補腎舒脊顆粒通過BMP通路延緩強直性脊柱炎異位骨化的機制研究

發(fā)布時間：2020-05-24 05:34

【摘要】：目的以DBA/1雄性小鼠和人骨髓間充質(zhì)干細胞為研究對象,通過觀察小鼠雙后足腫脹、組織形態(tài)學(xué)變化和細胞誘導(dǎo)膜內(nèi)成骨現(xiàn)象,探討補腎舒脊顆粒通過BMP通路延緩強直性脊柱炎異位骨化的機制。方法1.動物實驗:選取體重25±5g,周齡12周的DBA/1雄性小鼠40只,隨機分為中藥高劑量組、中藥中劑量組、中藥低劑量組、西藥組(洛索洛芬鈉組)和模型組,每組8只。當小鼠周齡為14周時,分別給予小鼠相應(yīng)藥物,于小鼠周齡的第20、22、24周時觀察其雙后足腫脹程度,并進行統(tǒng)計腫脹評分。在小鼠周齡第24周時取雙后足前部及足跟韌帶附著點部位標本病理切片,HE染色光鏡下觀察組織病理學(xué)形態(tài)結(jié)構(gòu)的變化。2.細胞實驗:將人原代BMSCs細胞傳代擴增至第4代,直接種于六孔板、T-25培養(yǎng)瓶中,隨機分為中藥高劑量、中藥中劑量組、中藥低劑量組、西藥組(洛索洛芬鈉組)和空白組。然后使用間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)基將上述細胞培養(yǎng)至90%以上后,再改用誘導(dǎo)培養(yǎng)基及含藥血清進行誘導(dǎo)培養(yǎng),28天后提取細胞的RNA和蛋白,并檢測目標因子的表達。結(jié)果1.動物實驗:⑴小鼠足部腫脹程度比較:各組小鼠14周齡后,均逐漸出現(xiàn)腳趾發(fā)紅、腫脹、腳趾強直和腳趾變形等表現(xiàn)。且隨著小鼠周齡的增加,腫脹程度也逐漸增加。在小鼠第20周時,各組之間比較有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),其中中藥高劑量組比低劑量組、模型組腫脹程度輕(P0.05);中藥中劑量組比模型組腫脹程度輕(P0.05)。在小鼠第22周時,各組之間比較有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),中藥高劑量組與中劑量組均比模型組腫脹程度輕(P0.05);在小鼠第24周時,各組之間比較有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),其中中藥高劑量組、中劑量組與西藥組均比模型組腫脹程度輕(P0.05)。在中藥中劑量小鼠中,其24周齡較20周齡時腫脹程度重(P0.05)。⑵小鼠雙后足前部及足跟韌帶附著點部位病理評分比較:與模型組比較,補腎舒脊顆粒各劑量組及西藥組評分均低于模型組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。2.細胞實驗:⑴補腎舒脊顆粒對BMP-4因子的影響比較:與模型組比較,西藥組mRNA水平增加(P0.05);高劑量組、中劑量組mRNA與蛋白表達水平降低,具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。與西藥組比較,中藥中劑量組mRNA與蛋白表達水平降低,具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。⑵補腎舒脊顆粒對Smad-4因子的影響比較:與模型組相比較,中藥高劑量組、中劑量組以及低劑量組mRNA與蛋白表達水平降低,具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。與西藥組比較,中藥高、中、低各劑量組mRNA與蛋白表達水平降低,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。⑶補腎舒脊顆粒對Runx-2因子的影響的比較:補腎舒脊顆粒對Runx-2 mRNA影響的比較:與模型組比較,中藥低劑量組和中藥中劑量組mRNA與蛋白表達降低,具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。與西藥組比較,中藥低、中、高劑量組mRNA與蛋白表達降低,具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。實驗結(jié)論1.補腎舒脊顆粒高劑量、中劑量和西藥均能在不同程度上改善DBA/1小鼠雙后足的腫脹程度,且高劑量能夠延緩小鼠雙后足的腫脹程度。而西藥雖然也能夠延緩小鼠雙后足的腫脹程度,但起效時間較補腎舒脊顆粒慢。2.病理:補腎舒脊顆粒各劑量組與西藥組均能在不同程度上改善DBA/1小鼠雙后足組織形態(tài)學(xué)變化,但補腎舒脊顆粒與西藥相比差異不明顯。3.補腎舒脊顆粒各劑量組均能不同程度抑制BMP-4、Smad-4和Runx-2因子的表達,說明補腎舒脊顆粒可以通過BMP通路延緩強直性脊柱炎異位骨化。
【圖文】：

細胞生長曲線,人骨髓間充質(zhì)干細胞,番紅,誘導(dǎo)分化