【摘要】：目的:觀察天芪益智顆粒對阿爾茨海默癥(Alzheimer's disease,AD)模型大鼠認(rèn)知功能以及大腦組織相關(guān)蛋白表達(dá)的影響,探究其在阿爾茨海默癥大鼠模型中的腦保護(hù)作用和機(jī)制,為天芪益智顆粒對阿爾茨海默癥的治療提供研究基礎(chǔ)。方法:1.將90只雄性4月齡SPF級SD大鼠,按隨機(jī)數(shù)字表法分為假手術(shù)對照組、模型組、石杉堿甲(陽性藥)組,天芪益智顆粒高、中、低劑量組,每組15只。除對照組外,其余每組均通過Aβ1-42海馬CA1區(qū)注射制備AD模型。2.手術(shù)后一周,天芪益智顆粒高、中、低劑量組分別連續(xù)40天灌胃給予0.76、0.38和0.19g/kg的天芪益智顆粒,石杉堿甲組給予石杉堿甲0.02mg/kg;假手術(shù)組和模型組同時給予等量生理鹽水。3.給藥結(jié)束后,使用Morris水迷宮對大鼠進(jìn)行定位巡航實(shí)驗(yàn)與空間探索實(shí)驗(yàn),測試組間逃避潛伏期、目標(biāo)象限停留時間等,比較各組大鼠的認(rèn)知學(xué)習(xí)能力差異。4.定量蛋白質(zhì)組學(xué)串聯(lián)質(zhì)譜標(biāo)簽(Tandem Mass Tag,TMT)標(biāo)記技術(shù)比較模型組大鼠和天芪益智顆粒中劑量組大鼠的大腦組織蛋白的差異表達(dá),進(jìn)一步使用Uniprot、PANTHER和STRING數(shù)據(jù)庫對差異蛋白進(jìn)行生物信息學(xué)分析,研究天芪益智顆�？赡艿淖饔冒袠�(biāo)和治療機(jī)制。5.以β-actin做為內(nèi)參,使用免疫印跡(Western Blot)法,對蛋白組學(xué)結(jié)果中發(fā)生差異表達(dá)的蛋白丙酮酸竣化酶(pyruvate carboxylase,Pc)、蘋果酸脫氫酶(Malate dehydrogenase,Mdh2)和Fas相聯(lián)的死亡結(jié)構(gòu)域蛋白(Fas-associated death domain,Fadd)進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果:1.Morris水迷宮實(shí)驗(yàn):①定位巡航實(shí)驗(yàn):與假手術(shù)組相比,模型組大鼠的逃避潛伏期和路程顯著延長(P0.01);與模型組相比,天芪益智顆粒高、中劑量組和石杉堿甲組大鼠的逃避潛伏期和路程明顯縮短(P0.05)。②空間探索實(shí)驗(yàn):與模型組相比,天芪益智顆粒高、中、低劑量組與石杉堿甲組大鼠穿過目標(biāo)象限的次數(shù)顯著增加(P0.01)。2.TMT定量蛋白質(zhì)組學(xué):天芪益智顆粒對大鼠大腦皮層和海馬中37個AD相關(guān)蛋白的表達(dá)水平有顯著影響(P0.05),其中超過50%的差異蛋白與能量代謝和抗細(xì)胞凋亡有關(guān),其他蛋白質(zhì)則與神經(jīng)傳遞、神經(jīng)發(fā)育、細(xì)胞骨架和Aβ生成有關(guān)。這些差異蛋白質(zhì)中除了與凋亡和Aβ生成相關(guān)的蛋白質(zhì)外,其他蛋白質(zhì)的表達(dá)增加。3.免疫印跡(Western Blot):天芪益智顆粒高劑量組大鼠大腦組織中Pc和Mdh2的表達(dá)與模型組相比顯著增加(P0.01),中、高劑量組Fadd的表達(dá)與模型組相比顯著增加(P0.01),與蛋白質(zhì)組學(xué)研究結(jié)果基本一致。結(jié)論:天芪益智顆粒可改善Aβ1-42誘導(dǎo)的AD模型大鼠的認(rèn)知功能障礙,其治療機(jī)制可能涉及多個過程的調(diào)節(jié),主要包括促進(jìn)能量代謝和神經(jīng)傳遞、抗凋亡等途徑。本研究為天芪益智顆粒用于阿爾茨海默癥的治療提供理論基礎(chǔ)。
【圖文】：

２００邋？逡逑０邋邐■邐邐邐邐邐邐邐邐邐逡逑－１５邐－１０邐－５邐０邐５邐１０邐１５逡逑Ｄｅｌｔａ邋Ｍａｓｓ邋［ｐｐｍ］逡逑圖ｉ．質(zhì)譜全掃描范圍的全體離子質(zhì)量偏差分布逡逑②肽段的質(zhì)量數(shù)及電荷數(shù)信息統(tǒng)計逡逑如圖２所示，質(zhì)譜測得的肽段多以２＋、３＋和４＋及以上電荷的形式存在，，質(zhì)荷比主要逡逑富集在３５０？１２００附近，肽段分子量主要富集在１０００？２５００附近，表明樣品得到適當(dāng)?shù)拿稿义辖�，質(zhì)譜儀能夠覆蓋絕大多數(shù)肽段信息。逡逑Ａ邐Ｂ逡逑１Ｂ邐１８逡逑

逑３．３差異表達(dá)蛋白的ＧＯ分析結(jié)果逡逑如圖３所示，ＧＯ分類結(jié)果顯示，這些差異蛋白的分子功能（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ邋Ｆｕｎｃｔｉｏｎ）逡逑涉及蛋白結(jié)合活性、催化活性、受體活性、信號傳導(dǎo)活性、結(jié)構(gòu)分子活性、轉(zhuǎn)運(yùn)活性（圖逡逑３Ａ）；生物學(xué)過程（Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ邋Ｆｕｎｃｔｉｏｎ）涉及生物調(diào)節(jié)、生物合成、細(xì)胞過程、發(fā)育過逡逑程、細(xì)胞定位、代謝過程、應(yīng)激反應(yīng)等（圖３Ｂ）；細(xì)胞組分（Ｃｅｌｌｕｌａｒ邋Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ）包括逡逑大分子復(fù)合物、細(xì)胞膜、細(xì)胞器（圖３Ｃ）；信號通路（Ｐａｔｈｗａｙ）涉及ＡＴＰ合成、凋亡逡逑信號通路、ＲｈｏＧＴＰ酶對細(xì)胞骨架的調(diào)控、Ｆａｓ信號通路、谷氨酰胺－谷氨酸轉(zhuǎn)化通路、逡逑糖酵解、三羧酸循環(huán)信號通路（圖３Ｄ）。逡逑這些蛋白質(zhì)中，５１％、２１％和１８％的蛋白分別具有催化活性、轉(zhuǎn)運(yùn)活性和蛋白結(jié)合逡逑活性（圖３Ａ）。大多數(shù)蛋白參與代謝過程（３３％）、細(xì)胞過程（２８％）或構(gòu)成細(xì)胞組分逡逑（１７％），其他與生物調(diào)節(jié)過程有關(guān)（圖３Ｂ）。４３％定位于細(xì)胞，２３％定位于膜，其他逡逑定位于大分子復(fù)合物或細(xì)胞器（圖３Ｃ）。值得注意的是，近半數(shù)蛋白質(zhì)與能量代謝相關(guān)，逡逑其中１６．７％與丙酮酸代謝有關(guān)，８．３％與ＡＴＰ合成有關(guān)，８．３％與糖酵解有關(guān)，８．３％與逡逑ＴＣＡ循環(huán)有關(guān)；其次，超過２０％的蛋白質(zhì)與細(xì)胞凋亡有關(guān)，其中１６．７％的蛋白質(zhì)與凋逡逑亡信號通路有關(guān)
【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5

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