【摘要】：煙色煙管菌(Bjerkandera fumosa)是擔子菌門(Basidiomycota)的一種藥用真菌,在民間具有廣泛應用,但其活性組分及作用機制尚不清楚。本實驗室前期對煙色煙管菌的液體發(fā)酵及菌絲體多糖的結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)及其免疫活性進行了系統(tǒng)研究,本論文在此基礎上以葡萄糖為碳源發(fā)酵煙色煙管菌,對其胞外多糖進行制備、分離純化、性質(zhì)、結(jié)構(gòu)和生物活性的相關(guān)研究。主要研究結(jié)果如下:(1)煙色煙管菌胞外多糖的制備及理化性質(zhì)分析以葡萄糖液體發(fā)酵培養(yǎng)基培養(yǎng)煙色煙管菌,制備胞外多糖EPBF,得率為0.9g/L。理化性質(zhì)分析結(jié)果表明,EPBF主要由甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、巖藻糖以57.6:1.9:2.5:25.2:6.2:4.7:2.0的摩爾比組成,不含核酸和蛋白質(zhì);其平均分子量為3.5×10~5 Da;總糖、糖醛酸、多酚和灰分含量分別為63.57%、7.98%、0%和15.46%。(2)煙色煙管菌胞外多糖的分離純化、結(jié)構(gòu)及理化性質(zhì)分析EPBF經(jīng)DEAE-32纖維素陰離子層析和Sepharose G-75凝膠層析柱分離后,得到純化組分EPBFG。通過HPGLC檢測該組分為均一多糖,分子量為4.4×10~4Da。經(jīng)測定其主要由甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖以摩爾比為49.9:3.5:2.2:26.9:4.4:11.2組成;總糖和灰分含量分別為61.98%和6.34%。FT-IR和NMR分析結(jié)果顯示EPBFG主要由α-Glc,α-Gal和α-Man構(gòu)成,同時EPBFG不含有肽鏈或蛋白質(zhì),組分EPBFG的糖環(huán)形式為吡喃糖環(huán),糖苷鍵構(gòu)型為α型。(3)煙色煙管菌胞外多糖的生物活性研究測定了煙色煙管菌胞外多糖EPBF及其純化組分EPBFG的抗氧化活性。結(jié)果顯示在5 mg/mL條件下,兩者的DPPH自由基清除活性分別為70.22%和83.89%,羥基自由基清除活性分別為70.99%和81.87%,亞鐵離子螯合活性分別為78.29%和90.15%;12 mg/mL條件下,還原力分別為0.59和0.75。且抗氧化活性均以劑量依賴的方式增加,純化組分EPBFG的抗氧化活性高于EPBF。同時檢測了煙色煙管菌胞外多糖EPBF及其純化組分EPBFG的體外抗腫瘤活性。研究顯示EPBF及EPBFG對宮頸癌Hela細胞株的增殖有一定的抑制作用,并且對正常人體細胞H8細胞株沒有毒害作用。相同濃度下純化組分EPBFG的體外抗腫瘤活性高于EPBF。在2.5 mg/mL濃度下EPBFG對Hela細胞株抑制率達到48.44%。EPBFG在低濃度(≤1.5 mg/mL)時可以促進H8細胞株的增殖,濃度升高時抑制其增殖,但是抑制率均小于3%。利用流式細胞儀對多糖的抗腫瘤機理進行檢測,推測EPBFG是通過抑制細胞周期的方式抑制Hela細胞株的增殖,從而發(fā)揮抗腫瘤作用。
【圖文】：

圖 1-1 甲基化原理Fig.1-1 Methylation principle等人[55]研究的紅樹林植物后藤內(nèi)生真菌（Aspergillus sp.）純化結(jié)構(gòu)，通過甲基化分析并結(jié)合核磁共振分析得出以下結(jié)論，ASS12)-α-Manp，支鏈為 β-Manp，β-Galf 構(gòu)成的半乳甘露聚糖。高碘酸氧化法和 Smith 降解法酸氧化法和 Smith 降解法一般同時應用，Smith 降解方法是將通過的產(chǎn)物還原，再進行酸水解。因為糖基之間會在不同的位置進行氧化后會產(chǎn)生不同的氧化產(chǎn)物，最后通過水解產(chǎn)物來分析判斷多糖等人[56]對堿提的杏鮑菇多糖純化組分 PEAP-1 先進行高碘酸氧化EAP-1 分子主要存在的鍵型不被高碘酸氧化。再將氧化后的樣品解，結(jié)合高碘酸氧化的結(jié)果，多糖 PEAP-1 中存在 1→3 和 1→6 連

圖 1-2 野生煙色煙管菌子實體Fig.1-2 The natual fruiting body from Bjerkandera fumosa色煙管菌多糖的研究色煙管菌是一種藥用真菌多糖，在民間常用于治療子宮癌，但是對于的研究近些年才陸續(xù)展開。 煙色煙管菌的液體發(fā)酵培養(yǎng)多藥用真菌多糖都來自于真菌的野生子實體，隨著多糖的結(jié)構(gòu)成分及、抗氧化活性、免疫活性等生物活性功能不斷被研究發(fā)現(xiàn)，市場需求，，從而導致真菌野生子實體被過度的摘采，并且使其生存環(huán)境遭到嚴此惡性循環(huán)最終造成真菌資源大量減少、價格日趨昂貴、市場供不決目前面臨的問題，液體發(fā)酵培養(yǎng)、人工培養(yǎng)等方法逐漸發(fā)展完善，
【學位授予單位】：東北師范大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R284

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本文編號：2683762