【摘要】：實(shí)驗(yàn)背景與目的三陰性乳腺癌的雌激素受體,孕激素受體與人表皮生長(zhǎng)因子受體2表達(dá)陰性,缺乏治療靶點(diǎn),惡性程度高,目前臨床上缺乏有效的用藥與治療指南,治療預(yù)后較差而死亡率高。甘草酸臨床應(yīng)用廣泛,其在人體內(nèi)被代謝脫去兩分子葡萄糖成為甘草次酸。有研究表明甘草酸與甘草次酸均能抑制腫瘤生長(zhǎng),也有報(bào)道在抗腫瘤與抗氧化方面其藥理作用相反;但兩者對(duì)三陰性乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞作用的差異以及相關(guān)藥理學(xué)機(jī)制卻未見(jiàn)有報(bào)道。因此,本課題考察了甘草酸和甘草次酸對(duì)三陰性乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231細(xì)胞體外生長(zhǎng)的影響并初步探索相關(guān)的作用機(jī)制。實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果MTT實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)甘草酸與甘草次酸對(duì)三陰性乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞體外增殖作用不同。甘草次酸能夠抑制MDA-MB-231細(xì)胞的體外增殖;在非細(xì)胞毒濃度范圍內(nèi)(20μM以下),甘草次酸聯(lián)用抗腫瘤藥物依托泊苷可表現(xiàn)出協(xié)同作用。通過(guò)RT-PCR與Western blot實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),甘草次酸能夠調(diào)節(jié)拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱα蛋白(TOPO 2A)的表達(dá),該蛋白同時(shí)也是依托泊苷的作用靶點(diǎn)。非細(xì)胞毒濃度的甘草次酸對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞TOPO 2A的調(diào)節(jié)作用為濃度與時(shí)間依賴(lài)性。20μM甘草次酸刺激12小時(shí)后細(xì)胞TOPO 2A蛋白的表達(dá),與對(duì)照組相比上調(diào)2.4倍,增加了依托泊苷的作用靶點(diǎn),使藥物殺傷作用增強(qiáng)。有趣的是,刺激延長(zhǎng)至48小時(shí)時(shí),甘草次酸反而抑制TOPO 2A蛋白,其表達(dá)水平為對(duì)照組的0.5倍。同時(shí),20μM甘草次酸能夠損耗細(xì)胞內(nèi)谷胱甘肽,降低細(xì)胞抵抗氧化應(yīng)激的能力,誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,進(jìn)一步增強(qiáng)了甘草次酸對(duì)依托泊苷的協(xié)同作用。另一方面,甘草酸在0-80μM范圍內(nèi)不能影響MDA-MB-231細(xì)胞的體外生長(zhǎng)也不能增強(qiáng)依托泊苷對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用。與甘草次酸相反,20μM濃度以下的甘草酸不影響TOPO 2A的表達(dá)以及細(xì)胞凋亡狀態(tài),同時(shí)能降低細(xì)胞內(nèi)的活性氧,提高細(xì)胞的抗氧化能力。在細(xì)胞通路水平考察發(fā)現(xiàn),甘草酸與甘草次酸發(fā)揮藥理學(xué)作用可能與其參與調(diào)節(jié)MAPK與AKT通路相關(guān)。實(shí)驗(yàn)結(jié)論甘草次酸而不是甘草酸,能夠抑制三陰性乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞體外增殖作用,且能夠配伍聯(lián)用依托泊苷發(fā)揮協(xié)同作用。甘草酸與其代謝產(chǎn)物甘草次酸對(duì)腫瘤作用差異性及甘草次酸和依托泊苷的協(xié)同作用可能與調(diào)控拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱα的蛋白表達(dá),細(xì)胞凋亡以及氧化應(yīng)激有關(guān)。
【圖文】：

０．０５；邋ｎ＝３逡逑本實(shí)驗(yàn)中，如圖１邋（Ａ）所示，，甘草酸濃度在０－８０ｐＭ刺激細(xì)胞２４與４８小逡逑時(shí)對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)基本不造成影響（Ｐ＞0．邋０５）。如圖１邋（Ｂ）所示，甘草次酸能時(shí)逡逑１０逡逑

圖２－１邋（Ａ）邋２０［ｊ邋Ｍ甘草酸與０．邋６２５－７．邋５＾Ｍ的依托泊苷聯(lián)用對(duì)ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細(xì)胞體外生長(zhǎng)的逡逑影響；圖２－１邋（Ｂ）邋２０｜＾Ｍ甘草次酸與０．邋６２５－７．邋５＾Ｍ的依托泊苷聯(lián)用對(duì)ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細(xì)胞體逡逑外生長(zhǎng)的影響；ｎ多３逡逑
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R285

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2685597