【摘要】：肝能滴丸(Ganneng Dripping Pills,GDP)是由藏藥波棱瓜子的有效部位——波棱總木脂素(the total lignans of Herpetospermum caudigerum,TLHC)作為原料制成的滴丸劑,具有清利濕熱、清熱解毒的功效,能夠保肝降酶、抑制乙肝病毒(Hepatitis B virus,HBV)的復(fù)制,主治慢性肝炎�，F(xiàn)代研究表明,TLHC能明顯下調(diào)轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)的表達(dá),能顯著降低透明質(zhì)酸(HA)和羥脯胺酸(HYP)的含量,抑制肝纖維的合成與沉降,具有良好的抗肝纖維化(hepatic fibrosis,HF)的作用。肝能滴丸現(xiàn)有的質(zhì)量控制僅以薄層鑒別和herpetrione定量測定為主,檢測指標(biāo)單一,不能全面控制肝能滴丸的質(zhì)量,保證藥效。課題組前期建立了同時檢測波棱瓜子藥材中7種木脂素類成分的HPLC方法,但是由于對照品缺乏、制備困難等原因未能得到推廣。近年來,指紋圖譜與一測多評法(quantitative analysis of multi-components by single-marker,QAMS)的結(jié)合,不僅能全面反映藥物質(zhì)量,還能通過單一對照品實現(xiàn)多成分同時測定,有效的解決了對照品昂貴、匱乏的問題,具有便利、快速、廉價等特點,已經(jīng)被普遍應(yīng)用于多種中藥。本論文以肝能滴丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究為目標(biāo)開展以下研究:首先,采用高壓制備法對肝能滴丸有效部位TLHC進行分離純化,采用面積歸一化法對純化后樣品進行純度檢測,并通過UV、IR、NMR、MS等數(shù)據(jù)對獲得的單體成分進行鑒定。從TLHC中制備8個化合物,經(jīng)鑒定分別是dehydrodiconiferyl alcohol(BLG-3)、herpetotriol I(BLG-4)、herpetolide A(BLG-5)、herpetrione(BLG-6)、herpetin(BLG-7)、herpetetrone(BLG-10)、herpetone(BLG-11)、herpetenone(BLG-12),其中herpetotriol I為新化合物。其次,對肝能滴丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究。以herpetrione為指標(biāo)成分,采用TLC進行定性鑒別,可見供試品與對照品在相同的位置上有同種顏色的斑點,而陰性樣品無干擾。根據(jù)《中國藥典》2015年版四部通則0108丸劑項下相關(guān)要求,對肝能滴丸進行重量差異、溶散時限和微生物限度的檢測,檢測結(jié)果均達(dá)到藥典要求。以herpetrione為內(nèi)參物,建立同時測定8個成分(dehydrodiconiferyl alcohol、herpetotriol I、herpetolide A、herpetrione、herpetin、herpetetrone、herpetone、herpetenone)的QAMS定量測定方法,并對5批肝能滴丸進行檢測,方法穩(wěn)定可靠。建立了肝能滴丸指紋圖譜,通過《中藥色譜指紋圖譜相似度評價軟件》,對5批肝能滴丸指紋圖譜進行相似度分析,采用中位數(shù)生成5批肝能滴丸指紋圖譜的共有模式,并確定了14個共有峰,經(jīng)過與對照品的對比,指認(rèn)出8個成分,5批肝能滴丸相似度均在0.99以上。最后,根據(jù)肝能滴丸含量測定結(jié)果,選擇含量較高的herpetrione和herpetone作為研究對象,采用CCK-8法檢測不同濃度的herpetrione、herpetone對大鼠肝星狀細(xì)胞(HSC-T6)不同處理時間的影響,并采用流式細(xì)胞術(shù)對HSC-T6的凋亡率進行檢測。結(jié)果表明,herpetrione、herpetone對HSC-T6增值抑制作用明顯,呈濃度與時間依賴性;細(xì)胞凋亡率分別隨著herpetrione、herpetone濃度的增加而增大。說明herpetrione和herpetone具有抗肝纖維化的作用。
【圖文】：

1.2.2 化學(xué)成分提取、分離取 TLHC 約 30 g，加入 600 ml 甲醇，超聲溶解，濾過。采用高壓制備液相分離純化，色譜柱為 Innoval ODS-2 10um 100A，流速為 80 ml·min-1，檢測波長為 280 nm，輔助波長為 254 nm，流動相為乙腈（A）-水（B）梯度洗脫，共接收 8 個組分 A~H，再經(jīng)反復(fù)高壓制備方法，得到單體化合物。采用面積歸一化法對各單體的純度進行標(biāo)定，各成分純度及質(zhì)量分別為：BLG-3，純度為95.2%，質(zhì)量為 33.2 mg；BLG-4，純度為 93.1%，質(zhì)量為 120.2 mg；BLG-5，純度為 94.6%，，質(zhì)量為 244.0 mg；BLG-6，純度為 98.7%，質(zhì)量為 1.99 g；BLG-7，純度為 95.9%，質(zhì)量為 261.7 mg；BLG-10，純度為 95.4%，質(zhì)量為38.7 mg；BLG-11，純度為 98.6%，質(zhì)量為 270.0 mg；BLG-12，純度為 96.5%，質(zhì)量為 251.2 mg。分離制備流程圖，見圖 1-1；高壓制備色譜圖，見圖 1-2。

成都中醫(yī)藥大學(xué) 2018 屆碩士學(xué)位論文開劑烷-乙酸乙酯-甲醇（3:2:0.2）。層鑒別色譜法（《中國藥典》2015 版四部通則 0502）項下的方”“ 2.2.1.2”“ 2.2.1.3”項下的對照品溶液、供試品溶，分別點于同一硅膠薄層板上，用“2.2.1.4”項下展開劑噴以 20%硫酸乙醇溶液，在 110℃加熱至斑點顯色清晰批次供試品中在與對照品譜圖相同的位置上有同一顏色。見圖 2-1。
【學(xué)位授予單位】：成都中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R286.0;R285

【參考文獻】

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本文編號：2684399