【摘要】：背景胃癌是最常見的癌癥之一,對于晚期胃癌的患者而言,化療是最常見治療方案,然而,化療中凋亡抵抗的出現(xiàn)是治療的重要障礙,使得非凋亡機制如程序性壞死在抗腫瘤中的作用備受關(guān)注。研究發(fā)現(xiàn),富含小亮氨酸的雙糖鏈蛋白聚糖Biglycan(BGN)在多種腫瘤中異常高表達(dá),與腫瘤的遷移和侵襲密切相關(guān)。雷公藤紅素是雷公藤中獲取的三萜烯醇類化合物,能夠誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡來產(chǎn)生抗腫瘤活性。但是,目前雷公藤紅素能否誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞發(fā)生程序性壞死以及在此過程中是否影響B(tài)iglycan的表達(dá)仍未見報道。基于以上背景,我們提出假設(shè),雷公藤紅素可能通過調(diào)控Biglycan的水平誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞發(fā)生程序性壞死。因此,在本研究中,我們深入研究了雷公藤紅素誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞AGS及HGC-27發(fā)生程序性壞死的抗腫瘤作用,進一步探究了Biglycan在此過程中的作用及分子機制。我們的研究結(jié)果為基于Biglycan表達(dá)和程序性壞死的新的個性化抗腫瘤治療提供思路和策略。目的1.研究雷公藤紅素誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞發(fā)生程序性壞死的抗腫瘤作用;2.研究Biglycan在雷公藤紅素誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞程序性壞死中的作用及可能的分子機制。方法1.雷公藤紅素對胃癌細(xì)胞程序性壞死的影響利用MTT實驗分析雷公藤紅素對胃癌細(xì)胞存活率的影響;利用流式細(xì)胞術(shù)及Western blot實驗分析雷公藤紅素對胃癌細(xì)胞死亡率及程序性壞死信號的影響。2.雷公藤紅素靶向調(diào)控Biglycan涉及胃癌細(xì)胞程序性壞死利用Western blot檢測雷公藤紅素處理后胃癌細(xì)胞中Biglycan的表達(dá)變化;慢病毒過表達(dá)Biglycan后western blot檢測其過表達(dá)情況;MTT法、形態(tài)觀察結(jié)合流式細(xì)胞技術(shù)分析過表達(dá)Biglycan對雷公藤紅素誘導(dǎo)的胃癌細(xì)胞程序性壞死的影響。3.Biglycan調(diào)控雷公藤紅素誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞發(fā)生程序性壞死的分子機制結(jié)合慢病毒過表達(dá)Biglycan,利用Western Blot、免疫熒光等方法,選用程序性壞死抑制劑Nec-1、NSA,分析上調(diào)Biglycan對雷公藤紅素暴露后胃癌細(xì)胞程序性壞死分子RIP1、RIP3及下游信號MLKL的影響;探究抑制程序性壞死對胃癌細(xì)胞中雷公藤紅素調(diào)控Biglycan的干預(yù)作用。結(jié)果1.通過MTT、流式細(xì)胞技術(shù)和Western blot實驗,研究發(fā)現(xiàn)隨著雷公藤紅素以濃度依賴方式降低胃癌細(xì)胞HGC-27及AGS的存活率,同時增加細(xì)胞死亡率,促進程序性壞死信號RIP1及RIP3的表達(dá);2.通過Western blot、MTT、形態(tài)學(xué)觀察實驗,研究發(fā)現(xiàn)在胃癌細(xì)胞中隨著雷公藤紅素處理劑量增加,Biglycan的表達(dá)呈現(xiàn)濃度依賴性降低。過表達(dá)Biglycan能夠阻斷雷公藤紅素誘導(dǎo)的胃癌細(xì)胞程序性壞死發(fā)生;3.通過流式細(xì)胞技術(shù)、Western Blot、免疫熒光以及聯(lián)合程序性壞死抑制劑Nec-1和NSA,研究發(fā)現(xiàn)在胃癌細(xì)胞中,Biglycan能夠有效阻斷雷公藤紅素誘導(dǎo)的程序性壞死信號RIP1、RIP3的激活及MLKL由細(xì)胞質(zhì)向細(xì)胞膜的轉(zhuǎn)位。程序性壞死抑制劑Nec-1聯(lián)合Biglycan能夠雙重拮抗雷公藤紅素的抗胃癌作用。結(jié)論1.雷公藤紅素能夠誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞發(fā)生程序性壞死;2.雷公藤紅素通過下調(diào)Biglycan促進胃癌細(xì)胞程序性壞死;3.過表達(dá)Biglycan能夠抑制雷公藤紅素激活的程序性壞死信號RIP1、RIP3及MLKL的轉(zhuǎn)位進而阻斷胃癌細(xì)胞壞死。
【圖文】：

素誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞發(fā)生程序性壞死降低胃癌細(xì)胞 HGC-27 和 AGS 的細(xì)胞活力明確雷公藤紅素對正常胃細(xì)胞的活力是否有影響，我們在度（0.25 μM，0.5 μM，1 μM，2 μM）雷公藤紅素及 DMS 1 所示，與對照組相比，雷公藤紅素 0-1 μM 范圍內(nèi)，細(xì)公藤紅素達(dá)到 2 μM 時，胃細(xì)胞活力表現(xiàn)為顯著降低。

圖 2 雷公藤紅素對 HGC-27 和 AGS 細(xì)胞活力的影響Figure 2 Effect of celastrol on the viability of HGC-27 and AGS cells圖 2：雷公藤紅素能夠降低 HGC-27 和 AGS 細(xì)胞的活力。不同濃度（0，0.25 μM，0.5 μM2 μM）的雷公藤紅素處理細(xì)胞 24 h。MTT 檢測 HGC-27 (A) 和 AGS (B)的細(xì)胞活力。*and *P < 0.5。Figure 2 The viability of HGC-27 and AGS cells were reduced by Celastrol. Cells were tredifferent concentrations (0, 0.25 μM, 0.5 μM, 1 μM, 2 μM) of celastrol for 24 h. The cells vHGC-27 (A) and AGS (B) were detected by MTT assay. Error bar indicated SD of celastrol three independent experiments. Student’s t test, **P < 0.01 and *P < 0.5.2.1.2 雷公藤紅素使胃癌細(xì)胞 HGC-27 和 AGS 的死亡率升高為了進一步確認(rèn)雷公藤紅素對胃癌細(xì)胞 HGC-27 和 AGS 死亡的影響，，用 PI 染色結(jié)合流式細(xì)胞儀技術(shù)，檢測了雷公藤紅素對細(xì)胞死亡的影響。流式
【學(xué)位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R285

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 Gassimou Bangoura;;Prognostic signif icance of HIF-2α/EPAS1 expression in hepatocellular carcinoma[J];World Journal of Gastroenterology;2007年23期

本文編號：2689833