【摘要】：當(dāng)今,中藥藥理活性研究成為學(xué)者研究的重點(diǎn)項(xiàng)目之一。但由于中藥成分復(fù)雜、體內(nèi)活動(dòng)的不確定性,使得人們對(duì)中藥的研究變得非常困難。本文利用多種光譜技術(shù)、伏安法及分子對(duì)接技術(shù)研究了幾種中藥有效成分與生物大分子(血清白蛋白和DNA)的相互作用,對(duì)中藥有效成分在生物體內(nèi)的吸收、分布及代謝研究提供幫助。利用多光譜技術(shù)、分子對(duì)接技術(shù)及循環(huán)伏安法研究了漆黃素與牛血清白蛋白(BSA)和人血清白蛋白(HSA)的相互作用。結(jié)果表明,漆黃素對(duì)BSA/HSA的猝滅過程是靜態(tài)猝滅。計(jì)算得到不同溫度(293 K、303 K和313 K)下的結(jié)合常數(shù)與結(jié)合位點(diǎn)數(shù)。熱力學(xué)參數(shù)結(jié)果表明漆黃素與BSA/HSA的相互作用主要是通過靜電引力結(jié)合的。利用位點(diǎn)探針研究了漆黃素在BSA/HSA上的結(jié)合位點(diǎn),表明了漆黃素在兩種蛋白的sub-domain IIIA結(jié)合,利用分子對(duì)接技術(shù)進(jìn)一步證明了這一結(jié)論。共存金屬離子(K~+、Ca~(2+)、Cu~(2+)、Zn~(2+)和Fe~(3+))對(duì)漆黃素與BSA/HSA的結(jié)合基本沒有影響。同步熒光光譜、圓二色光譜(CD)和傅里葉變換紅外光譜法(FT-IR)表明漆黃素的加入改變了BSA/HSA的二級(jí)結(jié)構(gòu)。根據(jù)F?rster非輻射能量轉(zhuǎn)移理論(FRET),計(jì)算得到漆黃素與BSA或HSA的結(jié)合距離分別為2.94和4.68 nm。循環(huán)伏安法同樣表明了漆黃素與兩種蛋白發(fā)生了相互作用。研究了三種黃酮類中藥有效成分(圣草次苷、光甘草定和蔓荊子黃素)與BSA的相互作用。熒光光譜法和時(shí)間分辨熒光光譜法表明了三種中藥有效成分對(duì)BSA的猝滅過程是靜態(tài)猝滅。在291 K時(shí),三種中藥有效成分與BSA的結(jié)合常數(shù)分別為3.59×10~4(圣草次苷)、8.04×10~4(光甘草定)和9.92×10~4(蔓荊子黃素)L mol~(-1)。熱力學(xué)參數(shù)結(jié)果表明,靜電引力是三種中藥有效成分與BSA結(jié)合的主要作用力。位點(diǎn)探針和分子對(duì)接技術(shù)研究結(jié)果表明圣草次苷、光甘草定和蔓荊子黃素結(jié)合在BSA的sub-domain IIA。此外,對(duì)三種中藥有效成分對(duì)BSA的相互競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合進(jìn)行探究,發(fā)現(xiàn)由于三種中藥均結(jié)合在BSA的同一位點(diǎn)上,當(dāng)一種中藥與其它中藥共存時(shí),它會(huì)受到其它中藥的影響,從而導(dǎo)致其與BSA的結(jié)合作用減弱。同步熒光光譜法表明三種中藥有效成分的加入改變了BSA的微環(huán)境。FT-IR和CD表明三種中藥有效成分與BSA的結(jié)合改變了BSA的二級(jí)結(jié)構(gòu)。討論了幾種金屬離子對(duì)體系結(jié)合的影響。計(jì)算了三種中藥有效成分與BSA的結(jié)合距離,表明了三種中藥有效成分與BSA發(fā)生靜態(tài)猝滅作用的同時(shí)伴隨著非輻射能量轉(zhuǎn)移。采用光譜法、粘度法及循環(huán)伏安法研究了漆黃素與DNA的相互作用。熒光光譜和時(shí)間分辨熒光光譜結(jié)果表明DNA對(duì)漆黃素的猝滅過程是靜態(tài)猝滅。計(jì)算得到不同溫度下的結(jié)合常數(shù)。熱力學(xué)參數(shù)結(jié)果表明范德華力或氫鍵作用是二者間的主要結(jié)合作用力。引入漆黃素后,DNA的粘度顯著增加,DNA的熔解溫度升高8°C;隨著漆黃素濃度的增加,DNA的圓二色光譜正峰降低,負(fù)峰升高;單鏈DNA與漆黃素相互作用的結(jié)合能力更強(qiáng);循環(huán)伏安法表明漆黃素在加入DNA后峰電位正移且峰電流降低;以上實(shí)驗(yàn)均表明了漆黃素與DNA結(jié)合模式為嵌插結(jié)合,分子對(duì)接實(shí)驗(yàn)更加證明了二者間是以嵌插方式相互結(jié)合。利用多種光譜技術(shù)、粘度法以及分子對(duì)接研究了兩種萜類中藥有效成分(橄欖苦苷和羽扇豆醇)與DNA的相互作用。熒光光譜實(shí)驗(yàn)和時(shí)間分辨熒光光譜實(shí)驗(yàn)表明了DNA對(duì)橄欖苦苷/羽扇豆醇的猝滅過程是靜態(tài)猝滅。計(jì)算得到291 K下的結(jié)合常數(shù)分別為4.53×10~3和9.98×10~3 L mol~(-1)。通過范德霍夫方程計(jì)算得到熵變和焓變,結(jié)果表明橄欖苦苷/羽扇豆醇與DNA的主要結(jié)合作用力為靜電引力。粘度法、熔解溫度法、離子強(qiáng)度實(shí)驗(yàn)、單雙鏈DNA對(duì)比法、圓二色光譜法、紫外光譜法和分子對(duì)接技術(shù)均表明橄欖苦苷/羽扇豆醇與DNA的結(jié)合模式為嵌插結(jié)合。
【圖文】：

阻止藥物的快速代謝，延長(zhǎng)藥物在人體中的作用時(shí)間[16]。因?yàn)檫@個(gè)過程是體內(nèi)進(jìn)行的，在作用機(jī)制上無法判斷。因此在體外模擬人體生理環(huán)境，探究中藥有效成分與生物大分子的相互作用具有重大意義。1.2 中藥有效成分與生物大分子相互作用的研究方法生物大分子是生物體的基礎(chǔ)物質(zhì)，包括人體細(xì)胞內(nèi)存在的蛋白質(zhì)、核酸、多糖等大分子。它們幾乎參與了生物體所有的生理活動(dòng)。因此，研究中藥有效成分與生物大分子的相互作用成為當(dāng)今社會(huì)最熱門的課題之一。1.2.1 血清白蛋白的概述

時(shí)兩股鏈間距為 2 nm，，剛好容納兩個(gè)堿基對(duì)，但是 A=T 和 C≡G 互相配對(duì)。DNA 的主鏈結(jié)構(gòu)是磷該模型的構(gòu)建對(duì)近代科研工作具有重要的指導(dǎo)意等分子基礎(chǔ)，對(duì)生物體的生長(zhǎng)及代謝起到至關(guān)重
【學(xué)位授予單位】：長(zhǎng)春師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：O657.3;R285

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本文編號(hào)：2682718