【摘要】：目的:探討蟾蜍他靈對急性髓細(xì)胞白血病HL-60細(xì)胞株的增殖和凋亡作用的影響,從而為蟾蜍他靈治療急性髓細(xì)胞白血病提供理論依據(jù)。方法:采用不同濃度的蟾蜍他靈作用于急性髓系白血病細(xì)胞HL-60;(1)細(xì)胞增殖測定:應(yīng)用臺盼藍(lán)染色實驗對應(yīng)用蟾蜍他靈的HL-60細(xì)胞進行染色,進行細(xì)胞計數(shù),計算細(xì)胞增殖抑制劑細(xì)胞活力,繪制增殖抑制曲線;應(yīng)用MTT法檢測細(xì)胞活力及抑制率,并繪制曲線;應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞內(nèi)DNA含量及細(xì)胞周期,對蟾蜍他靈作用后細(xì)胞內(nèi)DNA含量及周期進行檢測。(2)細(xì)胞凋亡測定:應(yīng)用Hochest33258/PI染色法對不同濃度蟾蜍他靈作用后細(xì)胞雙染后于熒光顯微鏡下對細(xì)胞形態(tài)及數(shù)量進行觀察;應(yīng)用Annexin V-FITC/PI雙標(biāo)記法對HL-60細(xì)胞進行雙染,應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡百分率,對蟾蜍他靈作用于HL-60細(xì)胞后對細(xì)胞增殖及凋亡進行檢測。結(jié)果:1.蟾蜍他靈能夠有效地抑制HL-60細(xì)胞的增殖,并呈藥物濃度依賴性,通過計算其IC50為6.627μg/ml,且可以阻滯細(xì)胞在G0/G1期,從而抑制細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)凋亡。2.通過用Hoechst33258/PI雙染實驗和Annexin V-FITC/PI雙標(biāo)記法實驗提示蟾蜍他靈能誘導(dǎo)急性髓系白血病HL-60細(xì)胞凋亡;3.蟾蜍他靈1.25μg/ml的藥物濃度即可出現(xiàn)細(xì)胞凋亡,在蟾蜍他靈濃度為5.0μg/ml~10.0μg/ml可以達(dá)到較好的誘導(dǎo)凋亡作用,與第一部分實驗對細(xì)胞增殖抑制測定所得到的實驗結(jié)果相一致。結(jié)論:1.本實驗通過對細(xì)胞增殖能力的檢測,應(yīng)用臺盼藍(lán)拒染實驗、MTT實驗以及流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞內(nèi)DNA含量及細(xì)胞周期實驗方法,揭示蟾蜍他靈對急性髓系白血病HL-60細(xì)胞具有抑制增殖作用,且呈現(xiàn)出藥物濃度依賴性;2.通過細(xì)胞凋亡測定實驗,得出蟾蜍他靈可以通過抑制HL-60細(xì)胞增殖活力,誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的結(jié)論,且其誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞凋亡的作用受藥物濃度的影響,1.25μg/ml的藥物濃度即可出現(xiàn)細(xì)胞凋亡,在蟾蜍他靈濃度為5.0μg/ml-10.0μg/ml可以達(dá)到較好的誘導(dǎo)凋亡作用;3.蟾蜍他靈具有抑制急性髓系白血病HL-60細(xì)胞株增殖和誘導(dǎo)凋亡的作用;4.本研究已明確蟾蜍他靈對HL-60細(xì)胞具有抑制增殖和誘導(dǎo)凋亡的作用,但對其具體作用機制還尚未明確,有待進一步研究。
【圖文】：

陜西中醫(yī)藥大學(xué) 2017 屆碩士學(xué)位論文27.24%，24.48%，15.86%，13.79%，見圖 1。結(jié)果顯示蟾蜍他靈濃度增高，隨之活胞數(shù)逐漸減少，表現(xiàn)出明顯的量效關(guān)系。而在濃度區(qū)間為 5μg/ml~10μg/ml 蟾蜍他的細(xì)胞生長抑制率在與 DMSO 對照組對比后發(fā)現(xiàn)均有顯著性差異。

圖2：臺盼藍(lán)實驗結(jié)果繪制出細(xì)胞活力及增殖抑制曲線
【學(xué)位授予單位】：陜西中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R285

【參考文獻(xiàn)】

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