【摘要】：目的探討精氨酸甘草甜素鹽(glycyrrhizin arginine salt GLY-ARG)對大鼠膽汁淤積型肝纖維化的影響。方法1體內(nèi)實驗:將50只雄性SD(Sprague-Dawley)大鼠隨機分為對照組、模型組、精氨酸組、精氨酸甘草甜素鹽大劑量組和小劑量組。模型組、精氨酸組、精氨酸甘草甜素鹽大、小劑量組給予肝總管結(jié)扎手術(shù),精氨酸甘草甜素鹽大、小劑量組在膽總管結(jié)扎第二天分別給精氨酸甘草甜素(0.15g/kg/d、0.075g/kg/d)灌胃,精氨酸組給予精氨酸(0.15g/kg/d)灌胃,對照組、模型組給予同等劑量的生理鹽水灌胃,觀察大鼠的一般狀況,并每天測量體重1次,持續(xù)14天后,處死動物留取樣本,稱取肝重量,檢測血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、8-異前列腺素、丙二醛(MDA)以及肝組織羥脯氨酸含量,HE染色觀察肝臟病理變化,Masson染色觀察肝纖維化程度,免疫組化染色觀察肝組織轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)的表達(dá)水平,免疫熒光染色檢測肝組織α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)表達(dá)水平,Western blot方法檢測肝組織基質(zhì)金屬蛋白酶2和9(MMP2和MMP9)、核因子-k(p-NF-k B,NF-k B)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、TGF-β1和α-SMA蛋白表達(dá)水平,探討精氨酸甘草甜素鹽對膽汁淤積型大鼠肝纖維化的影響。2體外實驗:利用培養(yǎng)的Hep G2、LX-2細(xì)胞系、大鼠肝原代細(xì)胞和肝星狀細(xì)胞。首先將Hep G2細(xì)胞、LX-2細(xì)胞、原代培養(yǎng)肝細(xì)胞和原代肝星狀細(xì)胞分為對照組、模型組、精氨酸組和精氨酸甘草甜素鹽組,MTT法檢測精氨酸甘草甜素鹽對膽汁刺激后Hep G2細(xì)胞和肝原代細(xì)胞增殖的影響、Western blot檢測精氨酸甘草甜素鹽對TGF-β1刺激后LX-2細(xì)胞和大鼠肝星狀細(xì)胞(HSC)中TGF-β1、α-SMA、MMP-2和MMP-9蛋白表達(dá)。結(jié)果與模型相比,精氨酸甘草甜素鹽組大鼠生長較快,肝重量和體重的比率明顯降低。HE和馬松染色顯示,精氨酸甘草酸組大鼠肝纖維化明顯減輕,肝臟羥脯氨酸含量、膽汁鹽池減小、血清總膽紅素、ALT、AST、8-異前列腺素和MDA含量明顯降低,HE和馬松染色顯示精氨酸甘草酸組大鼠肝纖維化程度明顯減輕,免疫組化和免疫熒光檢測顯示:精氨酸甘草甜素能顯著降低膽汁淤積型纖維化大鼠肝組織TGF-β1、α-SMA表達(dá)水平,Western blot結(jié)果顯示精氨酸甘草甜素鹽組大鼠肝組織MMP-2、MMP-9)、p-NF-KB、NF-KB、TNF-α、TGF-β1和α-SMA蛋白表達(dá)下調(diào)。體外實驗結(jié)果顯示:精氨酸甘草甜素鹽可明顯改善膽汁對Hep G2細(xì)胞和原代肝細(xì)胞的損傷,并呈明顯的劑量依賴性。Western blot結(jié)果顯示:精氨酸甘草甜素鹽組可下調(diào)TGF-β1誘導(dǎo)LX-2細(xì)胞和大鼠原代肝星狀細(xì)胞纖維化相關(guān)蛋白TGF-β1、α-SMA、MMP-2和MMP-9蛋白的表達(dá)。結(jié)論精氨酸甘草甜素鹽可明顯減輕大鼠膽汁淤積型肝纖維化程度,其機制可能與其抑制肝星狀細(xì)胞激活、減輕氧化應(yīng)激反應(yīng)和炎癥反應(yīng),促進(jìn)膠原纖維降解,進(jìn)而抑制肝纖維化的進(jìn)展有關(guān)。
【圖文】：

G: glycyrrhizin arginine salt; *p< 0.05 vs. Cormal group; # p < 0.05vs. 甘草甜素鹽對各組大鼠生長曲線的影響示，，實驗大鼠體重均呈增長狀態(tài)，模型組生長最慢。與模生長曲線較穩(wěn)定，體重變化不大；大劑量精氨酸甘草甜素酸甘草甜素鹽小劑量組生長曲線較穩(wěn)定。(見圖 1)

組；7-②-模型組；7-③- Arginine 組；7-④-75mg/kg mg·kg-1 GLY-ARG 組；-ARG 組圖 7 Western blot 法檢測各組大鼠肝組織中纖維化相關(guān)蛋白的表達(dá)e expression of fibrosis related proteins in liver tissues of rats in each group Western blot
【學(xué)位授予單位】：華北理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2686746