【摘要】：金佛山雪膽(Hemsleya pengxianensis var.jinfushanensis)為葫蘆科(Cucurbitaceae)雪膽屬(Hemsleya)植物,主要分布于云南、四川、貴州、重慶等地區(qū),富含葫蘆烷型四環(huán)三萜類、木脂素類、有機酸類等成分。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明,金佛山雪膽具有抗腫瘤、抗菌消炎、抗HIV、保肝、治療胃潰瘍等活性。本課題在前期的研究基礎(chǔ)上對金佛山雪膽進行系統(tǒng)深入的研究。目的:研究金佛山雪膽的化學(xué)成分,并對分離得到的單體化合物進行細胞毒活性篩選;研究細胞毒活性好的單體化合物的抗腫瘤活性及作用機制,為開發(fā)新的抗腫瘤藥物提供理論依據(jù)。方法:采用硅膠柱色譜、ODS柱色譜、HPLC制備柱色譜、重結(jié)晶等方法,對金佛山雪膽乙酸乙酯部位的化學(xué)成分進行研究,根據(jù)單體化合物的IR、MS、NMR等波譜數(shù)據(jù)分析鑒定化合物結(jié)構(gòu);建立S180荷瘤小鼠模型,分組給藥后取腫瘤組織,計算抑瘤率,評價雪膽乙酸乙酯部位的抑瘤作用;應(yīng)用MTT法篩選所分離化合物對HT29細胞的細胞毒活性;采用PI染色法及Annexin V-FITC/PI雙染法檢測16,25-二乙�；�-葫蘆素F和雪膽甲素對細胞周期及凋亡的影響;應(yīng)用微絲、微管蛋白免疫熒光及Hoechst33342染色法觀察16,25-二乙酰基-葫蘆素F和雪膽甲素對細胞骨架的影響。結(jié)果:從金佛山雪膽乙酸乙酯部位中共分離鑒定了30個化合物,分別為:hemslepenside J(1)、hemslepenside K(2)、hemslepenside L(3)、hemslepenside M(4)、hemslepenside N(5)、hemslepenside O(6)、hemslepenside P(7)、hemslepenside Q(8)、hemslepenside R(9)、hemslepenside S(10)、scandenoside R8(11)、3-O-β-D-glucopyranosyl-3β,27-dihydroxycucurbita-5,24(Z)-diene-11-one-27-O-β-D-glucopyr anoside(12)、短柄雪膽苷A(13)、3β,11,26-trihydroxycucurbita-5,24(E)-diene-26-O-β-D-glucopyranosyl(1→6)-β-D-glucopyranoside(14)、carnosifloside I(15)、hemslepenside I(16)、jinfushanoside C(17)、jinfushanoside D(18)、hemslepenside G(19)、hemslepenside H(20)、scandenoside R3(21)、scandenoside R4(22)、jinfushanoside J(23)、carnosiflosideⅤ(24)、carnosiflosideⅢ(25)、scandenoside R6(26)、jinfushanoside K(27)、雪膽雙糖(28)、16,25-二乙�；�-葫蘆素F(29)、雪膽甲素(30)。金佛山雪膽乙酸乙酯部位高中低三個劑量對腫瘤生長的抑制率分別為47.83%、37.27%、30.43%。對30個化合物進行細胞毒活性篩選,結(jié)果表明化合物29和30的細胞毒活性強;細胞周期實驗結(jié)果顯示,與陰性對照組比較,化合物29和30均能顯著誘導(dǎo)結(jié)腸癌HT29細胞的細胞周期阻滯于G_2/M期(P0.05),呈劑量依賴性;細胞凋亡實驗結(jié)果顯示,與陰性對照組比較,化合物29和30均能顯著引起HT29細胞的細胞凋亡及細胞壞死數(shù)量的增加(P0.05),呈劑量依賴性;免疫熒光染色實驗結(jié)果顯示,化合物29和30均能引起HT29細胞肌動蛋白的聚集,嚴重破壞微絲細胞骨架結(jié)構(gòu)。結(jié)論:從金佛山雪膽乙酸乙酯部位共分離得到30個化合物,其中1~10為新化合物。金佛山雪膽乙酸乙酯部位能顯著抑制S180荷瘤鼠的腫瘤生長。16,25-二乙�；�-葫蘆素F和雪膽甲素對包括結(jié)腸癌HT29細胞在內(nèi)的多種癌細胞具有較強的細胞毒活性,其作用機制與誘導(dǎo)肌動蛋白聚集,破壞細胞骨架,阻滯細胞周期及促進細胞凋亡有關(guān)。
【圖文】：

藥用歷史久遠，在民間草藥著作及 1977 年版的《中華人民作為民間用藥，以抗菌消炎、清熱解毒等功效應(yīng)用于方劑組腸炎、上呼吸道感染等病[2-4]。近幾年，關(guān)于雪膽屬植物的國章在李瑩等[1]綜述的基礎(chǔ)上，補充了近 3 年關(guān)于該屬化學(xué)成植物化學(xué)成分型四環(huán)三萜及其皂苷014 年底，已發(fā)現(xiàn)了 50 余種葫蘆烷型四環(huán)三萜化合物[4-20]，，，結(jié)構(gòu)差異集中于母核的 C-2、C-3、C-7、C-11 和 C-16，均可能發(fā)生變化。2015 年至今關(guān)于雪膽屬化學(xué)成分的報道明置依然相對固定，現(xiàn)總結(jié)如下：其苷元及片段結(jié)構(gòu)見圖 1

Hemsloside-Ma4和hemsloside-Ma5的結(jié)構(gòu)
【學(xué)位授予單位】：濟南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R284.1;R285

【參考文獻】

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本文編號：2678119