【摘要】：目的:探討楊桃根中2-十二烷基-6-甲氧基-2,5-二烯-1,4-環(huán)己二酮(DMDD)抗棕櫚酸(PA)誘導(dǎo)MIN6細(xì)胞功能障礙的作用,以及對(duì)TLR4/My D88/NF-κB信號(hào)通路的調(diào)控作用。方法:MIN6細(xì)胞分為6組:正常對(duì)照組(NC組)、模型組(PA組)、陽(yáng)性藥組(TAK-242組)、DMDD低、中、高劑量組(DMDDL、DMDDM、和DMDDH組)。1、DMDD對(duì)MIN6細(xì)胞胰島素水平、炎癥因子水平、凋亡的影響:(1)DMDD對(duì)MIN6細(xì)胞胰島素水平的影響:采用CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞活性;酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(ELISA法)檢測(cè)細(xì)胞胰島素水平。(2)DMDD對(duì)MIN6細(xì)胞炎癥因子表達(dá)的影響:ELISA法檢測(cè)白細(xì)胞介素-6(IL-6),腫瘤壞死因子-α(TNF-α)和單核細(xì)胞趨化因子-1(MCP-1)含量水平;實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)IL-6、TNF-α、MCP-1 m RNA的表達(dá);(3)DMDD對(duì)MIN6細(xì)胞凋亡的影響:Annexin-V-FITC/Pl凋亡試劑盒、Hoechst33342/PI熒光雙染試劑盒檢測(cè)細(xì)胞凋亡水平;透射電子顯微鏡觀察細(xì)胞凋亡形態(tài);實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)Caspase-3、Bax、Bcl-2 m RNA的表達(dá);western blot法檢測(cè)Caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白的表達(dá)。2、DMDD對(duì)MIN6細(xì)胞TLR4/My D88/NF-κB信號(hào)通路的影響:實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)TLR4、My D88、NF-κB p65 m RNA的表達(dá);western blot法檢測(cè)TLR4、My D88、細(xì)胞核磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)、細(xì)胞漿磷酸化IκBα(p-IκBα)蛋白的表達(dá)。結(jié)果:1、DMDD對(duì)MIN6細(xì)胞胰島素水平、炎癥因子水平、凋亡的影響:(1)DMDD對(duì)MIN6細(xì)胞胰島素水平的影響:與PA組相比,DMDDM組、DMDDH組、TAK-242組中分泌至細(xì)胞外的胰島素含量、細(xì)胞內(nèi)的胰島素含量及細(xì)胞內(nèi)外總胰島素含量水平均升高,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05或p0.01),且呈劑量依賴關(guān)系。(2)DMDD對(duì)MIN6細(xì)胞炎癥因子表達(dá)的影響:與PA組相比,DMDDL組、DMDDM組、DMDDH組、TAK-242組中IL-6、TNF-α、MCP-1 m RNA和含量水平降低,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05或p0.01或p0.001),且呈劑量依賴關(guān)系。(3)DMDD對(duì)MIN6細(xì)胞凋亡的影響:Annexin-V-FITC/Pl凋亡試劑盒、Hoechst33342/PI熒光雙染試劑盒檢測(cè)結(jié)果均表明,與PA組相比,DMDDL組、DMDDM組、DMDDH組、TAK-242組中MIN6細(xì)胞總凋亡率均降低,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05或p0.01或p0.001),且呈劑量依賴關(guān)系。透射電子顯微鏡觀察MIN6細(xì)胞凋亡形態(tài)結(jié)果表明,與PA組相比,DMDDL組、DMDDM組、DMDDH組、TAK-242組可以改善PA所致的MIN6細(xì)胞凋亡形態(tài),且呈劑量依賴關(guān)系。實(shí)時(shí)熒光定量PCR和western blot結(jié)果表明,與PA組相比,DMDDM組、DMDDH組、TAK-242組Caspase-3、Bax m RNA水平均降低,Bcl-2 m RNA和蛋白水平均升高,Bcl-2/Bax升高,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05或p0.01或p0.001),且呈劑量依賴關(guān)系。與PA組相比,DMDDH組、TAK-242組Caspase-3、Bax蛋白水平均降低,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05或p0.01),且呈劑量依賴關(guān)系。2、DMDD對(duì)MIN6細(xì)胞TLR4/My D88/NF-κB信號(hào)通路的影響:與PA組相比,LPS+PA組中TLR4 m RNA和蛋白、My D88 m RNA和蛋白、NF-κB p65 m RNA和細(xì)胞核p-NF-κB p65蛋白、細(xì)胞漿p-IκBα蛋白水平均上調(diào),DMDDH+PA組、TAK-242+PA組中TLR4 m RNA和蛋白、My D88 m RNA和蛋白、NF-κB p65 m RNA和細(xì)胞核p-NF-κB p65蛋白、細(xì)胞漿p-IκBα蛋白水平均下調(diào),差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。與LPS+PA組相比,LPS+DMDDH+PA組中TLR4 m RNA和蛋白、My D88 m RNA和蛋白、NF-κB p65 m RNA和細(xì)胞核p-NF-κB p65蛋白、細(xì)胞漿p-IκBα蛋白水平均下調(diào),差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。與TAK-242+PA組相比,TAK-242+DMDDH+PA組中TLR4 m RNA和蛋白、My D88 m RNA和蛋白、NF-κB p65 m RNA和細(xì)胞核p-NF-κB p65蛋白、細(xì)胞漿p-IκBα蛋白水平均下調(diào),差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。結(jié)論:楊桃根中DMDD可升高PA誘導(dǎo)的MIN6細(xì)胞胰島素水平降低,可減輕PA誘導(dǎo)的MIN6細(xì)胞炎癥反應(yīng),可減輕PA誘導(dǎo)的MIN6細(xì)胞凋亡。DMDD保護(hù)MIN6細(xì)胞抗PA誘導(dǎo)功能障礙的作用可能部分機(jī)制是通過(guò)下調(diào)TLR4/My D88/NF-κB信號(hào)通路來(lái)實(shí)現(xiàn)的。
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R285

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2678713