發(fā)布時間：2020-05-30 07:31

【摘要】：目的:牛黃(Calculus Bovis,C.Bovis,CB)是我國名貴的傳統(tǒng)中藥,主要應用于治療昏迷、譫妄,癲癇樣抽搐、咽喉膿腫、癰、癤等,現(xiàn)代研究也證實了其多元化的藥理作用。由于天然CB價格高昂且優(yōu)質藥源較少,開發(fā)了其替代品體外培育牛黃(Calculus Bovis Sativus,in vitro cultured Calculus Bovis,CBS),目前CBS的藥理作用被認為與天然CB等同,可以作為天然CB的理想替代品。CB中膽汁酸(Bile Acids,BAs)類和膽紅素類成分研究較多并被認為是發(fā)揮藥理作用的主要成分。中國藥典2015版中以膽酸(Cholic Acid,CA)和膽紅素來對天然CB及CBS進行質控,而由于CB成分較復雜,僅僅以CA和膽紅素這兩種成分進行質控不能很好地反應CB的質量標準,難以解釋其多種藥理作用,同時測定多種成分在對CB類藥材進行質量控制以及后續(xù)闡明其藥理作用等方面具有重要意義。本研究以CBS和天然CB作為主要研究對象,建立液相色譜-串聯(lián)質譜(Liquid Chromatography coupled with Tandem Mass Spectrometry,LC-MS/MS)法同測定了CBS和天然CB中�；撬�(Taurine,Tau)及多種BAs的含量,同時也建立了檢測全血和組織樣品中Tau和多種BAs濃度的方法,考察了其在小鼠體內藥代動力學過程及其組織分布情況,為其發(fā)揮藥效的物質基礎研究提供理論依據(jù)。方法:建立Tau及12種BAs濃度測定的LC-MS/MS法,天然CB及CBS磨粉過篩后溶解過濾,運用LC-MS/MS法檢測濾液中選定的13種成分的含量并比較其在不同類別和批次CB中含量差異;建立Tau及12種BAs在小鼠全血及組織樣本中的濃度測定LC-MS/MS法,處理不同時刻采集的灌服單劑量CBS和天然CB小鼠的全血及組織,用LC-MS/MS法檢測血清及組織中擬測定成分濃度。結果:1.成功建立同時檢測Tau及12種BAs的LC-MS/MS分析方法,該方法靈敏度高、專一性好、簡單快速,可應用于CBS和天然CB成分分析研究;2.全面分析比較了CBS和天然CB中Tau和12種BAs含量特征,結果顯示CBS中CA/DCA幾乎是天然CB的兩倍,天然CB中未結合型BAs/結合型BAs較CBS高。此外,本研究對CBS和天然CB中的Tau/(TCA+TDCA+TCDCA)進行了比較,結果并未發(fā)現(xiàn)顯著性差異;3.成功建立了同時測定小鼠生物樣本中Tau及12種BAs濃度的LC-MS/MS方法,該方法精密度、準確度、穩(wěn)定性等各項條件均符合生物等效性實驗測定方法要求,可應用于小鼠藥動學及組織分布的研究;4.在CBS組和天然CB組血液中均檢測到CA、DCA、TCA、TDCA、CDCA以及Tau,此外在CBS組血液和組織中還檢測到GCA。應用DAS2.1.1藥代動力學程序處理血藥濃度測得數(shù)據(jù),求出藥代動力學參數(shù),發(fā)現(xiàn)CA、DCA、TCA、CDCA、Tau以及GCA的AUC_((0-t))在兩組之間具有顯著性差異(P0.05),而TDCA的AUC_((0-t))在兩組之間無顯著性差異。CBS組中Tau和BAs總體在心和肺組織中分布較好,TCA和TDCA在脾和腦組織中也有一定分布,GCA和Tau在肺組織中分布較其他組織中好,CDCA在各個時間點各組織分布情況較穩(wěn)定。天然CB組CA在心、肺和腎中一直分布較低,GCA未在此組各組織中測得,Tau分布較CBS組差,而CDCA、TCA和TDCA組織分布情況在天然CB組與CBS組分布趨勢相同。結論:本文運用LC-MS/MS法分別建立了Tau及12種BAs的成分含量以及小鼠生物樣本中Tau及12種BAs的濃度測定方法,該方法靈敏度高、特異性強,適用于CB類藥材的成分分析、質量控制以及真?zhèn)舞b別。此外,對CBS和天然CB進行了小鼠入血成分的藥動學特征研究以及組織分布研究,為從藥動學角度研究其發(fā)揮藥效的物質基礎提供了一定方法。本研究為今后研究CB及含CB類、乃至其它動物類中藥提出一種可供參考的現(xiàn)代中藥質量標準和物質基礎研究思路和模式。
【圖文】：

Tau及12種BAs結構式Fig.1StructuresofTauandbileacids

14圖 1-2 Tau 和 12 種 BAs 離子圖Fig. 1-2 Electrospray ionization-tandem mass spectra of taurine and twelve bile acids in the negative ion mode
【學位授予單位】：華中科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5

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8 Stevenson IH;張s鉈，

本文編號：2687799