【摘要】：目的:通過研究非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)模型大鼠肝細胞線粒體自噬機制及“脂肝方”的干預(yù)效應(yīng),為“脂肝方”的療效提供理論依據(jù)。方法:將80只SD大鼠進行適應(yīng)性喂養(yǎng)1W后,采用隨機數(shù)字表法選出其中10只作為8W空白組與10只12W空白組,兩組均予普通飼料喂養(yǎng),分別于第8周末與第12周末處死。其余60只大鼠給予高脂飼料喂養(yǎng)至8W,在第8W末隨機選出10只進行處死,作為8W模型組;再將其余50只高脂飼料喂養(yǎng)的大鼠隨機分為12W模型組、西藥組、脂肝方高、中、低3種劑量組,每組10只;8W至12W期間,脂肝方組與西藥組在給予飼高脂飼料喂養(yǎng)的基礎(chǔ)上,脂肝方組分別給予脂肝方高、中、低劑量,西藥組給予立普妥。在12W末將上述5個組大鼠處死,并采集血液與肝臟標本,使用自動化檢測儀檢測大鼠血清AST、ALT、TC、TG的水平,光鏡下進行肝組織病理切片的觀察,透射電鏡下對線粒體及自噬體的超微結(jié)構(gòu)進行觀察,運用Western Blot技術(shù)檢測自噬相關(guān)蛋白PINK1、Parkin、Drp1及LC3-II的表達水平。結(jié)果:1、兩個模型組的血清TG、TC、AST、ALT顯著高于同期同期空白組(P0.01),且肝細胞的炎癥及脂質(zhì)沉積程度較同期空白組更為嚴重;12W模型組的肝組織病理學改變程度比8W模型組嚴重,出現(xiàn)大量肝組織炎癥反應(yīng);提示高脂喂養(yǎng)建立大鼠NASH成功,并且8W至12W為NAFLD向NASH的進展期。與12W模型組相比,經(jīng)藥物干預(yù)后的各組大鼠的血清AST、ALT、TC及TG水平與病理學方面均有不同程度的改善。提示脂肝方與西藥均能改善NASH大鼠肝臟病變,其中脂肝方高劑量組與其余治療組比較效果最為明顯(P均0.05)。2、透射電鏡觀察:與空白組相比,12W模型組肝細胞線粒體形態(tài)結(jié)構(gòu)發(fā)生變化增多、碎片化線粒體數(shù)量增多,自噬體數(shù)量減少,提示NASH肝細胞內(nèi)受損線粒體數(shù)量增加及線粒體自噬出現(xiàn)障礙;各治療組與12W模型組比較線粒體損傷程度減輕,碎片化線粒體減少,自噬體數(shù)量增加,提示藥物干預(yù)通過減少線粒體損傷與促進自噬作用增加肝細胞的存活幾率,其中脂肝方高劑量組的改善效果顯著。3、Western Blot檢測顯示:兩個模型組與同期正常組比較PINK1、Parkin、LC3-II蛋白表達均有所降低,而Drp1表達升高,提示NASH大鼠的肝細胞線粒體自噬受到抑制,線粒體的分裂活動增加;使用藥物治療后,各組大鼠PINK1、Parkin、LC3-II蛋白的表達與同期模型組比較均有不同程度的上升,Drp1表達減少,其中脂肝方高劑量組對各相關(guān)蛋白表達的改變較其余治療組更為明顯,提示使用中藥與西藥治療能夠減輕NASH大鼠細胞內(nèi)線粒體損傷,促進線粒體自噬,保護肝細胞功能,減少細胞的損傷或死亡。結(jié)論:一、NASH大鼠模型可通過長期高脂飼料喂養(yǎng)建立,且NASH模型大鼠存在脂質(zhì)代謝紊亂,血脂、肝臟酶學與病理性炎癥等方面改變;二、線粒體的受損與自噬作用受抑制可能是造成病情進展的關(guān)鍵因素,且實驗表明PINK1/Parkin途徑介導線粒體自噬參與了NASH的發(fā)生發(fā)展過程;三、脂肝方對NASH模型大鼠的脂質(zhì)代謝、肝指數(shù)及病理學等方面有改善作用;其防治NASH的機制可能是通過減少肝細胞內(nèi)線粒體損傷,保護線粒體形態(tài)與功能,同時提高線粒體自噬水平,保證肝細胞的存活,從而抑制了NASH的進展。
【圖文】：

各組肝組織病理圖

圖2 各模型組無明內(nèi)外可見嵴結(jié)可見肝細圓）粒體型組大小相比裹的細胞9各組大鼠肝細注：1:8w 正組；6：脂肝正常組：明顯改變,各外膜結(jié)構(gòu)完模型組：見大量脂質(zhì)結(jié)構(gòu)模糊或見少量被自細胞結(jié)構(gòu)紊的數(shù)量更西藥對照體出現(xiàn)空泡組相比較少中藥脂肝小不規(guī)則的比有所減少的內(nèi)容物，胞內(nèi)可見少細胞線粒體自正常組線粒體肝方高劑量組透射電鏡各細胞器完整。偶見8 W與12質(zhì)體彌漫性或缺失、膜自噬體包裹紊亂程度更更多。照組：電鏡泡化，形態(tài)少，可見少肝方各劑量的脂質(zhì)散在少，形態(tài)大較12W模少量脂質(zhì)沉自噬情況體；2:12W 正組；7：脂肝鏡下，無論排列分布見少量包裹W模型組性分布，膜結(jié)構(gòu)不裹的降解更為嚴重，，鏡下觀察態(tài)大小無少量自噬體量組：①在分布
【學位授予單位】：廣西中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5

【參考文獻】

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1 馮高飛;陳若;;疏肝健脾方對非酒精性脂肪性肝炎患者肝纖維化指標的影響[J];遼寧中醫(yī)雜志;2015年12期

2 韓然;于燕妮;楊丹;;高糖飲食致大鼠非酒精性脂肪肝模型的建立[J];胃腸病學和肝病學雜志;2015年11期

3 張秋玲;;針刺治療非酒精性脂肪肝的療效觀察與護理[J];中國社區(qū)醫(yī)師;2015年32期

4 劉濤;徐秋玲;趙巖;;非酒精性脂肪肝大鼠腸道黏膜屏障功能的實驗研究[J];醫(yī)學研究生學報;2015年11期

5 蘇劍鋒;江偉;楊靜;;活血降脂保肝湯對非酒精性脂肪肝大鼠肝組織Nrf2、PKB表達的影響[J];中成藥;2015年08期

6 樊新榮;唐農(nóng);紀云西;張耀中;蔣歷;黃貴華;謝勝;李柳梅;宋春暉;凌江紅;;中醫(yī)學“內(nèi)生濁邪”本質(zhì)探討[J];中國中西醫(yī)結(jié)合雜志;2015年08期

7 夏水淵;;針刺配合中藥治療非酒精性脂肪肝療效觀察[J];上海針灸雜志;2015年05期

8 任哲;任江南;伍玉甜;;金匱腎氣丸聯(lián)合歸脾丸治療非酒精性脂肪性肝病的臨床研究[J];齊齊哈爾醫(yī)學院學報;2015年14期

9 黃婷婷;周玉榮;張向君;劉沙沙;殷晶晶;王加林;;非酒精性脂肪肝治療進展[J];醫(yī)學綜述;2015年08期

10 陶森;龐樹朝;郭卉;;中醫(yī)分期論治非酒精性脂肪性肝病探微[J];上海中醫(yī)藥雜志;2015年02期

本文編號：2686827