【摘要】：目的:體內外共同觀察五味子乙素(schisandrin B,Sch B)對腎缺血再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)致急性腎損傷(acute kidney injury,AKI)的影響,并探討其可能的作用機制。方法:1、體內實驗:將雄性的45只C57BL/6小鼠隨機性的分成3組,15只/組,即假手術組(Sham組)、模型組(即缺血再灌注組,I/R組)與五味子乙素預保護組(Sch B+I/R組),Sham組與I/R組小鼠在建模前用橄欖油(2 ml/kg)連續(xù)灌胃7天,Sch B+I/R組小鼠在建模前用Sch B[80 mg/(kg·d)]連續(xù)灌胃7天,構建腎缺血再灌注模型所選用的方法為雙側腎蒂夾閉法,于再灌注后的第1、2、7天各組按隨機數字表法選取5只小鼠,取小鼠眼眥內靜脈血檢測血肌酐(serum creatinine,Scr)與血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN);HE染色與糖原PAS染色觀察小鼠腎組織所發(fā)生的損傷情況;RT-PCR檢測腎組織中NGAL、Kim-1腎損傷相關m RNA的表達量;Western blot檢測腎組織中caspase-3、Bcl-2、Bax凋亡相關蛋白及LC3自噬相關蛋白的表達量;TUNEL染色法檢測腎組織內小管上皮細胞所發(fā)生的凋亡情況。2、體外實驗:隨機性將體外培養(yǎng)的腎小管上皮細胞(HK-2)分為對照組、缺氧/復氧組(Hypoxia/Reoxygenation,H12/R6h、H12/R12h、H12/R24h)、Sch B+H/R組(Sch B+H12/R6h、Sch B+H12/R12h、Sch B+H12/R24h),Sch B+H/R組首先用Sch B預孵育6h后再行缺氧/復氧處理,CCK8試劑盒檢測各組HK-2細胞的活性,Western blot所需檢測的蛋白同體內實驗,Annexin-V/PI染色檢測HK-2細胞的凋亡率。結果:1、體內實驗:血Scr與血BUN結果顯示,第1、2天,與Sham組比較,Sch B+I/R組血Scr與BUN水平均顯著升高,與I/R組比較,Sch B+I/R組血Scr與BUN水平均顯著降低;I/R組與Sch B+I/R組血Scr與BUN水平均在第1天最高,第2、7天則逐漸下降,且在第7天已恢復正常水平。HE染色結果顯示,Sham組小鼠腎組織的結構未見明顯改變;I/R組小鼠腎組織間質可見大量炎性細胞的浸潤,小管損傷明顯加重等;而Sch B+I/R組病變明顯輕于I/R組,且I/R組與Sch B+I/R組腎組織均在第1天損傷最重,第2、7天則逐漸減輕。糖原PAS結果顯示,Sham組腎組織結構未發(fā)生改變;I/R組腎組織內腎小球系膜細胞出現增生,且有PAS陽性染色物質的沉積,小球上的血管壁發(fā)生非均勻性的增厚;Sch B+I/R組腎組織所出現的病理改變則是明顯較I/R組輕,且I/R組與Sch B+I/R組腎組織均在第1天發(fā)生的病理改變最重,第2、7天則逐漸減輕。RT-PCR結果顯示,第1、2天,與Sham組比較,I/R組與Sch B+I/R組腎組織中Kim-1、NGAL m RNA水平均顯著升高,且I/R組上升更為顯著;I/R組與Sch B+I/R組腎組織中Kim-1、NGAL m RNA水平均在第1天最高,第2、7天則逐漸下降。Western blot結果顯示,在第1、2天,與Sham組比較,I/R組與Sch B+I/R組腎組織中caspase-3、LC3蛋白表達明顯升高,Bcl-2/Bax值明顯降低;而與I/R組相比,Sch B+I/R組caspase-3蛋白表達減少,Bcl-2/Bax比值、LC3蛋白表達增多;在第7天三組腎組織中相關蛋白的表達已無差別。TUNEL染色結果顯示,與Sham組相比,I/R組與Sch B+I/R組中凋亡指數均明顯的升高,而I/R組凋亡指數明顯高于Sch B+I/R組,且I/R組與Sch B+I/R組均在第1天凋亡指數最高,第2、7天則逐漸降低,在第7天與Sham組已無差別。2、體外實驗:CCK8結果顯示,H/R組與Sch B+H/R組的細胞活性均出現明顯的下降,但Sch B+H/R組較H/R組的細胞活性是增長的,且隨復氧時間的延長,各組細胞活性逐漸增多;Western blot結果顯示,與對照組相比,H/R組與Sch B+H/R組HK-2細胞中LC3蛋白表達明顯升高、Bcl-2/Bax值明顯降低,與H/R組相比,Sch B+H/R組LC3水平與Bcl-2/Bax比值均上升,且隨復氧時間的延長,兩組LC3水平下降、Bcl-2/Bax值上升;Annexin-V/PI染色結果顯示,與對照組相比,H/R組與Sch B+H/R組細胞凋亡率均上升,但H/R組上升更為顯著,且隨復氧時間的延長,兩組細胞凋亡率均減少。結論:體內實驗中,C57BL/6小鼠夾閉雙側腎蒂40min能夠成功誘導出I/R所致的AKI模型,Sch B對缺血再灌注致AKI小鼠的腎功能、病理損傷及細胞凋亡情況有一定的改善作用;Sch B對缺氧/復氧造成HK-2細胞的死亡有一定保護作用,其可能與調節(jié)凋亡相關因子caspase-3、Bcl-2、Bax與自噬相關因子LC3有關,且在AKI的早期Sch B所發(fā)揮的保護作用更為顯著。
【圖文】：

圖 1 小鼠 I/R 后各組血 Scr 與 BUN 值的比較（ x±s,n=5）小鼠 I/R 后各組血 Scr 值的統(tǒng)計結果；（B）小鼠 I/R 后各結果。與 Sham 組相比，，##P<0.01#P<0.05；與 SchB+I/R 組相5。表 2 組內各組血 Scr 與 BUN 值的比較（ x±s,n=5） 時間（天） 鼠數（只） Scr（mg/dl） BU 組 第 1 天 5 0.263±0.058 34第 2 天 5 0.252±0.043 33第 7 天 5 0.257±0.051 33組 第 1 天 5 1.676±0.028 99第 2 天 5 0.556±0.075&&97.1第 7 天 5 0.313±0.075Φ39.8I/R 組 第 1 天 5 0.749±0.132 54第 2 天 5 0.389±0.044&&45.4第 7 天 5 0.262±0.099Φ33.

圖 2 小鼠 I/R 后各組腎組織學的改變）HE 染色觀察小鼠 I/R 后各組腎組織學的改變（40×）；（B）H織損傷評分的統(tǒng)計結果（ x±s,n=5）。與 Sham 組相比，##P<0.01+I/R 組相比，**P<0.01 *P<0.05。表 3 組內各組腎組織損傷評分（分）的比較（ x±s,n=5）組別 時間（天） 鼠數（只） 損傷評am 組 第 1 天 5 0.700±0第 2 天 5 0.727±0第 7 天 5 0.909±0/R 組 第 1 天 5 11.600±1第 2 天 5 7.133±0.8第 7 天 5 3.500±0.8+I/R 組 第 1 天 5 6.846±1第 2 天 5 5.333±1.
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5

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本文編號：2686769