【摘要】：目的:建立一種富集姜辣素部位的工藝。觀察生姜、干姜、炮姜三種姜的炮制品姜辣素部位對脾胃虛寒模型大鼠的溫中作用。在藥效學(xué)基礎(chǔ)上研究三種姜的炮制品姜辣素部位在脾胃虛寒模型大鼠藥物代謝情況以及組織分布與歸經(jīng)的關(guān)系。方法:①以姜辣素含量為指標(biāo),通過考察最大上樣量,最佳上樣濃度,洗脫溶劑濃度,洗脫劑的體積,洗脫流速等參數(shù)對D-101大孔吸附樹脂分離純化姜辣素工藝進(jìn)行篩選。確定姜辣素的最佳分離純化工藝。②姜辣素部位對脾胃虛寒模型大鼠的溫中作用:SPF級SD雄性大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)一周,隨機(jī)分為正常組、模型組、陽性組、生姜姜辣素高(200mg·kg-1)、低(100mg·kg-1)劑量組,干姜姜辣素高(400mg·kg-1)、低(200mg·kg-1)劑量組,炮姜姜辣素高(400mg·kg-1)、低(200mg·kg-1)劑量組,共9組,每組10只。除正常組之外,其余組均灌胃給4℃米醋1mL·100g-1(總酸度≥4g/100mL)連續(xù)10d制備大鼠脾胃虛寒模型,造模第五天下午開始給藥,陽性組灌胃附子理中丸混懸液6.0g · kg-1,其余各給藥組灌胃相應(yīng)劑量的姜辣素混懸液。造模給藥期間觀察大鼠外觀及行為變化,并比較大鼠第二、四、六、八、十天的進(jìn)食量、飲水量、體重變化值,臟器系數(shù)、胃排空率和血清中胃泌素、胃動素測定值,測得數(shù)據(jù)用SPSS22.0軟件處理,評價炮姜對脾胃虛寒大鼠的溫中作用。③姜辣素部位在脾胃虛寒模型大鼠的藥物代謝;SPF級SD雄性大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)一周,隨機(jī)分為生姜、干姜、炮姜姜辣素高劑量組大鼠。于造模給藥后第 11 天灌胃給藥后 5min、10min、20min、30min、40min、60min、90min、120min、180min、240min、360min、480min 眼眶靜脈叢取血,用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(UPLC-MS/MS)測得各時間點(diǎn)血藥濃度,用DAS軟件處理數(shù)據(jù)得藥代動力學(xué)參數(shù),并分析各參數(shù)意義,研究其藥物代謝過程。④姜辣素部位在脾胃虛寒模型大鼠組織分布:生姜、干姜、炮姜姜辣素高劑量組大鼠于給藥后 5min、10min、20min、30min、40min、60min、90min、120min、180min、240min、360min、480min 時腹主動脈取血,立即采集心、肝、脾、肺、腎、胃、大腸、小腸等組織,聯(lián)合應(yīng)用UPLC-MS檢測方法對姜辣素部位在大鼠各組織UPLC-MS圖譜比較分析,確定有效物質(zhì)在大鼠各組織中的含量。檢測數(shù)據(jù)用DAS2.0軟件處理得到相關(guān)藥動學(xué)參數(shù),通過比較各個指標(biāo)性成分在各高劑量組大鼠各臟器組織中的最早檢測時間、富集濃度、維持時間等探討姜辣素部位在脾胃虛寒情況下大鼠體內(nèi)的組織分布和歸經(jīng)情況,并比較生姜、干姜、炮姜在脾胃虛寒大鼠組織分布和歸經(jīng)的差異。結(jié)果:①姜辣素富集工藝的最佳條件是最佳上樣濃度為0.Sg·mL-1,上樣量為4倍量柱體積(4BV),以2BV·h-1速率上樣,靜置0.5h后,依次用3BV的去離子水和50%乙醇除雜,以2s·d-1的速率用70%乙醇和95%乙醇進(jìn)行洗脫,洗脫液濃縮,冷凍干燥后得黑色油脂狀半固體物質(zhì)。紫外分光光度計(jì)測得生姜含量為82.76%,得率0.33%,干姜含量為87.07%,得率為4.52%,炮姜姜辣素含量為85.87%,得率為4.31%。②在姜辣素部位對脾胃虛寒模型大鼠的溫中作用中,發(fā)現(xiàn)與模型組比較,生姜、干姜和炮姜的高、低劑量的姜辣素混懸液顯著改善脾胃虛寒模型大鼠的外觀狀態(tài);提高進(jìn)食量、飲水量;顯著增加脾胃虛寒模型體重值;提高大鼠胃排空率;顯著增加肝臟系數(shù)、脾臟系數(shù)和胸腺系數(shù);顯著增加血清中GAS、MTL測定值(P0.05或P0.01)。說明姜辣素部位具有溫中的功效。③被測組分峰和內(nèi)標(biāo)峰僅在給藥后血漿樣品中可檢測到,在空白血漿樣品中未檢出,專屬性好。大鼠血漿中6-姜酚濃度在1.95-499ng·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(R2 = 0.9970);8-姜酚濃度在1.853-250ng·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(R2 = 0.9987);10姜酚濃度在7.81-247.3 ng·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(R2 = 0.9966);姜酮濃度在3.926-251.25 ng·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(R2 = 0.9985)。其日內(nèi)精密度(相對標(biāo)準(zhǔn)偏差,RSD)均分別小于15.0%,準(zhǔn)確度(相對誤差,RE)在1.07%—15.21%之間,于4℃條件下放置24h和反復(fù)凍融三次的穩(wěn)定性良好,符合生物樣品分析指導(dǎo)原則的要求。脾胃虛寒模型大鼠在灌胃給藥不同姜辣素部位后,比較6-姜酚、8-姜酚、10-姜酚和姜酮的血漿內(nèi)血藥濃度曲線下面積即AUCO-t,生姜姜辣素AUCO-t依次 6-姜酚姜酮8-姜酚;干姜辣素AUC0-t依次為姜酮8-姜酚6-姜酚;炮姜姜辣素AUCO-t依次為8-姜酚姜酮6-姜酚。④脾胃虛寒模型大鼠體內(nèi)分布結(jié)果顯示:在脾胃虛寒模型大鼠中,比較生姜姜辣素部位6-姜酚藥物動力學(xué)參數(shù)在不同組織中AUCO-t的大小為胃小腸大腸腎肺肝脾心;8-姜酚在不同組織中AUCO-t的大小為胃大腸小腸肺腎心脾肝;10-姜酚在不同組織中AUC0-t的大小為胃大腸小腸肺心=肝=脾=腎;姜酮在不同組織中AUCO-t的大小為胃大腸小腸肺=腎肝=心=腎。在脾胃虛寒模型大鼠中,比較干姜姜辣素部位6-姜酚在不同組織中AUCO-t的大小為胃肝大腸=腎=脾小腸心;8-姜酚在不同組織中AUCO-t的大小為胃大腸小腸=肺=肝=脾心腎;10-姜酚在不同組織中AUCO-t的大小為胃小腸大腸肺=肝心腎脾;姜酮在不同組織中AUC0-t的大小為胃小腸大腸肝肺腎心=脾。在脾胃虛寒模型大鼠中,比較炮姜姜辣素部位6-姜酚在不同組織中AUC0-t的大小為胃小腸大腸肝=脾=肺心腎;8-姜酚胃小腸大腸=心=脾=肝=肺=腎;10-姜酚在不同組織中AUCO-t的大小為胃小腸大腸肝肺=脾心=腎;姜酮在不同組織中AUCO-t的大小為胃小腸大腸肝=肺=脾心=腎。結(jié)論:藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)顯示,生姜、干姜、炮姜姜辣素部位具有顯著地溫中作用,姜辣素是姜溫中功效的基礎(chǔ)。通過測定血漿中6-姜酚、8-姜酚、10-姜酚和姜酮的血漿藥物濃度通過脾胃虛寒模型大鼠給藥后血藥濃度參數(shù)的比較,首次考察了其在大鼠體內(nèi)的藥動學(xué)行為。充實(shí)了 6-姜酚、8-姜酚、10-姜酚和姜酮藥代動力學(xué)方面的資料,為進(jìn)一步臨床藥代動力學(xué)研究提供了參考依據(jù)。在脾胃虛寒模型大鼠各劑量組給藥后各臟腑組織中其四種成分可不同程度的分布在心、肝、脾、肺、腎、胃、大腸、小腸等臟器組織中,通過綜合考慮其在各臟器組織中的最早檢測時間、維持時間和富集濃度等得出,姜辣素在脾胃虛寒組大鼠組織分布主要集中在胃、小腸、大腸、肺組織中。這種分布與姜?dú)w經(jīng)的傳統(tǒng)認(rèn)識相同。
【圖文】：

并定容至 25mL，即得 0.2356mg·mL- 1的 6-姜酚標(biāo)準(zhǔn)儲備液。2.2.2 供試品溶液的制備精確稱取“2.1”項(xiàng)下的干浸膏 10mg 置于 25mL 容量瓶中，，加甲醇聲使其完全溶解后，定容至刻度線，混合均勻，即得。2.3 方法學(xué)考察2.3.1 樣品檢測波長的確定精 密 吸 取 “2.2.1”項(xiàng) 下 的 6-姜 酚 儲 備 液 和 “2.2.2”項(xiàng) 下 的 供 試 品 溶 2.0 mL 放 置 于 10mL 的 容 量 瓶 內(nèi) ， 甲 醇 定 容 。 用 紫 外 分 光 光 度 計(jì) 190nm~500nm 進(jìn)行全波長掃描，比較 6-姜酚和樣品的全波長掃描圖分確定檢測波長為 280nm。如圖 1-2。

2.0 mL 放 置 于 10mL 的 容 量 瓶 內(nèi) ， 甲 醇 定 容 。 用 紫 外 分 光 光 度 計(jì) 在190nm~500nm 進(jìn)行全波長掃描，比較 6-姜酚和樣品的全波長掃描圖分析確定檢測波長為 280nm。如圖 1-2。圖 1 6-姜酚全波長掃描圖
【學(xué)位授予單位】：河南中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2680600