【摘要】：目的:柚皮素可改善脂蛋白譜,防止心血管疾病。ATF6是一種內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激傳感器,與膽固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白(SREBPs)具有相同的激活過程。臨床數(shù)據(jù)顯示ATF6水平與血漿膽固醇水平相關(guān)。本研究主要分析柚皮素是否參與調(diào)節(jié)膽固醇流出并測試柚皮素相關(guān)作用與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激ATF6的聯(lián)系。方法:1、對小鼠巨噬細(xì)胞(RAW264.7)和單核細(xì)胞(THP-1)進(jìn)行體外培養(yǎng),以80μg/ml的oxLDL或熒光標(biāo)記膽固醇誘導(dǎo),并以不同濃度(10,25,50 μM)的柚皮素處理RAW264.7和THP-1細(xì)胞,用熒光定量酶標(biāo)儀檢測膽固醇流出情況,熒光定量逆轉(zhuǎn)錄PCR(qRT-PCR)和Western blot檢測相關(guān)蛋白質(zhì)的表達(dá)情況;柚皮素作用于經(jīng)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)劑衣霉素(TM),抑制劑4-苯基丁酸(PBA)或ATF6特異性siRNA處理的RAW264.7和THP-1細(xì)胞,Western blot檢測相關(guān)蛋白質(zhì)的表達(dá)情況;柚皮素作用于經(jīng)PI3K抑制劑LY294002處理的RAW264.7細(xì)胞,Western blot檢測相關(guān)蛋白質(zhì)的表達(dá)情況。2、將8周齡的ApoE-A小鼠隨機(jī)分為四組,并進(jìn)行如下處理:正常飲食組(ND)、高脂模型組(HFD)、柚皮素組(HFD+柚皮素 100mg/kg/day)、TM 組(HFD+柚皮素 100mg/kg/day+TM,5 mg/kg/day)。柚皮素通過灌胃給藥,TM進(jìn)行腹腔注射,處理結(jié)束后分別用熒光定量逆轉(zhuǎn)錄PCR(qRT-PCR)和Western blot分別檢測相關(guān)蛋白質(zhì)的mRNA和蛋白含量。并對小鼠心臟進(jìn)行病理分析。結(jié)果:1、結(jié)果顯示柚皮素增強(qiáng)apoA-I和rHDL通道介導(dǎo)的膽固醇流出并且使RAW264.7巨噬細(xì)胞中ABCA1、ABCG1和LXRα基因表達(dá)上調(diào)。柚皮素抑制游離ATF6向核內(nèi)轉(zhuǎn)移并抑制靶基因GRP78和XBP-1的表達(dá);最終表明柚皮素促進(jìn)膽固醇流出的功能是通過抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激ATF6途徑介導(dǎo)的。柚皮素可促進(jìn)Akt磷酸化,PI3K抑制劑LY294002處理增加了核內(nèi)ATF6表達(dá)并減少由柚皮素增強(qiáng)的膽固醇流出和ABCA1表達(dá)。2、結(jié)果顯示經(jīng)柚皮素處理的HFD-ApoE-/-小鼠的原代腹腔巨噬細(xì)胞膽固醇流出能力比僅HFD的小鼠增加了 1.5倍以上。TM處理又顯著降低了這種膽固醇流出能力的增加。柚皮素可降低主動脈和腹腔巨噬細(xì)胞的核內(nèi)ATF6、GRP78和XBP-1表達(dá)水平,并減少主動脈根部的動脈粥樣硬化病變,這一作用可被TM逆轉(zhuǎn)。這些證實(shí)了內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激ATF6與柚皮素促進(jìn)膽固醇流出的作用密切聯(lián)系。結(jié)論:柚皮素可以調(diào)節(jié)膽固醇流出,并且調(diào)節(jié)是由內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激ATF6分支和PI3K/Akt通路介導(dǎo)的。
【圖文】：

胞中的表達(dá)。結(jié)果表明，三種基因的表達(dá)均在ＴＭ的作用下升高，但在ＴＭ與柚逡逑皮素共同處理時(shí)，表達(dá)逆轉(zhuǎn)降低，這證明柚皮素可以調(diào)節(jié)ＲＡＷ２６４．７細(xì)胞的內(nèi)質(zhì)逡逑網(wǎng)應(yīng)激ＡＴＦ６通路（圖２邋—３Ａ，Ｂ）。其次，本文研宄了柚皮素在ＰＢＡ或ＴＭ存在逡逑的情況下對膽固醇流出及其相關(guān)基因表達(dá)的影響。結(jié)果顯示，在ＰＢＡ與柚皮素逡逑共同處理的細(xì)胞中參與膽固醇流出的ＡＢＣＡ１、ＡＢＣＧ１和ＬＸＲａ基因的表達(dá)顯著逡逑上調(diào)了，，而與僅柚皮素處理的ＲＡＷ２６４．７細(xì)胞相比，柚皮素與ＴＭ共同處理的細(xì)逡逑胞中上述基因的表達(dá)明顯降低（圖２邋—３Ｃ）。與Ｗｅｓｔｅｒｎ邋ｂｌｏｔ結(jié)果一致，ＴＭ處逡逑理的ＲＡＷ２６４．７巨噬細(xì)胞屮膽固醇流出減少了邋８１邋％，而柚皮素糾正了這種減少，逡逑其流出率提高了邋６．８倍，結(jié)果與對照組細(xì)胞相當(dāng)（圖２邋—邋３Ｄ）。在平行實(shí)驗(yàn)中，逡逑測試了柚皮素對人類ＴＨＰ－１細(xì)胞形成的巨噬細(xì)胞的影響。如預(yù)期所示，ＡＢＣＡ１、逡逑ＡＢＣＧ１和ＬＸＲａ的表達(dá)可由ＰＢＡ誘導(dǎo)上調(diào)，而被ＴＭ抑制下調(diào)（圖２邋—３Ｅ）。此逡逑夕卜

圖２邋—邋３１）
【學(xué)位授予單位】：貴州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R285

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2685560