【摘要】：目的:觀察巴戟天治療大鼠KOA關(guān)節(jié)對Ⅱ型膠原蛋白的影響,并對實(shí)驗(yàn)大鼠血清中IL-1、TNF-α、MMP3、MMP13進(jìn)行檢測,通過免疫組化法檢測關(guān)節(jié)滑膜及軟骨中Ⅱ型膠原的表達(dá),最后對實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析。方法:30只雄性實(shí)驗(yàn)大鼠,適應(yīng)性喂養(yǎng)7天,隨機(jī)數(shù)字表法分5組,分別為空白對照組(K組)、模型試驗(yàn)對照組(S組)、巴戟天低濃度組(BL)、巴戟天中濃度組(BM)、巴戟天高濃度組(BH),每組6只。除K組外,全部按照碘乙酸藥物誘導(dǎo)法進(jìn)行造模。大鼠使用水合利醛進(jìn)行腹腔麻醉后仰臥位固定,使用備皮刀脫去膝關(guān)節(jié)周圍毛發(fā),完整暴露大鼠膝關(guān)節(jié),碘伏消毒3次后,輕度彎曲大鼠膝關(guān)節(jié)在其右膝關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射0.1 mL碘乙酸溶液(1 mg/mL),注射完成后輕柔彎曲膝關(guān)節(jié)數(shù)次,使碘乙酸溶液充分浸潤關(guān)節(jié)腔。對側(cè)作為空白對照。后期以確定造模成功。造模后常規(guī)喂養(yǎng)2周,等待炎癥反應(yīng)形成。在造模后每天用游標(biāo)卡尺記錄造模膝關(guān)節(jié)周徑,與K組對比,發(fā)現(xiàn)在造模1-2天后造模的4組大鼠膝關(guān)節(jié)周徑明顯增大,且大鼠活動減少。在造模2周后,從造模各組隨機(jī)選取1只大鼠,解剖雙膝關(guān)節(jié),肉眼觀察到右膝關(guān)節(jié)關(guān)節(jié)軟骨明顯毛糙,軟組織粘連明顯,部分滑膜可見潰瘍形成,說明造模成功。造模2周后,空白對照組(K組)不做任何干預(yù),僅為常規(guī)飼料喂養(yǎng)。模型試驗(yàn)對照組(S組)每天1次生理鹽水灌服,低、中、高濃度造模組分別給予巴戟天濃度為4g/Kg、8g/Kg、16g/Kg干預(yù),每天1次灌服巴戟天藥物,給藥濃度與劑量:人和動物間按體表面積計(jì)算等效劑量比值,按單位體重的劑量來計(jì)算,大鼠的等效劑量為正常人的6.3倍。藥物干預(yù)4周后,全部5組大鼠以5%水合氯醛麻醉后,以真空取腹主動脈血后處死,留取血液標(biāo)本,于離心機(jī)中離心,留取血清標(biāo)本,用ELISA法進(jìn)行IL-1β、TNF-α蛋白表達(dá)分析;ELISA法進(jìn)行MMP-3、MMP-13蛋白表達(dá)分析。統(tǒng)一切開大鼠右膝關(guān)節(jié),小心剝離滑膜及關(guān)節(jié)軟骨,分別置于凍存管中,并及時置于-80℃超低溫冰箱中。采用免疫組化檢測各組滑膜及軟骨中II型膠原的表達(dá)。結(jié)果:基于細(xì)胞因子檢測結(jié)果進(jìn)行分析,巴戟天低、中、高濃度組IL-1β血清濃度均低于模型對照組(P0.01)。另外,巴戟天不同濃度組TNF-α、MMP3、MMP13血清濃度均顯著低于模型對照組(P0.01)。根據(jù)免疫組化檢測滑膜及軟骨中Col-II表達(dá)水平,通過檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn),無論是滑膜還是軟骨中,巴戟天不同濃度組Col-Ⅱ表達(dá)均高于模型組(P0.05)。結(jié)論:我們可以證明通過巴戟天治療KOA關(guān)節(jié)后,其對Col-Ⅱ表達(dá)水平有促進(jìn)作用,從而達(dá)到保護(hù)關(guān)節(jié)軟骨,減輕炎癥的目的。不僅如此,巴戟天在治療KOA關(guān)節(jié)的過程中,對細(xì)胞因子如IL-1β、TNF-α及基質(zhì)金屬蛋白酶有明顯的抑制作用。就此,通過本實(shí)驗(yàn)我們可以發(fā)現(xiàn),巴戟天是通過抑制促炎癥因子和基質(zhì)金屬蛋白酶的分泌,以及促進(jìn)Col-Ⅱ表達(dá)水平,協(xié)同作用下最大限度對軟骨細(xì)胞起到保護(hù)作用,消除炎癥反應(yīng),減輕臨床癥狀。
【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5

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1 唐偉東;巴戟天水提液對大鼠KOA關(guān)節(jié)軟骨Ⅱ型膠原蛋白的影響[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2019年

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本文編號：2684480