發(fā)布時間：2020-05-27 16:01

【摘要】：炎癥是對多種有害刺激的防御和保護性反應,過度和不受控制的炎癥可以導致局部組織損傷甚至全身性損傷,是多種炎性疾病發(fā)病機制的基礎。我們前期的研究發(fā)現艾納香油有很好的抗炎活性,然而,其潛在的作用機制還不是很清楚。本文研究目的是初步探討艾納香油對脂多糖(LPS)介導巨噬細胞分泌炎性因子的影響及其潛在的作用機制。首先利用氣-質聯用(GC-MS)法分別對5個黔產的艾納香油進行分析,確定其主要成分,并采用峰面積歸一法計算相對百分含量;通過二甲苯致小鼠耳腫脹試驗及過敏性慢反應物質(SRS-A)生成的抑制試驗,初步篩選了5個黔產艾納香油中抗炎活性相對較好的艾納香油,為后續(xù)的研究奠定了物質基礎。其次采用MTT法檢測抗炎最佳產源的艾納香油對巨噬細胞的毒性;采用ELISA法檢測其對LPS誘導巨噬細胞分泌腫瘤壞死因子(TNF-α)、白細胞介素-1β(IL-1β)、白細胞介素-6(IL-6)、前列腺素E_2(PGE_2)和環(huán)氧合酶-2(COX-2)的影響;采用紫外分光光度法檢測其對LPS致小鼠腹腔巨噬細胞中一氧化氮(NO)的生成和抑制型一氧化氮合酶(iNOS)活力的影響。最后采用qPCR法檢測艾納香油對LPS誘導巨噬細胞CD14、MD-2、TLR4、MyD88、IRAK-1、TAK-1、NF-κBp65、iNOS、COX-2的mRNA相對表達的影響;Western blot法檢測艾納香油對LPS誘導RAW264.7細胞CD14、MD-2、TLR4、MyD88、IRAK-1、TAK-1、NF-κBp65、nlrp3的蛋白相對表達量的影響。實驗結果表明5個黔產的艾納香油中左旋龍腦、反式石竹烯、樟腦、石竹烯氧化物、香樹烯、花椒素、芳樟醇含量相對較高,且5個黔產艾納香油共有成分21種;4個黔產的艾納香油能顯著或極顯著減少二甲苯致小鼠耳廓腫脹(P㩳0.05,P㩳0.01),5個黔產的艾納香油能極顯著減少SRS-A生成(P㩳0.01),獲得1個抗炎最佳黔產的艾納香油,該艾納香油對巨噬細胞的IC_(50)值為254.4μg·mL~(-1),適當濃度的該油能顯著或極顯著抑制LPS介導的巨噬細胞分泌TNF-α、IL-1β、IL-6、PGE_2、COX-2、NO及iNOS的活力(P㩳0.05,P㩳0.01),也抑制了CD14、MD-2、TLR4、MyD88、IRAK-1、TAK-1、NF-κBp65、iNOS、COX-2 mRNA的表達及CD14、MD-2、TLR4、MyD88、IRAK-1、TAK-1、NF-κBp65、nlrp3的蛋白相對表達量(P㩳0.05,P㩳0.01)。結果提示5個黔產艾納香油各成分含量不同,且具有不同程度的抗炎作用,抗炎最佳產源的艾納香油作用機制可能是通過LPS-TLR4信號途徑抑制NF-κBp65的磷酸化入核,減少PGE_2的生成抑制iNOS的活性從而減少NO及TNF-α、IL-1β、IL-6的產生與表達;同時也可能通過抑制LPS活化巨噬細胞內的nlrp3炎癥小體通路,從而抑制炎癥的發(fā)生。本課題結果將為黔產艾納香油進一步抗炎作用機制深入研究提供理論數據參考。
【圖文】：

第一章 前言 艾納香油研究進展艾納香 Blumea balsamifera( L.) DC．為菊科艾納香屬植物，主產于熱帶、亞帶地區(qū)，是貴州具有地理標志的地道藥材，目前貴州艾納香屬植物有假東風草苞艾納香、千頭艾納香、少葉艾納香、柔毛艾納香等 14 個品種[1]。據《現代草綱目》記載，，具有清熱明目、祛風止癢、解毒消腫等功效，主治目赤腫痛疹、疥瘡、皮膚瘙癢等癥[2]。艾納香揮發(fā)油（Blumea balsamifera oill，BBO）艾納香的葉、枝經提煉得到艾片后的副產物，民間直接將其涂抹于燒傷或燙傷膚，有良好的治療效果，且不留疤痕，其作為一類次生代謝產物，具有安全毒，無污染等特點，有非常好的開發(fā)前景。目前有文獻已經報道了艾納香揮發(fā)具有很好的藥理活性，本文期對艾納香揮發(fā)油資源開發(fā)和利用提供參考價值

十九世紀就被認可，并且主要與革蘭氏陰性菌釋放。目前主要的內毒素是脂多糖（lipopolys外膜的主要成分，其一般由疏水性脂質 A 結構多糖（O 抗原）組成[39]。單獨的脂質 A 部分足產生類似于大腸桿菌脂質 A 的脂質 A 物種，其個�；�，這種六�；| A 分子是強有力的子模式，并且是對 LPS 的免疫應答的主要誘導的變化可對脂質 A 的生物活性產生深遠影響[40及內皮細胞，誘發(fā)宿主的炎癥反應，引起細胞釋放（如 IL-1β、IL-6、TNF-α），導致全身性炎
【學位授予單位】：貴州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5

【參考文獻】

相關期刊論文 前10條

1 蔡炳岡;朱進;汪茂榮;;Toll樣受體4信號通路研究進展[J];醫(yī)學研究生學報;2015年11期

2 吳麗芬;龐玉新;楊全;袁蕾;張影波;李海艷;;GC法同時測定艾納香油中5個主要成分的含量[J];藥物分析雜志;2015年07期

3 張穎;李翔;宋婷;許俊強;張應華;周恒蒼;;艾納香揮發(fā)油的化學成分及抗細菌活性研究[J];北京農業(yè);2015年17期

4 王嵩;趙永恒;周毅生;李芳芳;;艾納香的研究進展及其研究價值探討[J];中國現代中藥;2014年11期

5 范佐旺;王丹;龐玉新;楊全;馬青松;李小婷;王凱;;艾納香油對大鼠深Ⅱ度燙傷的治療研究[J];中醫(yī)藥信息;2014年06期

6 夏[?;李祥;陳建偉;;不同提取方法對艾納香揮發(fā)油化學組成的影響及其體外抗氧化活性[J];中成藥;2014年10期

7 龐玉新;張文晴;王凱;胡璇;王丹;;艾納香曬后修護睡眠面膜的工藝研究與優(yōu)選[J];香料香精化妝品;2014年04期

8 王曉晨;吉愛國;;NF-κB信號通路與炎癥反應[J];生理科學進展;2014年01期

9 王丹;付萬進;龐玉新;王暉;胡璇;聶昊;;艾納香油過敏性和急性毒性實驗研究[J];熱帶作物學報;2013年12期

10 付萬進;王丹;龐玉新;王暉;黃釗;聶昊;于福來;張影波;;艾納香油對硫酸沙丁胺醇體外透皮吸收的影響[J];中國實驗方劑學雜志;2013年14期

本文編號：2683780