【摘要】：目的:通過研究非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)模型大鼠肝細(xì)胞線粒體自噬機(jī)制及“脂肝方”的干預(yù)效應(yīng),為“脂肝方”的療效提供理論依據(jù)。方法:將80只SD大鼠進(jìn)行適應(yīng)性喂養(yǎng)1W后,采用隨機(jī)數(shù)字表法選出其中10只作為8W空白組與10只12W空白組,兩組均予普通飼料喂養(yǎng),分別于第8周末與第12周末處死。其余60只大鼠給予高脂飼料喂養(yǎng)至8W,在第8W末隨機(jī)選出10只進(jìn)行處死,作為8W模型組;再將其余50只高脂飼料喂養(yǎng)的大鼠隨機(jī)分為12W模型組、西藥組、脂肝方高、中、低3種劑量組,每組10只;8W至12W期間,脂肝方組與西藥組在給予飼高脂飼料喂養(yǎng)的基礎(chǔ)上,脂肝方組分別給予脂肝方高、中、低劑量,西藥組給予立普妥。在12W末將上述5個(gè)組大鼠處死,并采集血液與肝臟標(biāo)本,使用自動(dòng)化檢測(cè)儀檢測(cè)大鼠血清AST、ALT、TC、TG的水平,光鏡下進(jìn)行肝組織病理切片的觀察,透射電鏡下對(duì)線粒體及自噬體的超微結(jié)構(gòu)進(jìn)行觀察,運(yùn)用Western Blot技術(shù)檢測(cè)自噬相關(guān)蛋白PINK1、Parkin、Drp1及LC3-II的表達(dá)水平。結(jié)果:1、兩個(gè)模型組的血清TG、TC、AST、ALT顯著高于同期同期空白組(P0.01),且肝細(xì)胞的炎癥及脂質(zhì)沉積程度較同期空白組更為嚴(yán)重;12W模型組的肝組織病理學(xué)改變程度比8W模型組嚴(yán)重,出現(xiàn)大量肝組織炎癥反應(yīng);提示高脂喂養(yǎng)建立大鼠NASH成功,并且8W至12W為NAFLD向NASH的進(jìn)展期。與12W模型組相比,經(jīng)藥物干預(yù)后的各組大鼠的血清AST、ALT、TC及TG水平與病理學(xué)方面均有不同程度的改善。提示脂肝方與西藥均能改善NASH大鼠肝臟病變,其中脂肝方高劑量組與其余治療組比較效果最為明顯(P均0.05)。2、透射電鏡觀察:與空白組相比,12W模型組肝細(xì)胞線粒體形態(tài)結(jié)構(gòu)發(fā)生變化增多、碎片化線粒體數(shù)量增多,自噬體數(shù)量減少,提示NASH肝細(xì)胞內(nèi)受損線粒體數(shù)量增加及線粒體自噬出現(xiàn)障礙;各治療組與12W模型組比較線粒體損傷程度減輕,碎片化線粒體減少,自噬體數(shù)量增加,提示藥物干預(yù)通過減少線粒體損傷與促進(jìn)自噬作用增加肝細(xì)胞的存活幾率,其中脂肝方高劑量組的改善效果顯著。3、Western Blot檢測(cè)顯示:兩個(gè)模型組與同期正常組比較PINK1、Parkin、LC3-II蛋白表達(dá)均有所降低,而Drp1表達(dá)升高,提示NASH大鼠的肝細(xì)胞線粒體自噬受到抑制,線粒體的分裂活動(dòng)增加;使用藥物治療后,各組大鼠PINK1、Parkin、LC3-II蛋白的表達(dá)與同期模型組比較均有不同程度的上升,Drp1表達(dá)減少,其中脂肝方高劑量組對(duì)各相關(guān)蛋白表達(dá)的改變較其余治療組更為明顯,提示使用中藥與西藥治療能夠減輕NASH大鼠細(xì)胞內(nèi)線粒體損傷,促進(jìn)線粒體自噬,保護(hù)肝細(xì)胞功能,減少細(xì)胞的損傷或死亡。結(jié)論:一、NASH大鼠模型可通過長期高脂飼料喂養(yǎng)建立,且NASH模型大鼠存在脂質(zhì)代謝紊亂,血脂、肝臟酶學(xué)與病理性炎癥等方面改變;二、線粒體的受損與自噬作用受抑制可能是造成病情進(jìn)展的關(guān)鍵因素,且實(shí)驗(yàn)表明PINK1/Parkin途徑介導(dǎo)線粒體自噬參與了NASH的發(fā)生發(fā)展過程;三、脂肝方對(duì)NASH模型大鼠的脂質(zhì)代謝、肝指數(shù)及病理學(xué)等方面有改善作用;其防治NASH的機(jī)制可能是通過減少肝細(xì)胞內(nèi)線粒體損傷,保護(hù)線粒體形態(tài)與功能,同時(shí)提高線粒體自噬水平,保證肝細(xì)胞的存活,從而抑制了NASH的進(jìn)展。
【圖文】：

各組肝組織病理圖

圖2 各模型組無明內(nèi)外可見嵴結(jié)可見肝細(xì)圓）粒體型組大小相比裹的細(xì)胞9各組大鼠肝細(xì)注：1:8w 正組；6：脂肝正常組：明顯改變,各外膜結(jié)構(gòu)完模型組：見大量脂質(zhì)結(jié)構(gòu)模糊或見少量被自細(xì)胞結(jié)構(gòu)紊的數(shù)量更西藥對(duì)照體出現(xiàn)空泡組相比較少中藥脂肝小不規(guī)則的比有所減少的內(nèi)容物，胞內(nèi)可見少細(xì)胞線粒體自正常組線粒體肝方高劑量組透射電鏡各細(xì)胞器完整。偶見8 W與12質(zhì)體彌漫性或缺失、膜自噬體包裹紊亂程度更更多。照組：電鏡泡化，形態(tài)少，可見少肝方各劑量的脂質(zhì)散在少，形態(tài)大較12W模少量脂質(zhì)沉自噬情況體；2:12W 正組；7：脂肝鏡下，無論排列分布見少量包裹W模型組性分布，膜結(jié)構(gòu)不裹的降解更為嚴(yán)重，，鏡下觀察態(tài)大小無少量自噬體量組：①在分布
【學(xué)位授予單位】：廣西中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2686827