【摘要】：背景:膝骨性關(guān)節(jié)炎(Knee Osteoarthritis,KOA)是以軟骨分解、破壞,骨組織重建、增生為病理改變,以疼痛、關(guān)節(jié)活動受限為主要臨床表現(xiàn)的多發(fā)骨科疾病。該病在中老年人群中普遍存在,使患者飽受因反復(fù)疼痛及對致殘的恐慌而帶來的巨大精神壓力。有研究證實膝關(guān)節(jié)滑膜炎是膝骨關(guān)節(jié)炎發(fā)病及發(fā)展的關(guān)鍵推動因素。軟骨降解的碎片引起滑膜的炎癥反應(yīng),炎癥滑膜又進一步釋放炎性遞質(zhì)、細胞因子及蛋白酶等,反作用于軟骨,加劇軟骨破壞。若能早期、有效的減輕滑膜的炎性反應(yīng),減少對軟骨的破壞,則可以顯著減緩膝骨關(guān)節(jié)炎的發(fā)展。中藥外治法可以將中草藥中的有效成分通過透皮吸收而作用于患處,具有方便、安全、經(jīng)濟適用等優(yōu)點。消瘀接骨散是國家級名老中醫(yī)丁鍔教授創(chuàng)立的外用方藥,在安徽中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院骨傷科中廣泛應(yīng)用于膝骨關(guān)節(jié)炎的治療,可以有效緩解膝骨關(guān)節(jié)炎早期出現(xiàn)的關(guān)節(jié)疼痛、腫脹,臨床療效顯著,但目前尚不清楚其作用機制。目的:通過建立大鼠早期膝骨關(guān)節(jié)炎模型,觀察外敷消瘀接骨散對膝骨關(guān)節(jié)炎滑膜組織中基質(zhì)金屬蛋白酶1(Matrix Metalloproteinase-1,MMP-1)、基質(zhì)金屬蛋白酶3(Matrix Metalloproteinase-3,MMP-3)的表達影響,以及觀察膝關(guān)節(jié)滑膜組織在治療前后的病理改變,探究消瘀接骨散治療膝骨關(guān)節(jié)炎的具體作用途徑和方式。方法:選取3月齡健康雄性SD大鼠75只,體重250~300g,依照隨機數(shù)字表法各隨機抽取14只,分為正常組和假手術(shù)組,分籠飼養(yǎng);其余47只進行手術(shù)造模,建立膝骨關(guān)節(jié)炎模型。假手術(shù)組僅為驗證手術(shù)創(chuàng)傷因素是否影響實驗結(jié)果,術(shù)后一周開始,每日定時驅(qū)趕所有組大鼠奔跑,強迫活動右下肢,每次30min,持續(xù)4周。4周后,在手術(shù)造模大鼠中隨機抽取5只處死,檢驗造模是否成功。造模成功后,將手術(shù)造模組42只大鼠隨機分為3組,即模型組、消瘀接骨散組(中藥組)、扶他林組(西藥組),每組14只,每組實驗動物按照實驗設(shè)計藥物劑量給藥。給藥4周后,處死所有動物,提取標(biāo)本制作蘇木精-伊紅染色病理切片,進行光鏡下觀察。同時分別采用實時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Realtime fluorescence quantitative Polymerase Chain Reaction,RTFQ PCR),蛋白質(zhì)印記法(Western Blotting,WB)和酶聯(lián)免疫吸附法(Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay,ELISA)檢測滑膜組織中MMP-1和MMP-3的相對表達量,并進行統(tǒng)計學(xué)分析。結(jié)果:在一個療程治療結(jié)束后,模型組大鼠滑膜組織中MMP-1和MMP-3的m RNA含量高于其余各組(P0.05),MMP-1消瘀散組和扶他林組之間比較均無明顯差異(P0.05),MMP-3消瘀散組表達量略低于扶他林組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);蛋白質(zhì)印跡法分析則表明MMP-1和MMP-3在模型組大鼠滑膜組織中大量表達,與消瘀散組和扶他林組分別比較,差異都存在統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),消瘀散與扶他林組之間比較,無顯著差別(P0.05);酶聯(lián)免疫吸附法分析指出MMP-1和MMP-3兩種蛋白在模型組中被大量分泌至大鼠滑膜組織中,與消瘀散組和扶他林組分別比較,差異存在統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),MMP-1消瘀散組和扶他林組比較,無顯著性差異(P0.05),MMP-3消瘀散組表達量略低于扶他林組,差異存在統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);滑膜組織病理切片觀察發(fā)現(xiàn),模型組滑膜有明顯增生并伴隨炎性細胞大量浸潤,周圍血管顯著增生,與模型組比較消瘀散組滑膜增生相對較少,少量炎性細胞浸潤并伴有少量血管增生,扶他林組相比模型組滑膜增生較少,血管增生和炎性細胞浸潤均與消瘀散組大致相當(dāng)。結(jié)論:此次實驗研究發(fā)現(xiàn)消瘀接骨散可以有效減輕大鼠早期膝骨關(guān)節(jié)炎模型滑膜炎癥的病理改變,并能顯著減少滑膜組織中參與軟骨基質(zhì)破壞與降解的兩種關(guān)鍵蛋白酶MMP-1和MMP-3的m RNA表達量,蛋白合成及分泌量。中藥與西藥抑制MMP-1在KOA滑膜組織表達的作用相同,在抑制MMP-3在KOA滑膜組織表達的作用方面中藥組優(yōu)于西藥組。其作用機制可能是消瘀接骨散能有效緩解滑膜炎癥,抑制MMP-1和MMP-3的表達,減少關(guān)節(jié)軟骨的降解與破壞,從而減輕膝骨關(guān)節(jié)炎的癥狀及疾病進展。
【圖文】：

3 結(jié)果.1 造模結(jié)果及過程中大鼠行為表現(xiàn)造模前觀察所有大鼠，均無后膝關(guān)節(jié)的異常表現(xiàn)，飲食及活動狀態(tài)良好。按照實驗設(shè)行造模，在手術(shù)方式造模的 47 只大鼠中，有 2 只因麻藥過量而死亡，剩余 45 只均在成功后 1 小時左右蘇醒，造模后 2~3 天逐漸恢復(fù)正常活動，術(shù)后 7 天切口愈合良好，遂予以縫線；術(shù)后 1 周開始每日驅(qū)趕所有組動物奔跑 30min，持續(xù) 4 周，4 周后所有大鼠精神狀良好，，造模后的大鼠出現(xiàn)右后膝關(guān)節(jié)活動度差，大鼠跛行等，在行手術(shù)的大鼠中隨機抽取，處死后切開關(guān)節(jié)囊發(fā)現(xiàn)關(guān)節(jié)囊略有增生，關(guān)節(jié)滑液變多且呈淡黃色，軟骨表面略顯粗部分潰瘍和缺損，軟骨邊緣骨贅形成不明顯，取患側(cè)關(guān)節(jié)滑膜制作 HE 病理切片觀察見滑織增生明顯，細胞間隙及滑膜外層出現(xiàn)中量炎細胞浸潤并見大量血管增生（圖 1-4），符起 KOA 樣改變，證實造模成功。

3 結(jié)果.1 造模結(jié)果及過程中大鼠行為表現(xiàn)造模前觀察所有大鼠，均無后膝關(guān)節(jié)的異常表現(xiàn)，飲食及活動狀態(tài)良好。按照實驗設(shè)行造模，在手術(shù)方式造模的 47 只大鼠中，有 2 只因麻藥過量而死亡，剩余 45 只均在成功后 1 小時左右蘇醒，造模后 2~3 天逐漸恢復(fù)正�；顒樱g(shù)后 7 天切口愈合良好，遂予以縫線；術(shù)后 1 周開始每日驅(qū)趕所有組動物奔跑 30min，持續(xù) 4 周，4 周后所有大鼠精神狀良好，造模后的大鼠出現(xiàn)右后膝關(guān)節(jié)活動度差，大鼠跛行等，在行手術(shù)的大鼠中隨機抽取，處死后切開關(guān)節(jié)囊發(fā)現(xiàn)關(guān)節(jié)囊略有增生，關(guān)節(jié)滑液變多且呈淡黃色，軟骨表面略顯粗部分潰瘍和缺損，軟骨邊緣骨贅形成不明顯，取患側(cè)關(guān)節(jié)滑膜制作 HE 病理切片觀察見滑織增生明顯，細胞間隙及滑膜外層出現(xiàn)中量炎細胞浸潤并見大量血管增生（圖 1-4），符起 KOA 樣改變，證實造模成功。
【學(xué)位授予單位】：安徽中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5;R-332

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本文編號：2680641