發(fā)布時間：2020-05-29 00:02

【摘要】：雷公藤是一種對類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、腎病綜合征等難治性疾病具有確切療效的傳統(tǒng)中藥,大量研究顯示雷公藤及其主要成分如二萜、三萜等成分具有廣泛的藥理活性,尤其在抗炎和免疫抑制作用方面。目前臨床上雷公藤及其提取物制劑廣泛用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、腎病綜合征、系統(tǒng)性紅斑狼瘡等自身免疫性疾病,療效確切,但由于雷公藤具有較大毒性使得很多患者無法堅持長期服用,順應(yīng)性差。目前市售雷公藤制劑多為雷公藤經(jīng)簡單提取純化后制成的普通制劑,其化學(xué)成分復(fù)雜,藥效及毒性物質(zhì)基礎(chǔ)亦不明確,質(zhì)控指標(biāo)選擇和質(zhì)量控制評價方法差別較大,致使不同廠家生產(chǎn)的雷公藤制劑在療效和毒副作用方面存在較大差異,另外其毒副作用耐受問題并未有效解決,使其臨床應(yīng)用受限。因此,在明確雷公藤藥效和主要毒性成分的基礎(chǔ)上,通過改進(jìn)提取純化工藝,制備低毒高效的雷公藤制劑,建立穩(wěn)定可靠的質(zhì)量控制方法,是促進(jìn)雷公藤制劑研發(fā)和保證安全用藥的可行思路。本課題組前期以此為思路進(jìn)行探索和研究,在建立雷公藤指紋圖譜的基礎(chǔ)上,以譜效分析為指導(dǎo),明確了雷公藤的主要藥效成分和毒性成分,并利用硅膠色譜法制備了多個不同藥效和毒性成分比例的純化部位。本研究在此基礎(chǔ)上,通過體內(nèi)外藥效和毒性實驗研究,評價課題組前期制得的雷公藤不同純化部位的藥效和毒性差異,優(yōu)選低毒高效部位,并評價其抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎活性和安全性,為后續(xù)雷公藤低毒高效制劑研發(fā)和建立質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)奠定基礎(chǔ)。本課題體外實驗研究對象為課題組前期純化方案所得的18個純化部位:石油醚-乙酸乙酯洗脫方案(方案A)得部位A1～A8,二氯甲烷-甲醇洗脫方案(方案B)得部位B1～B10。以市售雷公藤多苷片(江蘇美通)為參照。以脂多糖(LPS)誘導(dǎo)小鼠脾淋巴細(xì)胞炎癥模型,以TNF-α和IL-6為評價指標(biāo)考察各純化部位的體外抗炎活性;以刀豆蛋白A(ConA)誘導(dǎo)小鼠脾淋巴細(xì)胞免疫抑制模型,以IFN-y和IL-2為指標(biāo)考察各純化部位體外免疫抑制活性;以正常心肌細(xì)胞H9c2、肝細(xì)胞L-02、腎小球系膜細(xì)胞GNM-SV40考察各純化部位的體外毒性作用。結(jié)果顯示B3、B7和B10藥效較強(qiáng)且毒性小,較符合低毒高效的要求,故選擇其進(jìn)行后續(xù)體內(nèi)藥效和毒性研究。體內(nèi)實驗以B3、B7和B10為研究對象,以市售雷公藤多苷片為參照。以角叉菜膠致大鼠足趾腫脹和二甲苯致小鼠耳腫脹為炎癥模型考察B3、B7和B10體內(nèi)抗炎活性;以小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)為免疫抑制模型考察體內(nèi)免疫抑制活性;以佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠為試驗?zāi)Ｐ涂疾炜诡愶L(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎活性作用;以小鼠急性毒性和大鼠長期毒性為試驗?zāi)Ｐ涂疾彀踩珓┝糠秶腕w內(nèi)毒性作用。體內(nèi)藥效實驗結(jié)果顯示B3、B7和B10均具有較強(qiáng)的藥效活性,且B10活性作用最強(qiáng);毒性試驗結(jié)果顯示B10的毒性作用最小,優(yōu)勢最明顯。故最終確定B10為最優(yōu)低毒高效部位。本研究最終確定純化部位B10為雷公藤低毒高效部位,并確定了低毒高效部位的提取純化工藝,為后續(xù)雷公藤低毒高效制劑的研發(fā)和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立奠定了基礎(chǔ),同時對促進(jìn)雷公藤制劑的安全用藥具有重要意義。
【圖文】：

圖５八個產(chǎn)地雷公藤藥材ＨＰＬＣ指紋圖譜逡逑Ｓ１：福建；Ｓ２：湖南；Ｓ３：云南；Ｓ４：安徽；Ｓ５：廣東；Ｓ６：廣西；Ｓ７：湖北；逡逑Ｓ８：江蘇逡逑Ｆｉｇ．５邋Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｈｉｃ邋ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｓ邋ｏｆ邋８邋ｂａｔｃｈｅｓ邋ｏｆ邋Ｔｒｉｐｔｅｒｙｇｉｕｍ邋ｗｉｌｆｏｒｄｉｉ邋Ｈｏｏｋ．ｆ．逡逑（ＳＩ：邋Ｆｕｊｉａｎ；邋Ｓ２：邋Ｈｕｎａｎ；邋Ｓ３：邋Ｙｕｎｎａｎ；邋Ｓ４：邋Ａｎｈｕｉ；邋Ｓ５：邋Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ；邋Ｓ６：邋Ｇｕａｎｇｘｉ；逡逑７：Ｈｕｅｉ；Ｓ８：邋Ｊｉａｎｓｕ）逡逑

圖６雷公藤對照指紋圖譜逡逑（３：雷公藤甲素；６：雷公藤內(nèi)酯酮；１４：雷酚內(nèi)酯；１８：雷公藤次堿；２９：逡逑雷公藤紅素；３１：雷公藤內(nèi)酯甲；３５：扁塑藤素）逡逑Ｆｉｇ．６邋Ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｓ邋ｏｆ邋Ｔｒｉｐｉｅｒｙ＾ｉｕｍ邋ｗｉｌｆｏｒｄｉｉ邋Ｈｏｏｋ．ｆ．邋ｓｕｂｓｔａｎｃｅ逡逑（３：邋Ｔｒｉｐｔｏｌｉｄｅ；邋６：邋Ｔｒｉｐｔｏｎｉｄｅ；邋１４：邋Ｔｒｉｐｔｏｐｈｅｎｏｌｉｄｅ；邋１８：邋Ｗｉｌｆｏｒｉｎｅ；邋２９：邋Ｃｅｌａｓｔｒｏｌ；逡逑ｒ
【學(xué)位授予單位】：廈門大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2686044