【摘要】：生脈注射液是中藥經(jīng)典復(fù)方現(xiàn)代化應(yīng)用的代表性藥物之一,源于《內(nèi)外傷辯惑論》中記載的古方生脈飲,本論文結(jié)合化學(xué)分析、敏感生物活性測定、網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)及代謝組學(xué)技術(shù)對生脈注射液的質(zhì)量評價及針對膿毒癥診療的分子機制進行研究,實驗結(jié)果如下:第一部分:采用指紋圖譜技術(shù)分析5廠家9批次生脈注射液UPLC色譜圖,確定24號色譜峰五味子醇甲為參照峰,標(biāo)定44個共有峰,并確定、指認其中人參皂苷Rg1(10號峰)等11個共有峰,9批次樣品的色譜圖相似度均大于0.91,表明批次間差異較小,樣品溶液制備工藝較為穩(wěn)定,方法準(zhǔn)確可靠。第二部分:采用多指標(biāo)性成分定量分析手段,建立了穩(wěn)定、快速的UPLC色譜方法;結(jié)合主成分分析建立生脈注射液綜合評價模型,各批次得分從高到低:S2、S9、S5、S1、S6、S7、S8、S3。第三部分:建立了采用敏感生物活性指導(dǎo)的生脈注射液質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn),更加客觀、明確、綜合地反映其質(zhì)量:(一)建立了基于DPPH自由基清除能力的質(zhì)量控制方法學(xué),5廠家9批次生脈注射液清除自由基能力較穩(wěn)定;(二)建立基于RAW264.7細胞模型抗炎物質(zhì)(NO)清除的質(zhì)量控制方法學(xué),緊密聯(lián)系其療效,增強生物活性質(zhì)控方法的專屬性,5廠家9批次生脈注射液清除抗炎物質(zhì)NO能力較穩(wěn)定;第四部分:采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)技術(shù)對生脈注射液抗膿毒癥的作用機制進行了簡要分析,首先基于指紋圖譜的分析結(jié)果,其中9種有效成分經(jīng)Pubchem數(shù)據(jù)庫確證,在STITCH數(shù)據(jù)庫中獲取9種成分可能作用的靶點約62個,從HPO數(shù)據(jù)庫收集到符合要求的膿毒癥相關(guān)人體內(nèi)靶點有58個,通過STRING數(shù)據(jù)庫對生脈注射液活性成分作用靶標(biāo)與膿毒癥人體靶標(biāo)進行蛋白質(zhì)間相互作用分析,刪除無關(guān)靶標(biāo)后,利用Cytoscape v3.5.1軟件可視化展現(xiàn)藥物靶標(biāo)與疾病靶標(biāo)的相互作用關(guān)系,使用Network Analyzer插件分析該網(wǎng)絡(luò)中各個節(jié)點的網(wǎng)絡(luò)拓撲性質(zhì),獲得其中連接度、介度、緊密度中位數(shù)分別為:19、0.014、0.449,篩選均大于中位數(shù)的靶點按連接度排序取前20個,即為生脈注射液治療膿毒癥網(wǎng)絡(luò)中的關(guān)鍵靶點,主要包括:ABL1、CCND1、CDK1、CDK2、CDK6、CDKN1B、RB1、HSP90AA1、SMARCA4、RBL2、CTNNB1、MDM2、SP1、LRRK1、BTK、PIK3R1、TMPRSS11D、ACTG2、CD79A、RET等。KEGG代謝通路富集分析得到20條主要的生物信號通路,推測生脈注射液主要通過對 Pathways in cancer,Cell cycle,p53 signaling pathway 等通路的調(diào)節(jié)發(fā)揮協(xié)同作用,提示生脈注射液可能通過參與調(diào)節(jié)免疫、炎癥反應(yīng)、細胞凋亡等過程發(fā)揮治療膿毒癥的保護作用,經(jīng)GO生物學(xué)分析可知,生脈注射液有效成分在治療膿毒癥疾病過程中參與調(diào)控機體多種生物學(xué)過程,如細胞周期、能量代謝、細胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、轉(zhuǎn)錄調(diào)控及免疫系統(tǒng)發(fā)育等,提示其可能對膿毒癥引發(fā)全身性炎癥反應(yīng)、免疫失調(diào)進行回調(diào),對風(fēng)險極高的繼發(fā)性多器官功能障礙從能量代謝等角度產(chǎn)生保護作用,初步揭示了該藥抗膿毒癥藥效活性的多通路交互調(diào)控的作用特點。第五部分:利用尿液代謝組學(xué)技術(shù)探究生脈注射液抗膿毒癥的作用機制,采用經(jīng)典的的盲腸結(jié)扎穿孔法復(fù)制膿毒癥大鼠模型,進行尿液代謝組學(xué)分析。實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn),尿液代謝輪廓顯示生脈注射液組大鼠代謝分布趨近于空白組大鼠,證明生脈注射液對膿毒癥大鼠有良好的治療及回調(diào)作用,其中調(diào)節(jié)牛磺酸和亞�；撬岽x、精氨酸和脯氨酸代謝等可能是其治療膿毒癥的關(guān)鍵機制。
【圖文】：

．表１－３指紋圖譜精密度考察相似度評價結(jié)果逡逑Ｔａｂｌｅ邋１－３邋Ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ邋ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ邋ｒｅｓｕｌｔｓ邋ｏｆ邋ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔ邋ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ邋ｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ逡逑對照指紋逡逑ＳＩ邋Ｓ２邋Ｓ３邋Ｓ４邋Ｓ５邋Ｓ６逡逑圖譜逡逑５１邐１邐０．９９１邐０．９９４邐０．９９９邐０．９９３邐０．９９３邐０．９９７逡逑５２邐０．９９１邐１邐０．９９１邐０．９９３邐０．９８７邐０．９８６邐０．９９２逡逑５３邐０．９９４邐０．９９１邐１邐０．９９５邐０．９９６邐０．９９６邐０．９９８逡逑５４邐０．９９９邐０．９９３邐０．９９５邐１邐０．９９３邐０．９９３邐０．９９７逡逑５５邐０．９９３邐０．９８７邐０．９９６邐０．９９３邐１邐０．９９９邐０．９９８逡逑５６邐０．９９３邐０．９８６邐０．９９６邐０．９９３邐０．９９９邐１邐０．９９８逡逑對？昭指紋逡逑０．９９７邐０．９９２邐０．９９８邐０．９９７邐０．９９８邐０．９９８邐１逡逑圖譜

邐３０邋４３邐３５．邋ＳＩ逡逑圖１－２．精密度考察中生脈注射液ＵＰＬＣ指紋圖譜評價逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋１－２．邋ＵＰＬＣ邋ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔ邋ｏｆ邋Ｓｈｅｎｇｍａｉ邋ｉｎｊｅｃｔｉｏｎｓ邋ｉｎ邋ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ邋ｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ逡逑１４逡逑
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R285;R286.0

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本文編號：2682699