【摘要】：實驗背景與目的三陰性乳腺癌的雌激素受體,孕激素受體與人表皮生長因子受體2表達陰性,缺乏治療靶點,惡性程度高,目前臨床上缺乏有效的用藥與治療指南,治療預后較差而死亡率高。甘草酸臨床應用廣泛,其在人體內被代謝脫去兩分子葡萄糖成為甘草次酸。有研究表明甘草酸與甘草次酸均能抑制腫瘤生長,也有報道在抗腫瘤與抗氧化方面其藥理作用相反;但兩者對三陰性乳腺癌MDA-MB-231細胞作用的差異以及相關藥理學機制卻未見有報道。因此,本課題考察了甘草酸和甘草次酸對三陰性乳腺癌細胞MDA-MB-231細胞體外生長的影響并初步探索相關的作用機制。實驗方法與結果MTT實驗發(fā)現(xiàn)甘草酸與甘草次酸對三陰性乳腺癌MDA-MB-231細胞體外增殖作用不同。甘草次酸能夠抑制MDA-MB-231細胞的體外增殖;在非細胞毒濃度范圍內(20μM以下),甘草次酸聯(lián)用抗腫瘤藥物依托泊苷可表現(xiàn)出協(xié)同作用。通過RT-PCR與Western blot實驗發(fā)現(xiàn),甘草次酸能夠調節(jié)拓撲異構酶Ⅱα蛋白(TOPO 2A)的表達,該蛋白同時也是依托泊苷的作用靶點。非細胞毒濃度的甘草次酸對MDA-MB-231細胞TOPO 2A的調節(jié)作用為濃度與時間依賴性。20μM甘草次酸刺激12小時后細胞TOPO 2A蛋白的表達,與對照組相比上調2.4倍,增加了依托泊苷的作用靶點,使藥物殺傷作用增強。有趣的是,刺激延長至48小時時,甘草次酸反而抑制TOPO 2A蛋白,其表達水平為對照組的0.5倍。同時,20μM甘草次酸能夠損耗細胞內谷胱甘肽,降低細胞抵抗氧化應激的能力,誘導細胞凋亡,進一步增強了甘草次酸對依托泊苷的協(xié)同作用。另一方面,甘草酸在0-80μM范圍內不能影響MDA-MB-231細胞的體外生長也不能增強依托泊苷對腫瘤細胞的殺傷作用。與甘草次酸相反,20μM濃度以下的甘草酸不影響TOPO 2A的表達以及細胞凋亡狀態(tài),同時能降低細胞內的活性氧,提高細胞的抗氧化能力。在細胞通路水平考察發(fā)現(xiàn),甘草酸與甘草次酸發(fā)揮藥理學作用可能與其參與調節(jié)MAPK與AKT通路相關。實驗結論甘草次酸而不是甘草酸,能夠抑制三陰性乳腺癌MDA-MB-231細胞體外增殖作用,且能夠配伍聯(lián)用依托泊苷發(fā)揮協(xié)同作用。甘草酸與其代謝產物甘草次酸對腫瘤作用差異性及甘草次酸和依托泊苷的協(xié)同作用可能與調控拓撲異構酶Ⅱα的蛋白表達,細胞凋亡以及氧化應激有關。
【圖文】：

０．０５；邋ｎ＝３逡逑本實驗中，如圖１邋（Ａ）所示，，甘草酸濃度在０－８０ｐＭ刺激細胞２４與４８小逡逑時對細胞生長基本不造成影響（Ｐ＞0．邋０５）。如圖１邋（Ｂ）所示，甘草次酸能時逡逑１０逡逑

圖２－１邋（Ａ）邋２０［ｊ邋Ｍ甘草酸與０．邋６２５－７．邋５＾Ｍ的依托泊苷聯(lián)用對ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞體外生長的逡逑影響；圖２－１邋（Ｂ）邋２０｜＾Ｍ甘草次酸與０．邋６２５－７．邋５＾Ｍ的依托泊苷聯(lián)用對ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞體逡逑外生長的影響；ｎ多３逡逑
【學位授予單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R285

【參考文獻】

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本文編號：2685597