發(fā)布時(shí)間：2020-05-28 01:02

【摘要】：目的;通過(guò)多個(gè)指標(biāo)驗(yàn)證TTS-12對(duì)皮膚癬菌的抗真菌活性,初步探究TTS-12的抗皮膚癬菌機(jī)制,通過(guò)體外抗真菌藥物誘導(dǎo)的方式建立皮膚癬菌耐藥模型,并考察TTS-12對(duì)耐藥皮膚癬菌的體外抗真菌作用,通過(guò)感染氟康唑耐藥皮膚癬菌豚鼠模型來(lái)考察TTS-12的體內(nèi)抗菌活性。方法:1.運(yùn)用CLSI的M38-A2方案測(cè)定TTS-12對(duì)兩種常見皮膚癬菌的最小抑菌濃度和最小殺菌濃度,并考察TTS-12對(duì)皮膚癬菌菌絲生長(zhǎng)、孢子萌發(fā)及總生物量的影響,通過(guò)棋盤法測(cè)定TTS-12與常用抗皮膚癬菌藥物聯(lián)合使用的抗真菌效果。2.通過(guò)HPLC-UV檢測(cè)TTS-12對(duì)紅色毛癬菌細(xì)胞膜中麥角固醇的合成量影響,并考察TTS-12對(duì)細(xì)胞線粒體中琥珀酸脫氫酶和蘋果酸脫氫酶兩種酶活性的影響。3.通過(guò)體外濃度遞增法建立皮膚癬菌耐藥模型,考察耐藥模型的穩(wěn)定性并測(cè)定TTS-12對(duì)耐藥皮膚癬菌的抗菌活性。4.建立豚鼠感染耐氟康唑紅色毛癬菌模型,給予1%的TTS-12凝膠,觀察TTS-12對(duì)病變皮膚的改善效果,探討TTS-12凝膠對(duì)豚鼠感染耐藥紅色毛癬菌體癬模型的影響。結(jié)果:1.蒺藜TTS-12對(duì)紅色毛癬菌標(biāo)準(zhǔn)株的MIC值為2μg×mL~(-1),MFC為16μg×mL~(-1),對(duì)27株臨床菌株的MIC范圍為1~8μg×mL~(-1),對(duì)須癬毛癬菌標(biāo)準(zhǔn)株MIC為1μg×mL~(-1),MFC為8μg×mL~(-1),對(duì)27株臨床菌株的MIC范圍為0.5~8μg×mL~(-1)。對(duì)真菌的菌絲生長(zhǎng)、孢子萌發(fā)和生物量菌均有呈濃度依賴性的抑制作用,并且與特比萘芬聯(lián)合使用時(shí),對(duì)兩種皮膚癬菌的標(biāo)準(zhǔn)菌株FIC0.5,對(duì)臨床菌株FIC0.5的比例為81.5%和76.2%。2.建立了HPLC-UV檢測(cè)麥角含量的分析方法,TTS-12的濃度越高,其抑制紅色毛癬菌中麥角甾醇合成作用越大,且TTS-12能夠抑制線粒體中琥珀酸脫氫酶和蘋果酸脫氫酶的活性,呈劑量依賴性。3.利用體外濃度遞增法建立了紅色毛癬菌抗氟康唑和酮康唑模型,兩種模型分別對(duì)兩種藥物的MIC范圍為128~512μg×mL~(-1)和64~128μg×mL~(-1)。經(jīng)過(guò)多次傳代仍保持耐藥性。TTS-12對(duì)兩種的MIC依舊處在較低水平,其范圍在4~16μg×mL~(-1)和4~8μg×mL~(-1)。4.建立了豚鼠感染耐氟康唑紅色毛癬菌體癬模型,與模型組相比,含量為1%的酮康唑和TTS-12凝膠均對(duì)感染有一定改善作用,且TTS-12的改善作用要高于酮康唑。HE和PAS染色結(jié)果顯示,模型組相比,TTS-12組炎性細(xì)胞浸潤(rùn)情況輕,且角質(zhì)層較為正常,棘層基本沒有增厚。結(jié)論:1.蒺藜TTS-12對(duì)紅色毛癬菌和須癬毛癬菌的標(biāo)準(zhǔn)菌株及臨床菌株都具有良好的體外抗真菌活性,能夠抑制兩種皮膚癬菌的孢子萌發(fā)率、菌絲生長(zhǎng),且與特比萘芬聯(lián)用具有良好的協(xié)同作用。2.TTS-12抗皮膚癬菌的機(jī)制可能為影響麥角固醇的合成通路,減少其合成量,影響細(xì)胞膜的完整性,并影響線粒體中呼吸作用的限速酶,從而影響細(xì)胞功能導(dǎo)致細(xì)胞死亡。3.TTS-12對(duì)于氟康唑、酮康唑耐藥的紅色毛癬菌具有良好的抑菌活性,并且TTS-12凝膠對(duì)感染耐氟康唑紅色毛癬菌豚鼠模型也有良好的治療作用,說(shuō)明TTS-12具有一定體內(nèi)抗耐氟康唑皮膚癬菌的作用。
【圖文】：

測(cè) TTS-12 對(duì)紅色毛癬菌線粒體中蘋果酸脫氫酶（MDH）活力的按照試劑一:試劑二:試劑三=60:1:5 的比例進(jìn)行配制，現(xiàn)配現(xiàn)用見分光光度計(jì)調(diào)于 340 波長(zhǎng)處，用 1cm 光鏡比色皿，以蒸餾入 100μL 線粒體蛋白樣品，迅速轉(zhuǎn)移 2.6mL 工作液至試管中混合液迅速倒入比色皿中，在 340nm 處比色，5 秒時(shí)讀取吸光第 65 秒時(shí)測(cè)吸光值（A2）。求出兩次吸光度差值△A=A1—A2公式同 3.3.2.3 SDH 酶活性的定義和計(jì)算。結(jié)果12 對(duì)紅色毛癬菌麥角固醇合成的影響效液相色譜圖醇對(duì)照品的圖譜如圖 3-1 所示，在紅色毛癬菌中提取的麥角固示，兩者的峰型一致，保留時(shí)間約在 10.67min 左右。

圖 3-2 紅色毛癬菌中提取的麥角固醇高效液相色譜圖g3-2 The HPLC chromatography ofergosterol extracted from T.rub準(zhǔn)曲線積 Y 為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣濃度 X 為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得到回歸+44.381，r=9997。結(jié)果說(shuō)明麥角固醇進(jìn)樣量在 24～624μg mL-1有。TS-12 對(duì)麥角甾醇含量的影響0.30.40.5contenti（%）***********
【學(xué)位授予單位】：廣東藥科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R284;R285

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2684446