【摘要】：山竹果皮在泰國(guó)、緬甸、印度等東南亞國(guó)家被作為一種傳統(tǒng)藥物廣泛用于治療瘧疾、腹瀉、炎癥、白血病和敗血癥。α-倒捻子素(α-mangostin,α-MG)是山竹果皮中的主要活性成分,具有多種藥理活性,如抗腫瘤、抗菌、抗癌、抗炎等。結(jié)合α-MG已報(bào)道的生物活性,急性肝損傷和抑郁的發(fā)病機(jī)理和病理生理學(xué)特征,提出α-MG具有抗急性肝損傷和抗抑郁活性假設(shè)。本文以α-MG為研究對(duì)象,探索其抗急性肝損傷和抗抑郁藥理活性及作用機(jī)制。主要研究?jī)?nèi)容如下:1、α-MG的抗急性肝損傷活性及作用機(jī)制通過建立3種不同機(jī)理的急性肝損傷模型來探索α-MG的肝保護(hù)活性及作用機(jī)制。(1)APAP誘導(dǎo)藥物性急性肝損傷模型:過量的APAP經(jīng)細(xì)胞色素P450(CYP450)氧化生成有害代謝產(chǎn)物N-乙酰對(duì)苯醌亞胺(NAPQI),NAPQI與GSH結(jié)合生成硫醇尿酸或半胱氨酸衍生物而耗竭肝細(xì)胞內(nèi)GSH,從而導(dǎo)致氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)和線粒體功能障礙,進(jìn)而導(dǎo)致急性肝損傷。ICR小鼠連續(xù)灌胃給藥α-MG(12.5和25 mg/kg)7天,并在最后一天給予α-MG 1h后腹腔注射APAP(300 mg/kg)。在APAP給藥24h后,收集肝臟和血清以評(píng)估肝毒性。血清用于檢測(cè)血清谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)水平以及細(xì)胞因子腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細(xì)胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白細(xì)胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)水平。肝臟組織用于檢測(cè)肝臟谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)和丙二醛(MDA)水平。同時(shí)通過檢測(cè)肝組織切片染色、western-blot、RT-PCR等結(jié)果來分析α-MG抗藥物性肝損傷作用機(jī)制。結(jié)果表明α-MG能有效降低血清中AST、ALT、TNF-α、IL-1β和IL-6水平以及提高了肝組織中GSH、SOD和CAT活力,有效降低MDA含量。肝組織病理學(xué)觀察表明α-MG預(yù)處理顯著抑制APAP誘導(dǎo)的肝細(xì)胞壞死,炎性細(xì)胞浸潤(rùn)和充血。Western-blot和RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示,α-MG預(yù)處理能有效抑制APAP誘導(dǎo)的ERK、JNK和p38 MAPK的磷酸化,減弱了IκBα的磷酸化和NF-κBp65的轉(zhuǎn)位。同時(shí),α-MG下調(diào)了TNF-α和IL-1βmRNA的水平。綜上,α-MG對(duì)由APAP誘導(dǎo)的急性肝損傷有明顯的肝保護(hù)作用,通過抑制NF-κB和MAPK信號(hào)通路傳導(dǎo)來防止APAP誘導(dǎo)的急性肝損傷。其作用機(jī)制與其較強(qiáng)的抗氧化和抗炎能力有關(guān)。(2)LPS/D-GalN誘導(dǎo)爆發(fā)性肝損傷模型:LPS直接激活存在肝星狀細(xì)胞(HSCs)表面的TLR4,導(dǎo)致炎性細(xì)胞因子的釋放,引起肝細(xì)胞凋亡和壞死;D-GalN消耗尿苷三磷酸酶(UTP),從而抑制肝臟中相關(guān)RNA和蛋白質(zhì)的合成;二者共同作用導(dǎo)致肝臟炎癥反應(yīng)和肝細(xì)胞彌漫性壞死,進(jìn)而導(dǎo)致爆發(fā)性肝損傷。ICR小鼠通過灌胃給藥連續(xù)給予α-MG(12.5和25 mg/kg)7天,并在最后一天給予α-MG 1h后腹腔內(nèi)注射LPS(50μg/kg)和D-GalN(800 mg/kg)。在LPS/D-GalN給藥8h后獲得小鼠血清和肝臟。根據(jù)試劑盒說明書測(cè)定血清和肝組織中相關(guān)指標(biāo)。同時(shí)通過檢測(cè)肝組織切片染色、western-blot、RT-PCR等結(jié)果來分析α-MG抗爆發(fā)性肝損傷的機(jī)制。結(jié)果表明α-MG降低了血清中ALT、AST、TNF-α、IL-1β和IL-6水平以及提高了肝組織中GSH、SOD和CAT的活力,有效降低MDA含量。同時(shí),α-MG能夠減輕LPS/D-GalN誘導(dǎo)的肝臟組織病理?yè)p傷。Western-blot檢測(cè)結(jié)果顯示α-MG抑制LPS/D-GalN誘導(dǎo)的toll樣受體4(TLR4)表達(dá)和NF-κB活化以及上調(diào)了Nrf2和血紅素加氧酶-1(HO-1)的表達(dá)。綜上所述,α-MG對(duì)由LPS/D-GalN誘導(dǎo)的急性肝損傷有明顯的肝保護(hù)作用。α-MG通過激活Nrf2誘導(dǎo)抗氧化防御和抑制TLR4信號(hào)傳導(dǎo)途徑來防止LPS/D-GalN誘導(dǎo)的肝衰竭。(3)CCl_4誘導(dǎo)化學(xué)性急性肝損傷模型:CYP450將CCl_4轉(zhuǎn)化為有毒性的代謝產(chǎn)物,在肝細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中產(chǎn)生ROS,損傷DNA和生物膜,引發(fā)脂質(zhì)過氧化損傷,誘導(dǎo)肝細(xì)胞的基因表達(dá)發(fā)生改變,肝臟組織細(xì)胞還會(huì)分泌大量的炎癥因子,導(dǎo)致炎癥反應(yīng),進(jìn)而導(dǎo)致急性肝損傷。ICR小鼠通過灌胃給藥連續(xù)給予α-MG(12.5和25 mg/kg)7天,并在最后一天給予α-MG 1h后腹腔內(nèi)注射0.2%CCl_4。CCl_4造模24h后收集肝臟和血清備用。根據(jù)試劑盒說明書測(cè)定血清和肝組織中相關(guān)指標(biāo)。同時(shí)通過肝組織切片染色、Western-blot、RT-PCR等結(jié)果來分析α-MG抗化學(xué)性肝損傷的機(jī)制。結(jié)果表明與模型組相比,α-MG給藥組沒有降低AST、ALT的水平,表明α-MG不能緩解由CCl_4誘導(dǎo)的肝損傷。2、α-MG抗抑郁活性和作用機(jī)理本研究首先采用經(jīng)典行為學(xué)絕望模型懸尾試驗(yàn)(TST)和強(qiáng)迫游泳試驗(yàn)(FST)來探究α-MG的抗抑郁活性,篩選出有效劑量和亞有效劑量。為了排除行為絕望測(cè)試中的假陽(yáng)性結(jié)果,同時(shí)測(cè)試了α-MG對(duì)小鼠自主活動(dòng)的影響。后續(xù)利用聯(lián)合給藥實(shí)驗(yàn)測(cè)定阻斷劑和激動(dòng)劑對(duì)α-MG抗抑郁活性的影響,以及各中樞神經(jīng)遞質(zhì)在α-MG抗抑郁活性的作用。結(jié)果顯示α-MG具有較強(qiáng)的抗抑郁活性,α-MG抗抑郁有效劑量為5 mg/kg,亞有效劑量為1mg/kg。對(duì)α-MG而言,小鼠在TST中的不動(dòng)時(shí)間變化比在FST中更敏感,表明TST比FST更有利于α-MG的抗抑郁活性的篩選。因此,我們選擇TST開展后續(xù)實(shí)驗(yàn)。聯(lián)合給藥實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:α-MG(1 mg/kg)與抗抑郁藥氟西汀、噻奈普汀和瑞波西汀聯(lián)合給藥后,顯著降低了不動(dòng)時(shí)間,表現(xiàn)出協(xié)同作用。聯(lián)合阻斷劑和激動(dòng)劑的結(jié)果顯示用荷包牡丹堿(一種競(jìng)爭(zhēng)性GABA拮抗劑),對(duì)氯苯丙氨酸(一種5-HT合成抑制劑)和氟哌啶醇(一種非選擇性D_2受體拮抗劑)預(yù)處理顯著逆轉(zhuǎn)了α-MG(5 mg/kg)的抗抑郁作用,并改變腦內(nèi)相應(yīng)中樞神經(jīng)遞質(zhì)水平,這表明α-MG的抗抑郁作用可能由GABA能,5-HT能和多巴胺能系統(tǒng)介導(dǎo)。
【圖文】：

圖 1.1 氧雜蒽酮和 α-MG 結(jié)構(gòu)式Fig 1.1 Structure of xanthone and α-MG取分離方法于 α-MG 的提取分離方法很多，最常用的是溶劑提取法，目人[33]以無水乙醇為夾帶劑，利用超臨界萃取技術(shù)和快速制 90%的 α-MG，此方法對(duì)于 α-MG 的提取分離和鑒定簡(jiǎn)單、人[34]以 80%乙醇為溶劑，利用閃式提取法提取出粗提物。然后。結(jié)果發(fā)現(xiàn) α-MG 質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 6.72%，，此方法提取率比較高山竹果皮粉末按一定料液比加入乙醇溶解，利用超聲法進(jìn)行最佳試驗(yàn)方案。超聲提取是一種純物理方法，提取效果明顯，此方法提取率高、耗能少、操作簡(jiǎn)便。理活性研究廣泛的藥理活性，如用作乳腺癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、皮膚癌具有抗炎、抗菌、抗瘧、抗肥胖等作用。此外，α-MG 具有維

1.1.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果1.1.3.1 α-MG 純度檢測(cè)結(jié)果α-MG 純度檢測(cè)結(jié)果如表 1-2 和圖 1.1 所示，雜質(zhì)峰峰面積與對(duì)照品峰面積相比，經(jīng)過計(jì)算，雜質(zhì)峰所占峰面積為 1.32 %，即 α-MG 的純度為 98.68%。表 1-2 α-MG 及其雜質(zhì)的峰面積Table 1-2 Peak area of α-MG and its impurities組別 時(shí)間 峰面積A-對(duì)照品 11.129 2837634B-供試品 5.267 3432876.842 15420488.697 8264879.19611.073423377985743116.247 627351
【學(xué)位授予單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R285.5

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本文編號(hào)：2679467