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紅花中羥基紅花黃色素A的提取及對(duì)肝癌細(xì)胞的抑制作用

發(fā)布時(shí)間：2020-05-29 08:08

【摘要】：目的羥基紅花黃色素A(hydroxysafflor yellow A,HSYA)是天然藥物紅花(Carthamus tinctorius L)藥理功效中最有效的水溶性化合物。在臨床研究及治療上具有廣泛的應(yīng)用。對(duì)HSYA的提取研究已經(jīng)很成熟,在前人的研究基礎(chǔ)上,本文采用閃式提取技術(shù)提取HSYA,并通過(guò)單因素試驗(yàn)方法確定各提取因素的適宜范圍,再利用正交試驗(yàn)最終確定閃式提取技術(shù)提取HSYA的最佳工藝條件,為后續(xù)實(shí)驗(yàn)提供基礎(chǔ)。HSYA對(duì)多種腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)都有一定的抑制效果,通過(guò)HSYA對(duì)人肝癌SMMC-7721和HepG2細(xì)胞的作用,研究HSYA對(duì)肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)、侵襲、遷移、細(xì)胞周期與凋亡情況,以及其對(duì)蛋白表達(dá)的影響。方法采用閃式提取技術(shù)提取紅花中的HSYA,用高效液相色譜法(HPLC)測(cè)定HSYA的含量;并以HSYA的提取含量為指標(biāo),通過(guò)單因素試驗(yàn)分別考察HSYA提取時(shí)最佳料液比、提取的時(shí)間和提取時(shí)電壓的適宜范圍,再利用正交試驗(yàn)確定HSYA閃式提取法的最佳提取工藝。分別用0 mg/mL(空白對(duì)照組)、0.5 mg/mL(低劑量組)、1 mg/mL(中劑量組)、1.5 mg/mL(高劑量組)的HSYA作用于人肝癌SMMC-7721和HepG2細(xì)胞,采用MTT法檢測(cè)HSYA對(duì)肝癌細(xì)胞增殖作用的影響;采用Transwell法檢測(cè)HSYA對(duì)肝癌細(xì)胞的遷移能力及侵襲能力的影響;采用流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定HSYA對(duì)肝癌細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡情況的影響;采用免疫印跡法(western blot)分析肝癌細(xì)胞中VEGF、PI3K、AKT及Snail蛋白經(jīng)HSYA干預(yù)后的表達(dá)結(jié)果。結(jié)果(1)閃式提取法提取HSYA的最佳工藝為料液比1:40 g/mL,提取時(shí)間3 min,提取時(shí)電壓80 V。(2)MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,與空白劑量組比較HSYA可以抑制人肝癌SMMC-7721和HepG2細(xì)胞的增殖,且呈劑量-時(shí)間依賴性(P0.05);(3)Transwell法實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,隨著HSYA濃度的增加,細(xì)胞的侵襲和遷移能力逐漸降低,HSYA可抑制人肝癌SMMC-7721和HepG2細(xì)胞的侵襲和遷移(P0.05);(4)流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定結(jié)果顯示,隨著HSYA濃度的增加,細(xì)胞凋亡率逐漸增加,細(xì)胞G_0/G_1期比例顯著增加(P0.05),S期細(xì)胞比例顯著降低(P0.05),HSYA可以促進(jìn)肝癌細(xì)胞的凋亡;(5)Western blot分析顯示,HSYA還可以使VEGF、PI3K、AKT及Snail蛋白表達(dá)下降(P0.05)。結(jié)論閃式提取HSYA工藝簡(jiǎn)單,提取率高,可以用于紅花中HSYA的提取。同時(shí)HSYA能抑制人肝癌SMMC-7721和HepG2細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲,阻滯細(xì)胞周期,使其停留在G_0/G_1期,誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡,其機(jī)制可能與抑制PI3K/AKT/Snail信號(hào)通路的激活有關(guān),為HSYA治療肝癌的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。
【圖文】：

紅花,喜溫,暖干,氣候