【摘要】：炎癥是對多種有害刺激的防御和保護(hù)性反應(yīng),過度和不受控制的炎癥可以導(dǎo)致局部組織損傷甚至全身性損傷,是多種炎性疾病發(fā)病機(jī)制的基礎(chǔ)。我們前期的研究發(fā)現(xiàn)艾納香油有很好的抗炎活性,然而,其潛在的作用機(jī)制還不是很清楚。本文研究目的是初步探討艾納香油對脂多糖(LPS)介導(dǎo)巨噬細(xì)胞分泌炎性因子的影響及其潛在的作用機(jī)制。首先利用氣-質(zhì)聯(lián)用(GC-MS)法分別對5個(gè)黔產(chǎn)的艾納香油進(jìn)行分析,確定其主要成分,并采用峰面積歸一法計(jì)算相對百分含量;通過二甲苯致小鼠耳腫脹試驗(yàn)及過敏性慢反應(yīng)物質(zhì)(SRS-A)生成的抑制試驗(yàn),初步篩選了5個(gè)黔產(chǎn)艾納香油中抗炎活性相對較好的艾納香油,為后續(xù)的研究奠定了物質(zhì)基礎(chǔ)。其次采用MTT法檢測抗炎最佳產(chǎn)源的艾納香油對巨噬細(xì)胞的毒性;采用ELISA法檢測其對LPS誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞分泌腫瘤壞死因子(TNF-α)、白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)、白細(xì)胞介素-6(IL-6)、前列腺素E_2(PGE_2)和環(huán)氧合酶-2(COX-2)的影響;采用紫外分光光度法檢測其對LPS致小鼠腹腔巨噬細(xì)胞中一氧化氮(NO)的生成和抑制型一氧化氮合酶(iNOS)活力的影響。最后采用qPCR法檢測艾納香油對LPS誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞CD14、MD-2、TLR4、MyD88、IRAK-1、TAK-1、NF-κBp65、iNOS、COX-2的mRNA相對表達(dá)的影響;Western blot法檢測艾納香油對LPS誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞CD14、MD-2、TLR4、MyD88、IRAK-1、TAK-1、NF-κBp65、nlrp3的蛋白相對表達(dá)量的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明5個(gè)黔產(chǎn)的艾納香油中左旋龍腦、反式石竹烯、樟腦、石竹烯氧化物、香樹烯、花椒素、芳樟醇含量相對較高,且5個(gè)黔產(chǎn)艾納香油共有成分21種;4個(gè)黔產(chǎn)的艾納香油能顯著或極顯著減少二甲苯致小鼠耳廓腫脹(P㩳0.05,P㩳0.01),5個(gè)黔產(chǎn)的艾納香油能極顯著減少SRS-A生成(P㩳0.01),獲得1個(gè)抗炎最佳黔產(chǎn)的艾納香油,該艾納香油對巨噬細(xì)胞的IC_(50)值為254.4μg·mL~(-1),適當(dāng)濃度的該油能顯著或極顯著抑制LPS介導(dǎo)的巨噬細(xì)胞分泌TNF-α、IL-1β、IL-6、PGE_2、COX-2、NO及iNOS的活力(P㩳0.05,P㩳0.01),也抑制了CD14、MD-2、TLR4、MyD88、IRAK-1、TAK-1、NF-κBp65、iNOS、COX-2 mRNA的表達(dá)及CD14、MD-2、TLR4、MyD88、IRAK-1、TAK-1、NF-κBp65、nlrp3的蛋白相對表達(dá)量(P㩳0.05,P㩳0.01)。結(jié)果提示5個(gè)黔產(chǎn)艾納香油各成分含量不同,且具有不同程度的抗炎作用,抗炎最佳產(chǎn)源的艾納香油作用機(jī)制可能是通過LPS-TLR4信號途徑抑制NF-κBp65的磷酸化入核,減少PGE_2的生成抑制iNOS的活性從而減少NO及TNF-α、IL-1β、IL-6的產(chǎn)生與表達(dá);同時(shí)也可能通過抑制LPS活化巨噬細(xì)胞內(nèi)的nlrp3炎癥小體通路,從而抑制炎癥的發(fā)生。本課題結(jié)果將為黔產(chǎn)艾納香油進(jìn)一步抗炎作用機(jī)制深入研究提供理論數(shù)據(jù)參考。
【圖文】：

第一章 前言 艾納香油研究進(jìn)展艾納香 Blumea balsamifera( L.) DC．為菊科艾納香屬植物，主產(chǎn)于熱帶、亞帶地區(qū)，是貴州具有地理標(biāo)志的地道藥材，目前貴州艾納香屬植物有假東風(fēng)草苞艾納香、千頭艾納香、少葉艾納香、柔毛艾納香等 14 個(gè)品種[1]。據(jù)《現(xiàn)代草綱目》記載，，具有清熱明目、祛風(fēng)止癢、解毒消腫等功效，主治目赤腫痛疹、疥瘡、皮膚瘙癢等癥[2]。艾納香揮發(fā)油（Blumea balsamifera oill，BBO）艾納香的葉、枝經(jīng)提煉得到艾片后的副產(chǎn)物，民間直接將其涂抹于燒傷或燙傷膚，有良好的治療效果，且不留疤痕，其作為一類次生代謝產(chǎn)物，具有安全毒，無污染等特點(diǎn)，有非常好的開發(fā)前景。目前有文獻(xiàn)已經(jīng)報(bào)道了艾納香揮發(fā)具有很好的藥理活性，本文期對艾納香揮發(fā)油資源開發(fā)和利用提供參考價(jià)值

十九世紀(jì)就被認(rèn)可，并且主要與革蘭氏陰性菌釋放。目前主要的內(nèi)毒素是脂多糖（lipopolys外膜的主要成分，其一般由疏水性脂質(zhì) A 結(jié)構(gòu)多糖（O 抗原）組成[39]。單獨(dú)的脂質(zhì) A 部分足產(chǎn)生類似于大腸桿菌脂質(zhì) A 的脂質(zhì) A 物種，其個(gè)�；�，這種六酰基脂質(zhì) A 分子是強(qiáng)有力的子模式，并且是對 LPS 的免疫應(yīng)答的主要誘導(dǎo)的變化可對脂質(zhì) A 的生物活性產(chǎn)生深遠(yuǎn)影響[40及內(nèi)皮細(xì)胞，誘發(fā)宿主的炎癥反應(yīng)，引起細(xì)胞釋放（如 IL-1β、IL-6、TNF-α），導(dǎo)致全身性炎
【學(xué)位授予單位】：貴州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2683780