發(fā)布時間：2020-05-27 10:59

【摘要】：目的:初步探討益氣養(yǎng)陰溫陽利水法治療慢性心力衰竭的作用機(jī)制。方法:模型建立方法:采用腹主動脈縮窄術(shù)(AAC)建立壓力超負(fù)荷誘導(dǎo)的慢性心衰大鼠模型,假手術(shù)組予以相同的手術(shù)但并不進(jìn)行腹主動脈縮窄。實驗分組及給藥情況:術(shù)后6周,將存活的造模的大鼠隨機(jī)分成三組:模型組、芪藶組、益氣養(yǎng)陰溫陽利水中藥組(簡稱中藥組),每組10只;另以余下的10只假手術(shù)組大鼠作為正常對照。芪藶組每天予芪藶強(qiáng)心膠囊粉劑制成的混懸液以0.1g/100g劑量定時灌胃一次;中藥組每天予自制水煎劑益氣養(yǎng)陰溫陽利水方以12.13g/kg的劑量定時灌胃一次;模型組與假手術(shù)組每天予生理鹽水定時灌胃一次,4ml/次;藥物干預(yù)療程均為4周。呼吸頻率的測定:在建模前從62只健康大鼠中隨機(jī)抽取10只,于大鼠安靜時(約上午8:00—10:00)測定呼吸頻率,計算平均值;建模6周后在藥物干預(yù)前及藥物干預(yù)4周后計算每只大鼠呼吸頻率并記錄均值;比較不同時間點各組大鼠的呼吸頻率變化。取材及標(biāo)本檢測:連續(xù)藥物干預(yù)4周后,大鼠稱重,記錄體重(BW),以0.3ml/100g的劑量腹腔注射10%水合氯醛麻醉大鼠,對全部大鼠進(jìn)行彩色多普勒超聲心動圖檢測以評估心臟結(jié)構(gòu)及心功能變化。采用腹主動脈取血收集血液標(biāo)本,ELISA檢測血清中BNP、MMP-2、AngⅡ濃度。大鼠失血死亡后立即剪取心臟組織并分離左心室,用冰生理鹽水沖洗干凈并用濾紙吸干水分后分別稱重,記錄心臟質(zhì)量(HM)、左心室質(zhì)量(LVM),計算心臟質(zhì)量指數(shù)(HMI)和左心室質(zhì)量指數(shù)(LVMI),HMI=HM/BW,LVMI=LVM/BW。將剪碎的心室組織分成兩部分,一部分置于4%多聚甲醛溶液中固定置于4℃冰箱中保存,以備做病理切片HE染色和Massion染色進(jìn)行心肌細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢測和心肌纖維化觀察及心肌膠原容積分?jǐn)?shù)計算;另一部分放入-80℃冰箱中保存,以備Wstern Blot檢測心肌TGF-β蛋白含量和rt-qPCR檢測miR-21和SPRY2的mRNA表達(dá)水平。統(tǒng)計學(xué)方法:全部實驗數(shù)據(jù)X~—±S表示,運(yùn)用統(tǒng)計分析軟件SPSS 23.0進(jìn)行組間的單因素方差分析(one-way ANOVA),每兩組間的多重比較采用LSD進(jìn)行t檢驗,P0.05則認(rèn)為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果:AAC術(shù)后10周,接受AAC手術(shù)的大鼠一般情況較假手術(shù)組差,活動減弱,飲食、進(jìn)水減少,毛色粗糙稀疏,呼吸頻率加快,尤以模型組一般狀態(tài)最差,中藥組、芪藶組相較于模型組一般情況得到改善。大鼠心臟肥厚指標(biāo)計算結(jié)果顯示模型組大鼠HWI、LVWI顯著高于假手術(shù)組(P0.01);超聲心動圖檢測顯示模型組大鼠LVEDD、LVESD、LVESV、LVEDV、LVPWI、IVST、E/e’指標(biāo)均明顯高于假手術(shù)組(P0.05或P0.01);中藥組、芪藶組這9個指標(biāo)均高于假手術(shù)組、低于模型組(P0.05),中藥組的HWI、LVWI較芪藶組降低(P0.01),中藥組與芪藶組的LVEDD、LVESD、LVEDV、LVESV、LVPWT、IVST、E/e’之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。模型組LVEF較假手術(shù)組降低(P0.01),芪藶組、中藥組LVEF與假手術(shù)組、模型組之間的差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),芪藶組、中藥組、模型組、假手術(shù)組的LVEF均50%;四組的FS差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。病理切片HE染色觀察到假手術(shù)組大鼠心肌細(xì)胞排列整齊、形態(tài)正常無增生肥大、間質(zhì)無增生、無炎性細(xì)胞浸潤,模型組大鼠呈現(xiàn)明顯的心肌細(xì)胞排列紊亂、炎性細(xì)胞浸潤,中藥組、芪藶組心肌細(xì)胞排列尚規(guī)則,呈現(xiàn)輕微的細(xì)胞肥大和極少量間質(zhì)增生、炎性細(xì)胞浸潤,兩組之間肉眼所見未見明顯差異。Massion染色顯示模型組較假手術(shù)組呈現(xiàn)明顯的心肌纖維化,膠原容積分?jǐn)?shù)增加(P0.01);中藥組、芪藶組心肌纖維化程度較模型組明顯改善,膠原容積分?jǐn)?shù)降低(P0.01);中藥組與模型組膠原容積分?jǐn)?shù)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。血清學(xué)檢測顯示模型組BNP、MMP-2、AngⅡ血清濃度明顯高于假手術(shù)組(P0.05),中藥組、芪藶組BNP、MMP-2、AngⅡ血清濃度高于假手術(shù)組(P0.05),較模型組則水平降低(P0.01)。Wstern blot檢測提示TGF-β1蛋白表達(dá)量模型組、中藥組、芪藶組均高于假手術(shù)組(P0.01),中藥組、芪藶組較模型組水平降低(P0.05),中藥組、芪藶組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。Rt-qPCR檢測顯示模型組大鼠心肌miR-21表達(dá)較假手術(shù)組明顯上升(P0.01),芪藶組、中藥組miR-21水平較假手術(shù)組升高(P0.05),較模型組降低(P0.01);模型組、芪藶組、中藥組SPRY2水平較假手術(shù)組均降低(P0.05),芪藶組、中藥組較模型組SPRY2表達(dá)升高(P0.05);芪藶組與中藥組miR-21、SPRY2的mRNA表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1.慢性心衰大鼠心肌肥厚、心肌纖維化與血清BNP、MMP-2、AngⅡ升高、心肌組織TGF-β1蛋白表達(dá)增多、miR-21表達(dá)上調(diào)及SPRY2表達(dá)減少有關(guān)。2.益氣養(yǎng)陰溫陽利水方能降低慢性心衰大鼠心臟質(zhì)量指數(shù)和左心室質(zhì)量指數(shù),減輕細(xì)胞肥大、心肌纖維化程度,抑制心室重構(gòu),改善心功能。3.益氣養(yǎng)陰溫陽利水方可通過降低慢性心衰大鼠血清AngⅡ、BNP、MMP-2水平及心肌組織TGF-β1的表達(dá)來逆轉(zhuǎn)心室重構(gòu)、改善心功能。4.益氣養(yǎng)陰溫陽利水方可抑制慢性心衰大鼠的心肌miR-21的水平,上調(diào)SPRY2的mRNA水平,從而抑制MAPK信號通路的激活和EMT的病理過程,阻止心肌纖維化保護(hù)心臟.
【圖文】：

32圖 1-6 超聲心動圖檢測大鼠心功能彩色多譜勒超聲心動圖顯示，與假手術(shù)組比較，模型肌均較肥厚，舒張末內(nèi)徑增大，以模型組最為明顯，HMI體差異分別見表三和表四。

表 5 益氣養(yǎng)陰溫陽利水方對慢性心衰大鼠左室舒張功能的影響LVEDD（cm）LVESD（cm）LVEDV（ml）LVESV（ml）LVPWT（cm）IVST（cm）0.609±0.530**##▲▲0.350±0.510*#▲▲0.664±0.160*#▲▲0.096±0.023*#▲▲0.119±0.013**##▲▲0.1070.011**#0.778±0.842*#0.509±0.657**##1.224±0.255**#0.306±0.098*#0.230±0.48*##0.206±00.699±0.2230.420±0.4380.916±0.2080.204±0.0850.188±0.0170.1710.190.699±0.5400.413±0.4820.989±0.2200.217±0.0920.173±0.350.1680.04：與芪藶組比較*P＜0.05、** P＜0.01;與中藥組比較# P＜0.05、## P＜0.01；與模型＜0.05、▲▲P＜0.01。：因心功能檢測需要于大鼠處于安靜狀態(tài)，，個別大鼠因麻醉過淺未能準(zhǔn)確檢測心功能指納，故每組大鼠樣本量不盡相同。
【學(xué)位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 王恒和;劉興磊;程剛;李明;朱亞萍;牛子長;;慢性心力衰竭患者中醫(yī)證型與超聲心動圖的相關(guān)性研究[J];天津中醫(yī)藥;2015年12期

2 楊全;;中藥穴位敷貼配合西藥治療慢性充血性心力衰竭療效觀察[J];亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥;2015年23期

3 省格麗;趙勇;;郭維琴教授證治心衰的經(jīng)驗[J];新疆中醫(yī)藥;2015年04期

4 司錕;;慢性心力衰竭臨床常見證型與心臟超聲結(jié)果相關(guān)性研究[J];中華中醫(yī)藥學(xué)刊;2015年06期

5 田桂春;孫伯青;;穴位敷貼治療慢性心力衰竭心腎陽虛證療效觀察[J];中醫(yī)臨床研究;2015年15期

6 張健;張宇輝;;多中心、前瞻性中國心力衰竭注冊登記研究——病因、臨床特點和治療情況初步分析[J];中國循環(huán)雜志;2015年05期

7 方偉;祝光禮;陳鐵龍;祝康;赫小龍;;60例慢性收縮性心力衰竭患者中醫(yī)證型與血漿AVP、尿液水通道蛋白2的相關(guān)性研究[J];中華中醫(yī)藥學(xué)刊;2015年02期

8 李春陵;顧廣富;羅建華;楊冬花;;益氣溫陽活血方對慢性心力衰竭心室重塑大鼠GATA4表達(dá)的影響[J];中華中醫(yī)藥雜志;2014年09期

9 高鴻敏;高麗華;;Galectin-3與心力衰竭關(guān)系的研究進(jìn)展[J];中國循證心血管醫(yī)學(xué)雜志;2014年03期

10 江會鎮(zhèn);李成林;;溫陽利水活血法改善慢性心力衰竭后期生存質(zhì)量研究[J];吉林中醫(yī)藥;2014年03期

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前2條

1 豐文俊;太極拳對慢性心力衰竭患者心肺功能的影響[D];遼寧中醫(yī)藥大學(xué);2017年

2 王仁俊;慢性心衰狀態(tài)下丘腦室旁核GABA_A和GABA_B受體介導(dǎo)的交感傳出抑制作用發(fā)生鈍化[D];東北師范大學(xué);2008年

本文編號：2683429