 陳曦;利血平增敏微生物法檢測(cè)三種氟喹諾酮類藥物殘留的研究[D];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

4 李秀娟;納豆抗菌物質(zhì)提取及抗菌性研究[D];天津科技大學(xué);2012年

5 劉兵;蚯蚓抗菌肽提取純化及其性質(zhì)研究[D];貴州大學(xué);2008年

6 曾華穎;反芻動(dòng)物腸道共生放線菌類群多樣性分析[D];中山大學(xué);2012年

7 黃華平;利用群體感應(yīng)機(jī)制篩選生防細(xì)菌及其特性的初步研究[D];華南熱帶農(nóng)業(yè)大學(xué);2006年

8 唐明;百合多糖的提取、純化及抑菌活性研究[D];湖南農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

9 張霖;鼠傷寒沙門氏菌對(duì)雞致病性及其對(duì)藥物敏感性的試驗(yàn)[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

10 楊宇;艾蒿抑菌成分的分離提取及其功效研究[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

本文編號(hào)：2690140